2.3.2.1 Phương phỏp nghiờn cứu ủặc ủiểm hỡnh thỏi một số loài bọ trĩ hại rau gia vị chủ yếu
a) Phương phỏp làm mẫu tiờu bản bọ trĩ
Ngay sau khi thu thập mẫu bọ trĩ từ cỏc bộ phận cõy trồng. Mẫu vật
ủược lựa chọn và ủặt vào ống eppendorf cú chứa cồn 700. Cú thể giữ mẫu trong thời gian dài bằng cỏch ngõm mẫu vào dung dịch Oudeman (hỗn hợp của glycerin 4ml, glacial acetic acide 8ml và alcohol 70 % 88ml) [42].
* Lưu giữ mẫu bọ trĩ bằng cỏch làm tiờu bản mẫu: theo phương phỏp của Mound L.A, 2007 [42].
- Vật liệu cần cú: lam lừm, lam phẳng, lamen, KOH (hoặc NaOH) 10%, nước cất, cồn 700, Glycerine, Bom Canada, Hoyer, bàn nhiệt hoặc tủ sấỵ
- Cỏc bước tiến hành:
+ Bước 1: Chuyển mẫu bọ trĩ lờn lam sạch ủó nhỏ một giọt dầu ủinh hương hoặc giọt Glycerine (chỳ ý khụng ủể giọt dầu hoặc Glycerine lan rộng), quan sỏt dưới kớnh lỳp 2 mắt soi nổi tư thế của bọ trĩ.
+ Bước 2: Dựng que gỗ cú gắn kim ở ủầu ủể giữ tư thế bọ trĩ theo yờu cầu giữ mẫu rồi từ từ ủặt lamen lờn mẫu sao cho lamen phải song song với lam, trỏnh tạo bọt khớ.
+ Bước 3: ðặt tiờu bản lờn bàn nhiệt hoặc tủ sấy ở nhiệt ủộ 50°C trong khoảng 20-24 giờ.
+ Bước 4: Dỏn 2 nhón lờn lam
Nhón 1 ghi ngày thu mẫu, ủịa ủiểm thu mẫu, người thu mẫụ Nhón 2 ghi tờn khoa học, tờn Việt Nam loài bọ trĩ và ký chủ.
Hỡnh 2.2 Ghi nhón tiờu bản mẫu bọ trĩ
+ Bước 5: Cố ủịnh mẫu trờn bản lam, nhỏ một vài giọt Bom Canada xung quanh mộp bản lamen ủể cốủịnh mẫu bọ trĩ.
b) Phương phỏp ủịnh loại bọ trĩ
Mẫu vật bọ trĩ thu thập ở ngoài ủồng, sau khi làm tiờu bản, ủưa lờn kớnh lỳp soi nổi và kớnh hiển vi ủể tiến hành giỏm ủịnh.
Dựa vào khúa phõn loại của Mound L.A (2007) [42] và một số tài liệu phõn loại khỏc, cựng với sự giỳp ủỡ của TS. Hà Thanh Hương ủể xỏc ủịnh chớnh xỏc tờn loàị
c) Phương phỏp mụ tả bọ trĩ
Mụ tả hỡnh thỏi, ủặc ủiểm phõn biệt của trưởng thành cỏc loài bọ trĩ gõy hại chủ yếu trờn 3 loại rau gia vị tại ủịa ủiểm nghiờn cứu dưới kớnh lỳp soi nổi và kớnh hiển vi huỳnh quang.
2.3.2.2 Phương phỏp nghiờn cứu một số ủặc ủiểm sinh học của loài bọ trĩ gõy
hạichủ yếu trờn rau gia vị (theo Hà Quang Hựng, 2005 [5])
a) Phương phỏp nuụi tập thể bọ trĩ trờn cõy trồng
Phương phỏp này sử dụng ủể nuụi cỏc pha phỏt dục của một loài bọ trĩ
trờn cõy ký chủ thớch hợp của chỳng.
Cõy rau ủược trồng trong chậu nhựa, chăm súc ủến giai ủoạn sinh trưởng thớch hợp cho sự gõy hại của bọ trĩ cần nghiờn cứụ Sau ủú cỏc chậu nhựa trồng cõy ủược ủặt lần lượt vào trong lồng nuụi sõụ Do thực tế ủiều kiện thớ nghiệm trong phũng cũn hạn chế, việc chăm súc cõy rau trong lồng nuụi sõu cũn gặp khú khăn. Do ủú chỳng tụi trồng rau trong cỏc chậu nhựa hỡnh chữ nhật, cắm que ở 4 gúc chậu rồi bao quanh chậu bằng nilon trong. Trước khi chuyển bọ trĩ trưởng thành (ủược thu bắt trờn ruộng) vào trong lồng nuụi sõu, ta tiến hành kiểm tra loại bỏ bọ trĩ cũn sút lại ủể cú nguồn thức ăn sạch cho bọ trĩ nuụi trong lồng. Dựng bỳt lụng chuyển trưởng thành bọ trĩ vào trờn cỏc cõy rau ủể chỳng ủẻ trứng lờn bộ phận thớch hợp của cõy (ghộp 5 cặp
ủực và cỏi trong 1 lồng). Bọc kớn nilon quanh chậu nhựa, dựng kim nhỏ chọc một số lỗ trờn màng ủể cõy cũng như bọ trĩ cú thể sống và bọ trĩ khụng thể
chui ra ngoàị Tiếp tục theo dừi trứng nở, cỏc pha phỏt dục khỏc (ấu trựng, tiền nhộng và nhộng) của bọ trĩ cho ủến kết thỳc thớ nghiệm.
