Tiến hành sắc kí cột silicagen để phân chia cặn thô của dịch chiết bằng etyl axetat. Khi rửa giải cột bằng hệ dung môi chlorofom : metanol tỉ lệ (9:1)
thu được 24 mg chất rắn vô định hình, nóng chảy ở 269-2700
C, có Rf D= 0,53 trong hệ dung môi chlorofom – metanol (70:10) kí hiệu là chất EA-1.
Quan sát phổ 13
C-NMR và DEPT chất EA-1 cho thấy có tín hiệu của 35 nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon liên kết với oxi đặc trưng cho phần đường (các pic trong vùng từ 61,52 ppm đến 100,85 ppm). Có tín hiệu ở 140,06 ppm và 121,82ppm đặc trưng cho liên kết đôi kiểu olephin. Các phổ IR và 1
H-NMR cũng xác nhận sự có mặt của liên kết đôi
(1644cm-1, δH-6 = 5,38 ppm) và hấp thụ của nhiều nhóm hyđroxyl (3380cm-
1). Trên phổ 1
H-NMR cũng quan sát thấy một doublet xuất hiện ở 4,40 ppm
với J=7,9Hz và C’-1tương ứng ở 100,85 ppm. Khi thuỷ phân bằng dung dịch
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
FT-IR, NMR và các đặc trưng hoá học cho phép nghĩ đến chất EA-1 có công thức phân tử của glucosit C35H60O6. Khi so sánh điểm chảy của nó với điểm chảy của glycosit chuẩn của phòng thí nghiệm có thể khẳng định chất EA-1 là
β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit.
Độ dịch chuyển hoá học các nguyên tử C của EA- 1 xem bảng 3.2.
H3C CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 O O HO H OH H H H OH H HO 1 3 5 7 9 10 11 13 15 17 18 19 20 21 22 24 25 26 27 28 29 1' 6' 3' β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit 3.4.5. Chất EA-2
Thay đổi dung môi rửa giải cột bằng hệ chlorofom : metanol tỉ lệ (8:2) thu được một chất tinh khiết khác chúng tôi kí hiệu là EA-2. Chất EA-2 sau khi được rửa nhiều lần bằng Clorofom thu được 11 mg chất rắn màu trắng, cho Rf = 0,72 trong hệ dung môi clorofom-metanol tỷ lệ 7:3.
Trong phổ FT-IR chất EA-2 cho các đặc điểm về tần số dao động hóa trị ở 3229,57 cm-1
đến 3333,73( 3500) cm-1, vân rộng đặc trưng cho nhóm OH có
liên kết hiđro liên phân tử; vân 1642,16 cm-1
đặc trưng cho axit cacboxylic thơm, vân. Dao động của liên kết C-H của vòng thơm cũng phát hiện thấy ở ν max ở 3048 cm-1
và νmax ở 2924 cm-1 đặc trưng cho dao động của các lien kết C-H no. Phổ NMR cho thấy tín hiệu của 10 nguyên tử hiđro và 15 nguyên tử cacbon. Phổ 1
H-NMR cho δH của 1H ở 5,54 ppm có J=3,0 và 3,5 Hz là proton
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
cộng hưởng ở δ=82,559 ppm. Có 1H cho tín hiệu ở 3,05 ppm có J= 3,0 và 3,5 Hz có 1H cho tín hiệu ở 3,5 ppm , m. Phổ DEPT cho biết các tín hiệu này thuộc về nhóm CH2. Phổ 1
H-NMR còn cho biết 7 tín hiệu của các proton thuộc vòng thơm cộng hưởng trong vùng từ 6,83 ppm đến 7,49 ppm, nguyên tử cacbon tương ứng liên kết với các nguyên tử hiđro này có tín hiệu ở δ=37,57ppm.
