Tiến hành khảo sỏt sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào nồng độ GA3 để lập đƣờng chuẩn. Từ dung dịch chuẩn gốc (stock) pha dóy dung dịch chuẩn làm việc cú nồng độ GA3 là: 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30 àg/ml.
Lấy 1ml dung dịch chuẩn vào bỡnh định mức 10ml, thờm 1ml etanol, sau đú định mức bằng HCl 3,75M. Đem đo phổ trong khoảng 200-300nm. Tại mỗi nồng độ lặp lại 3 lần. Kết quả khảo sỏt sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào nồng độ GA3 tƣơng ứng thể hiện trong bảng 3.7sau:
Bảng 3.7: Độ hấp thụ quang ở cỏc nồng độ xõy dựng đƣờng chuẩn
C(àg/ml) 2 4 6 8 10 15 20 30
Ā 0,067 0,130 0,201 0,268 0,331 0,502 0,656 0,997
Sử dụng phần mềm Minitab-14 ta thu đƣợc đƣờng chuẩn là đƣờng chuẩn bậc nhất:
24
Hỡnh 3.2: Đƣờng chuẩn của GA3 trong khoảng tuyến tớnh
Kết quả phõn tớch cho thấy phƣơng trỡnh hồi quy là bậc nhất cú dạng: y = 0,00045 + 0,0331x
Trong đú: y là độ hấp thụ quang x là nồng độ GA3 (àg/ml) R2 là hệ số tƣơng quan ( = 0,999)
S = Sy là độ lệch chuẩn của phƣơng trỡnh (= 0,00401185)
Kết quả phõn tớch phƣơng sai cho thấy giỏ trị Pvalue < 0,05 của hắng số a, b < 0,05 chứng tỏ nồng độ và độ hấp thụ quang cú quan hệ tuyến tớnh. Trị số P trong
25
kết quả đỏnh giỏ của phƣơng trỡnh hồi qui (chuẩn F) <0,05 cũng chứng tỏ phƣơng trỡnh trờn chỉ sự sai khỏc giữa lý thuyết.
Để kiểm tra sai số hệ thống của phƣơng phỏp cần so sỏnh hẳng số a của phƣơng trỡnh hồi quy với giỏ trị 0. Nếu a=0, phƣơng trỡnh trở thành y=b‟x. Cỏc giỏ trị b‟ đƣợc tớnh ở bảng 3.8 : Bảng 3.8. Bảng giỏ trị b‟ ở cỏc nồng độ X (nồng độ - M) Y (độ hấp thụ quang) b‟ 2 0,067 0,0335 4 0,13 0,0325 6 0,201 0,0335 8 0,268 0,0335 10 0,331 0,0331 15 0,502 0,0335 20 0,656 0,0328 30 0,997 0,0332
Cỏc giỏ trị liờn quan đến hệ số nhƣ sau: (tớnh theo phõn mềm Minitab 14)
Giỏ trị trung bỡnh Độ sai chuẩn Độ lệch chuẩn Phƣơng sai mẫu Tổng %CV 0,0332 0,000134 0,000378 1,43.10-7 0,2656 1,14
26
Nếu a # 0 khụng cú ý nghĩa thống kờ ở mức độ tin cậy 95%, phƣơng trỡnh hồi quy cú dạng: Y = (b‟ + t.Sb‟)X
Ta cú Y = (0,0332 ± 2,356.2,34.10-3)X
Áp dụng cụng thức: SS = (Yi– a – bXi)2 và S2 = SS/(n-2) Bảng 3.9. Giỏ trị SS và S2
Hàm Tổng cỏc bỡnh phƣơng Bậc tự do Phƣơng sai
Y = A + BX SS” = 0,00809632 6 S2 = 0,0013494 Y = B‟X SS” = 9,92.10-5
5 S2 = 1,65333.10-5
Ta cú:
Tra bảng F(0,95; 5; 6) = 4,387 => Ftớnh < F(0,95; 5; 6) cú nghĩa là sự sai khỏc giữa giỏ trị a và 0 khụng cú ý nghĩa thống kờ hay phƣơng phỏp khụng mắc sai số hệ thống.