- Tất cả các hĩa chất dùng để pha mẫu và pha hệ đệm phả
III.1 : Lựa chọn pha tĩnh
- Dựa vào các tài liệu ,Dược điển ,thành phần và tính chất của các chất cĩ trong mẫu phân tích ...ta lựa chọn cột sắc ký phù hợp cĩ thể là cột pha thuận, cột pha đảo hay các loại cột khác nhau ...
Chúng ta thơng thường dùng 02 loại cột pha thuận ( NP) và cột pha đảo ( RP)
Ngồi ra ta cĩ thể dùng một số loại cột khác như cột CN ,cột NH2 ,....
Cột pha thuận ( NP): Silicagel trung tính
Pha tĩnh :Cột này là loại cột dùng để tách các chất khơng phân cực hay ít phân cực .Trên bề mặt hoạt động của nĩ cĩ chứa các nhĩm OH phân cực ưa nước .
Ví dụ cột Lichrosorb Si 40,Si 60... Cấu tạo cột như sau :
OH OH OH - O - Si - O - Si - O - Si - O - OH OH OH
Pha động : dùng cho loẵi này là các dung mơi khơng phân cực hay ít phân cực như :
Methanol,Benzen,Acetonitril,Chlorofoc ...
III.1 : Lựa chọn pha tĩnh
Cột pha đảo ( RP) : ( Silicagel đã Alkyl hĩa )
Dùng để tách các chất khơng phân cực ,ít
phân cực ,các chất phân cực cĩ thể tạo cặp Ion .Trên bề mặt hoạt động các nhĩm OH đã bị Alkyl hĩa tức là thay thế nguyên tử H bằng các mạch Carbon thẳng ( C8 hay C18 tương
đương RP 8 hay RP 18) hay các mạch Carbon vịng( Phenyl- tương đương cột Phenyl )
vì thế nĩ ít phân cực hay phân cực rất ít . Ví dụ như cột Lichrosor -Lichrospher RP 8 ... ODS , Cột Nucleosil C18...
Pha Động : Pha động dùng trong loại này là các dung mơi cĩ phân cực như :Methanol
,Acetonitril,,nước hay các loại dung dịch đệm ,hỗn hợp của các dung mơi-đệm .
Sự tách của chất nhồi loại cột này cĩ độ lặp lại cao và nĩ được ứng dụng chủ
yếu trong phân tích Dược phẩm . Hiện nay chúng ta chỉ sử dụng loại này là chủ yếu .
Hiện nay pha tĩnh trên nền Silicagel đã cĩ hàng trăm chất khác nhau tùy thuộc vào nhĩm thế của nguyên tử H ,ngồi ra cịn cĩ các lọai pha tĩnh trên nền Oxid Nhơm,trên nền chất hữu cơ cao phân tử,trên nền mạch các bon...