Phổ DEPT cho biết có 15 nguyên tử cacbon trong đó có 12 nguyên tử cacbon tham gia vòng thơm. Có 6 nguyên tử cacbon bậc 4, có 8 nhóm CH và
1 nhóm CH2. Tín hiệu ở vùng trường yếu với δ=171,62 ppm là tín hiệu của
cacbon nhóm cacboxy Tín hiệu ở δ=163,23 ppm là tín hiệu của nguyên tử cacbon liên kết với nhóm OH ở vòng A, còn δ= 159,17 ppm là tín hiệu của nguyên tử cacbon liên kết với nhóm OH ở vòng B. Tín hiệu rất mạnh ở 129,06 ppm là tín hiệu của 2 nguyên tử cacbon tương đương trong vòng B đó chính là tín hiệu của C2‖ và C6‖, tín hiệu mạnh nữa ở 116,37 ppm là tín hiệu của 2 cacbon tương đương còn lại của vòng B chúng tôi quy kết đó là tín hiệu của C3‖ và C5‖. Hai nguyên tử cacbon bậc bốn C1’ và C1‖ cộng hưởng ở các độ chuyển dịch tương ứng với δ= 141,72 ppm và δ=130,49ppm. Dựa trên phổ DEPT, phổ HSQC , phổ HMBC (bảng 3.6) có thể đưa ra công thức của chất EA- 2 như sau và gọi tên là 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)- etan-1-ol.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 3.6 : Số liệu phổ 1
H và 13C-NMR (125MHz, MeOD) của EA-2
Vị trí δC (ppm) δH (ppm) ; J= Hz C → H C-1 82,59 5,55 ; 1H, dd, J=3,0 và 3,5 H2; H2’’ và H6’’ C-2 35,57 3,09; 1H, dd, J= 3,0 và 3,5 3,5, 1H, m H1, H6’ C-1’ 141,72 H5’, H6’ C-2’ 109,53 H2, H4’, H6’ C-3’ 163,23 H4’, H5’, H6’. C-4’ 116,81 6,81, 1H, m H5’ và H6’ C-5’ 137,49 7,47, 1H, dd, 7,5 và 7,5 H4’ và H6’ C-6’ 119,34 6,81, 1H, m H5’ H6’ và H2 C-1’’ 130,49 H1,H2 ’’ ,H3’’, H5’’, H6’’ C-2’’ 129,06 7,33, 1H, m H3’’, H5’’, H6’’ C-3’’ 116,37 6,87, 1H, d, j=8,5 và 3,0 H2’’, H5’’, H6’’ C-4’’ 159,17 H2’’, H3’’, H5’’, H6’’ C-5’’ 116,37 6,87, 1H, d, j=8,5 và 3,0 H3’’, H2’’, H6’’ C-6’’ 129,06 7,33, 1H, m H3’’, H5’’, H2’’ C=O 171,62
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.13: Phổ FT-IR của EA2
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.15: Phổ 13C của EA2
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.17: Phổ HMBC của EA2
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
3.5. Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết tổng số
Các chất tổng số được chiết, tách bằng dung môi có độ phân cực khác nhau sau khi làm khô kiệt, loại bỏ hoàn toàn dung môi được gửi tới phòng thí nghiệm vi sinh trường Đại học Y khoa Thái Nguyên để thử tác dụng sinh học của chúng. Kết quả nêu ở bảng 2.3 và hình 2.3 cho thấy dịch chất thu được từ các dịch chiết của thân cây Cối xay đều có tác dụng kháng khuẩn mạnh đối với các khuẩn: Escherichia coli, Salmonella spp, Shigella spp và Staphylococcus
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
KẾT LUẬN
1. Nghiên cứu sàng lọc hoá thực vật của thân cây Cối xay(Abutilon indicum(L) Sweet) đã phát hiện thấy 8 nhóm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh lý cao: steroit, ankanoit, cumarin, saponin, đường khử, glycozit tim, catechin,poliphenol, flavonoit.
2. Từ thân cây Cối xay lần đầu tiên đã phân lập và dựa vào các đặc trưng hoá lý, các số liệu phổ NMR, FT-IR đã nhận dạng được cấu trúc của 5 hợp chất hữu cơ là: β-sitosterol (HA1); 2-acetylphenyl acetate(HA2); 2-
[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat(HA3); β-
Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit (EA1) và 1-(4’’_hidroxyphenyl)-2-
(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol(EA2). Trong số 5 chất này thì các chất HA-2, HA-3, EA-2 là những chất chưa được tìm thấy trong cây Cối xay. 3. Cặn chiết tổng của cây Cối xay (Abutilon indicum(L) Sweet) có tác dụng với các chủng vi sinh vật kiểm định là: Staphylococcus aureus, E.coli, Salmonella spp và Shigell spp.
KIẾN NGHỊ
Cây Cối xay là một cây thuốc quý có nhiều tác dụng trong y học hiện tại còn chưa được chú ý. Vì vậy, chúng tôi đề nghị với các cấp có thẩm quyền tiếp tục cho nghiên cứu một cách sâu rộng hơn về cây Cối xay nhằm phục vụ tốt trong đời sống nhân dân.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Đinh Công Bảy - Bantinsuckhoe – 28/7/2011
2. Nguyễn Tiến Bân (1997). Cẩm nang tra cứu và nhận biết các họ thực vật
hạt kín (Magnoliophyta, Angiospermae) ở Việt Nam. NXB nông nghiệp Hà nội, tr 30, 163.
3. Đỗ Huy Bích (2006) cùng các tác giả khác. Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam. Tập 1, NXB Khoa học và kỹ thuật Hà Nội, tr 526 – 528.