Hỡnh 2.3 Mụ hỡnh nuụi tập thể bọ trĩ
(theo Hà Quang Hựng, 2005 [5]) b) Phương phỏp nuụi cỏ thể bọ trĩ trờn cõy trồng
Phương phỏp này sử dụng ủể nuụi từng cỏ thể cựng một loài bọ trĩ trờn bộ phận cõy ký chủ thớch hợp của chỳng.
Tiến hành soi cỏc bộ phận của cõy rau nghi cú trứng của bọ trĩ cần nghiờn cứu bằng kớnh lỳp 2 mắt ủể tỡm trứng. Dựng dao tỏch bộ phận cú trứng này ủặt vào ủĩa petri, trong hộp nuụi sõu, giữ ẩm bộ phận cõy bằng phương phỏp thụng thường (cuốn bụng thấm nước hoặc cắm vào miếng bọt biển ủó thấm nước, ủặt trờn giấy hỳt ẩm hoặc trực tiếp cắm vào nước ở phớa ủỏy của hộp nuụi sõu). Mỗi trứng một ủĩa petri, dỏn nhón lờn nắp hộp, ghi lại ngày chuyển trứng và số thứ tự hộp. Sau ủú tiếp tục theo dừi thời gian phỏt dục cỏc
15% bọ trĩ chuyển về thớ nghiệm ban ủầu
Chậu trồng cõy thớ nghiệm Bọ trĩ trường thành
thu ngoài ruộng
Lồng nuụi sõu ủó nhiễm bọ trĩ
trưởng thành ủể thu trứng Lồng nhõn nuụi tập thể loài bọ trĩ cần nghiờn cứu 85% bọ trĩ chuyển cho cỏc thớ
nghiệm khỏc
pha của bọ trĩ tới kết thỳc thớ nghiệm. Chỳ ý số lượng hộp petri theo dừi thớ nghiệm là 20 trở lờn.
- Chỉ tiờu theo dừi: Thời gian phỏt dục của từng pha, thời gian vũng ủời của bọ trĩ trờn cỏc bộ phận của cõy rau trong khu thớ nghiệm.
Hỡnh 2.4 Mụ hỡnh nuụi cỏ thể bọ trĩ
(theo Hà Quang Hựng, 2005 [5])
2.3.2.3 ðề xuất biện phỏp phũng trừ bọ trĩ hại rau gia vị
Cỏc loại thuốc ủược dựng ủể thử nghiệm là thuốc bảo vệ thực vật ủược Cục Bảo vệ thực vật khuyến cỏo phũng trừ bọ trĩ tốt, hiện ủang bỏn rộng rói trờn thị trường, nằm trong danh mục thuốc bảo vệ thực vật ủược phộp sử dụng phũng trừ bọ trĩ trờn một số ủối tượng cõy trồng (Danh mục của Cục bảo vệ
thực vật, năm 2012) ủể làm thớ nghiệm.
Lồng mica Nắp ủúng, mở
Ống nghiệm Bọ trĩ trưởng thành
thu từ ngoài ruộng vào
Nước Giấy thấm nước Lỏ cõy Lớp bụng/ Lớp bọt biển Tấm vải màn ðĩa petri
Thử nghiệm 04 loại thuốc trong phũng thớ nghiệm bằng phương phỏp phun trực tiếp bằng bỡnh phun tay loại 2l, thuốc ủược pha theo khuyến cỏo của nhà sản xuất ghi trờn nhón. Cỏc loại thuốc gồm:
- Thuốc cú nguồn gốc sinh học Abatin 5,4 EC, hoạt chất Abamectin 0,05%.
- Thuốc cú nguồn gốc sinh học TP - Thần tốc 16.000 IU, hoạt chất
Bacillus thuringensis.
- Thuốc cú nguồn gốc thảo mộc Sokupi 0,36 AS, hoạt chất Matrine 0,1%.
- Thuốc húa học Forwaltrine C 44WSC, hoạt chất Cypermethrin 40 g/l + Profenofos 400 g/l.
- ðối chứng: phun bằng nước ló.
Mỗi thuốc là một cụng thức thớ nghiệm, mỗi cụng thức nhắc lại 3 lần, số lượng mẫu là n = 30 cỏ thể. Việc thử nghiệm tiến hành ủối với 2 pha: bọ trĩ
non và trưởng thành bọ trĩ. Phương phỏp thớ nghiệm:
ðặt cỏc miếng xốp bọt biển ủó thấm nước vào hộp nuụi sõu, trờn mỗi miếng xốp cắm 6 nhỏnh của cõy rau gia vị (mỗi nhỏnh cao khoảng 10-15 cm). Sau ủú dựng bỳt lụng chuyển 30 cỏ thể bọ trĩ non (hoặc bọ trĩ trưởng thành) vào cỏc nhỏnh cõy rau gia vị. ðối với mỗi pha bọ trĩ non và bọ trĩ trưởng thành cú 05 cụng thức (04 cụng thức dựng thuốc và 01 cụng thức ủối chứng), mỗi cụng thức cú 3 lần nhắc lạị
Thử nghiệm ủược làm tương tự trờn 2 loại rau là hỳng quế và kinh giớị Phun dung dịch thuốc ủó ủược pha lờn rau gia vị bằng bỡnh bơm tay 2l, chỳ ý phun với lượng vừa ủủ, khụng ủể thuốc ủọng lại thành giọt trờn lỏ và kẽ lỏ. Sau ủú quan sỏt và ủếm số lượng bọ trĩ cũn sống sau 1, 3, 5, 7 ngày rồi tớnh hiệu lực thuốc theo cụng thức Abbott.