4. Võ Văn Chi: 250 cây thuốc thông dụng. NXB Hải Phòng (2005); Cây thuốc trị bệnh thông dụng. NXB Thanh Hóa, 2000, tr 92 – 93; Sách tra cứu tên cây cỏ Việt Nam, NXB Giáo Dục, 2007, tr 36, 53, 66, Từ điển cây thuốc Việt Nam, NXB y học 1999, tr 309 – 310; Từ điển thực vật thông dụng, Tập I, NXB khoa học và kỹ thuật, 2003, tr 151 – 152.
5. Danh lục các loài thực vật Việt Nam. Tập II, NXB Khoa học và kỹ thuật, (2003), tr 556 – 569.
6. Dược Điển Việt Nam. NXB Y học (2002), tr 339 – 340.
7. Quốc Dương (2010). 500 bài thuốc đông y gia truyền trị bách bệnh. NXB từ điển bách khoa.
8. Nguyễn Văn Đàn, Vũ Xuân Quang, Ngô Ngọc Khuyến (2000). Sử dụng thuốc đông y thiết yếu. NXB y học Hà nội, tr 114 – 116.
9. Lê Trần Đức (1997). Cây thuốc Việt Nam. NXB Nông Nghiệp, tr 594 – 595.
10. Phạm Hoàng Hộ (2003,). Cây cỏ Việt Nam. Quyển 1, NXB Trẻ, tr 519.
11. Phạm Hoàng Hộ (2006). Cây có vị thuốc ở Việt Nam. NXB Trẻ, , tr 105 – 106.
12. Hội y học cổ truyền tỉnh Lạng Sơn (2000). Những bài thuốc dân gian gia
truyền Xứ Lạng. Sở Văn Hóa – thông tin tỉnh Lạng Sơn.
13. Nguyễn Quốc Khang, Nguyễn Đức Bách (2001). Thăm dò phương pháp
chiết rút thành phần hợp chất tự nhiên từ cây Cối Xay (Abutilon indicum). Tạp chí Dược học số 2, tr 13 – 16.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
14. Đỗ Tất Lợi (2004). Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. NXB y học, tr 144 – 145, 601 – 602.
15. Luongyphanngoc.blogtiengviet.net.
16. Trần Đình Thắng (2007). Nghiên cứu thành phần hóa học cây Cối Xay (Abutilon indicum (L) Sweet), cây Hồng Bì (Clause Na Lansium (lour) Skeels). Cây Trám Trắng (Canarium Album (lour) Raeusch) và cây Trám đen (Canarium Nigrum (lour) Engl) ở Việt Nam. Luận án tiến sĩ hóa học,.
17. Nguyễn Viết Tựu, Nguyễn Văn Đàn (1985): ―Phương pháp nghiên
cứu hóa học cây thuốc‖, NXB y học, chi nhánh TP.HCM 18. Vietgle – tri thức việt – chi Abbutilon.
19. www.thuocdongduoc.vn
TIẾNG ANH
20. Abdul Rahuman A, Gopalakrishnan Geetha, Venkatesan P, Kannappan
Geetha (2008). Isolation and identification of mosquito larvicidal compound from Abutilon indicum (Linn.) Sweet. Parasitol Research, 102, pp 981 – 988.
21. Adisakwattana S., Pudhom k, Yibchok – anun S ( 2009), Influence of
methanolic extract from Autilon indicum leaves in normal and streptozotocin – induced diabetic rats. African Journal of Biotechnology, Vol 8, No 10, pp 2011 – 2015.
22. Ahmed M, Amin S, Islam M, Takahashi M, Okuyama E, Hossain CF
(2000). Analgesic principle from Abutilon indicum. Pharmazie, Vol 55, No 4, pp 314 – 316.
23. Chutwadee Krisanapun, Seong – Ho Lee, Penchom Peungvicha,
Rungravi Temsiririrkkul, Seung Joon Baek (2010). Antidiabetic Activities of Abutilon indicum (L) sweet are mediated by Enhancement of Adipocyte Differentiation and Activation of the Glut 1 Promote. Oxford journals, Vol 7, No 2, pp 1 – 9.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
24. Dharmesh K. Golwala, Laxman D. Patel, Santosh K. Vaidya, Sunil B. Bothara, Munesh Mani, piyush Patel (2010). Anticonvulsant activity of Abutilon indicum leaf. International journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Vol 2, No 1, pp 66 – 71.
25. Irana Matlawska, Maria Sikorska (2002). Flavonoid compounds in the flower of Abutilon indicum (L.) Sweet (Malvaceae). Acta Poloniac Pharmaccutica – Drug Research. Vol 59, No 3, pp 227 – 229.
26. J. Chem. Soc.Perkin trans. 1976 ; T1, p.578(ACD)
27. Liu Na, Jia Ling-yun và Sun Qi-shi (2008). Neolignans, a Coumarinolignan, Lignan Derivatives, and a Chromene: Anti – inflammatory Constituents from Zanthoxylum Wicennae. Nat. Prod, Vol 81, , pp 212 – 217.
28. Kaushik P., Kaushik D., Khokra S., Chaudhary B ( 2009)., Abutilon indicum (Atibala): Ethno – Botany, Phytochemistry and pharmacology – A Review. International Journal of pharmaceutical and clinical Research, Vol 1, No 1, pp 4 – 9.
29. Krisanapun C., Peungvicha P., Temsiririkkul R., Wongkrajang Y (2009),
Aqueou extract of Abutilon indicum Sweet inhibits glucose absorption and stimulates insulin secretion in rodents. Nutr Res, Vol 29, No 8, , pp 579 – 587. 30. Laurence (1999). Cytotoxic polyisoprenes and glycosides of long - chain
fatty alcohols from Dimocarpus fumatus. Phytochem, Vol 50, , pp 63 – 69.
31. M Ahmed, S Amin, Islam M, Takahashi M, Okuyama E, CFHossain
(2000,).Analsesi principle from Abutilon indicum. Pharmazie. 55 (4): 314-316.
32. Muhit Md. Abdul, Apu Apurba Sarker, Islam Md. Saiful, Ahmed
Muniruddin (2010). Cytotoxic and Antimicrobial Activity of the Crude Extract of Abutilon indicum. International Journal of Pharmacognosy and Phyto chemical Research, Vol 2, No 1pp 1 – 4.
33. Porchezhian E, Ansari SH (2005) . Hepatopro tective activity of Abuntilon indicum on experimental liver damage in rats. Phytomedicine, Vol 12, No 1, pp 62 – 64.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
34. PV Sharma, ZA Ahmed (1989). Two sesquiterpene lactones fromAbutilon indicum. Phytochemistry. , 28 (12): 3525.
35. Rajalakshmi Padma Vairavasundaram, Kalaiselvi Senthil (2009).
Antimycotic activity of the components of Abutilon indicum (Malvaceae),
Drug invention Today, Vol 1, No 2, pp 137 – 139.
36. Ranjan Kumar Giri, Sunil Kumar Kanungo, V.Jagannath Patro, Sujit Dahs, Durga Charan Sahoo (2009). Lipid lowering activity of Abutilon indicum (L.) leaf extracts in rats. Journal of Pharmacy Research J.Pharm, Vol 2, No 2, pp 1725 – 1727.
37. Ravi Rajurkar, Ritesh Jain, Narendra Matake, Prshant Aswar, SS
Khadbadi (2009), Anti – inflammatory Action of Abutilon indicum (L.) Sweet Leaves by HRBC Membrane Stabilization. Research J. Pharm, Vol 2, No 2, pp 415 – 416.
38. Seetharam YN, Chalageri G, Setty SR, Bheemachar (2002). Hypoglycemic activity of Abutilon indicum leaf extracts in rats. Fitoterapia, Vol 73, No 2,. Pp 156 – 159.
39. Vallabh Dehspande, Varsha M.Jadhav, V.J.Kadam (2009). In – vitro anti –
arthritic activity of Abutilon indicum (Linn.) Sweet. Journal of pharmacy Research, Vol 2, No 4, pp 644 – 645.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
PHỤ LỤC
Tên phổ Trang
I. Chất β- Sitosterol 62
Phổ FT-IR của β- Sitosterol 62
Phổ 1
H-NMR của β- Sitosterol 63
Phổ 13
C-NMR của β- Sitosterol 64
Phổ C13CPD & DEPT của β- Sitosterol 65
II.Chất 2-acetylphenyl acetate
Phổ FT-IR của 2-acetylphenyl acetate 66
Phổ 1H-NMR của 2-acetylphenyl acetate 67
Phổ 13C-NMR của 2-acetylphenyl acetate 69
Phổ C13CPD & DEPT của 2-acetylphenyl acetate 71
Phổ HMBC của 2-acetylphenyl acetate 73
Phổ HSQC của 2-acetylphenyl acetate 77
III. Chất 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat
Phổ FT-IR của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 79
Phổ 1H-NMR của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 80
Phổ 13C-NMR của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 83
Phổ DEPT của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 85
Phổ HMBC của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 87
Phổ HSQC của 2-[(N-bezoyl-L-phenylalanyl)amino]-3-phenylpropyl axetat 91
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Phổ 1
H-NMR của β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit 94
Phổ 13C của β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit 95
Phổ DEPT của β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit 96
V. Chất 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol.
Phổ FT-IR của 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol. 97
Phổ 1H-NMRcủa 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol. 98
Phổ 13C-NMR của 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol. 100
Phổ DEPT của 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol. 102
Phổ HMBC của 1-(4’’hidroxyphenyl)-2-(2’cacboxyl-3’-hidroxyphenyl)-etan-1-ol. 103