.
1.1. Vị trí phân loại
(M acrobrachium nipponense de Haan ). 3
1.2. Đặc điểm cấu trúc mô học và vai trò của tuyến androgen. 3
1.2.1. Cấu trúc m ô học của tuyến androgen. 3
1.2.2. Vai trò của tuyến androgen. 5
1.3. Hiện tượng lưỡng tính và biệt hoá giới tính liên quan tới tuyến
androgen ở giai đoạn sớm. 7
1.4. Bản chất hoá sinh của chất tiết từ tuyến androgen. 8
1.5. Nội tiết học ở tôm. 9
1.6. Đ iều hoà nội tiết của tuyến androgen. 13
1.7. Vai trò của lectin ở động vật. 14
Chương 2. Đ ối tượng và phương pháp nghiên cứu. 15
2.1. Đối tượng nghiên cứu. 15
2.2. Phương pháp nghiên cứu. 15
2.2.1. Phương pháp tách tuyến androgen. 15
2.2.2. Phương pháp làm tiêu bản cố định. 15
2.2.3. Phương p háp tiến hành thí nghiệm cắt mắt. 15
2.2.3.1. N uôi tôm. 15
2.2.3.2. Phân ỉô thí nghiệm. 16
2.2.3.3. Phương pháp cắt mắt. 16
2.2.4. Thu thập số liệu. 16
2.2.5. Phương pháp hóa sinh. 17
ĐẠI HỌC QUÔC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự N H IẺ N
KHOA SINH HỌC
P h a n N g ọ c Q u a n g
K H Ả O SÁT KÍCH THƯỚC VÀ HÌNH THÁI TUYÊN
A N D R O G E N Ở TÔM CÀNG M ACROBRACH IUM
NIPPO N EN SE (DE HAAN)
K H O Á LUẬN T Ố T NGHIỆP ĐẠI HỌC HỆ CHÍNH QUY Ngành: Sinh Học
C h u y ê n n g à n h : T ê b à o h ọ c , m ỏ học và p h ôi học C á n b ộ h ư ớ n g d ẫ n : P G S -T S : N g u y ễn M ộ n g H ù n g
T h S : N g u y ễn L a i T h à n h
M Ụ C LỤ C
Mở đ ầ u ...
Chương 1: Tổng quan tài liệu...
1.1. Đặc điểm về phãn loại...
1.2.Đặc điểm sinh sản và phát triển ở tóm...
1.2.1. Đặc điểm sinh sàn và các giai đoạn phát triển ờ tôm . 1 .2 .2 .M ố i q u a n h ệ g iữ a lộ t x á c và s i n h sả n c ủ a t ò m ...
1.3. Sự biệt hoá giới tính của tõ m ...
1.4. Vai trò cùa tuyến Androgen...
1.5.Cấu trúc mô học và chât tiết cùa tuyến a n d ro s e n...
C h ư ơ n g 2: Đỏi tượng và phương p háp nghién c ứ u ...
2.1. Đối tượng nghiên c ứ u ...
2.2 Phương pháp nghiên cứu...
2 .2 .1 . P h ư ơ ng p h á p m ổ lâ y tu y ế n a n d ro g e n ... 2.2.1.1. Dụng c ụ ... r ... 2.2.1.2. Tiến hành... 2.2.2. Phương pháp làm tiêu bản cố d in h ... 2.2.2.1. Dụng cụ và hoá c h ất... 2.2.2.2. Phương pháp tiến h à n h ... 2.2.2.3. Làm tiêu bán... 2.2.3. Xử lý số liêu...
C hư ơng 3: Kết quả và bàn lu ậ n ...
3.1. Giải phẫu và mỏ học tuyến Androsen ớ tô m ...
3 .1 .1 . H ìn h d ạ n s và v ị tr í tu y ế n a n d r o s e n ...
3.1.2. Cấu trúc mõ h ọ c ...
3.2. Kích thước tuyến theo chiều dài giáp đẩu ngực...
3.3. Cấu trúc mô học tuyến...
3.3.1. ở tôm có chiều dài giáp đầu ngực 2cm ...
3.3.2. Ở tôm có chiều dài giáp đầu ngực 1.5cm...
3.3.3. ở tôm có chiều dài giáp đầu ngực lc m ...
3.3.4. ở tôm có chiều dài giáp đầu ngực 0, 5 c m ...
3.4. Mối quan hệ giữa sự phát triển cơ thể và tuyến Androgen. C hư ơng 4: Kết luận và kiến n g h ị...
4.1. Kết luận...
4.2. Đề n g h ị ...
Tài liệu tham khảo...
. . 1 ,.3 .. 3 .. 3 .. 3 .. 5 .. 6 .. 7 .. 8 10 10 10 10 10 10 10 10 11 12 13 14 14 14 15 16 18 18 20 11 24 26 28 28 28 29
Đ Ạ I HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯ Ờ NG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN KHOA SINH HỌC
Nguyễn Quốc Chính
MỘT s ó ĐẶC ĐIỂM TẾ BÀO HỌC TRONG PHÁT TRlỂN TUYÊN
SINH DUC TÔM CANG M a c r o b r a c h iu m n ippon en se (D e t ì a a n )
K H O Á LUẬN TỐT NGHIỆP HỆ ĐẠI HOC CHJN'H QUY
N g à n h : Sinh hoc
Chuyên ngành: M ô học - Phôi học
Cán bộ hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Mộng Hùng T h .s Nguyễn Lai Thành
MỤC LỤC
ịđáu...
hương 1 Tổng quan tàíliệu...
1.1. Vị trí phân loại...
1.2. Đặc điểm sinh sản và phát triển ở tõm c à n g ...
1.3. Cấu trúc và sự phát triến tuyến sinh due ớ một số loài siáp xác cao 1.3.1. Cấu trúc tinh hoàn và sự tạo tinh tr ù n s ...
1.3.1.1. C ấu trú c tin h h o à n ...
1.3.1.2. Sự tạo tinh trù n g ...
1.3.2. Cấu trúc buồng trứng và sư tạo trứng...
1.3.2.1. Cấu trúc buồns trứna...
1.3.2.2. Sự tạo trứ n g ...
'hương 2 : Đối tượng và phương p h á p nghiên c ứ u ...
2.]. Đối tượng nghiên c ứ u ...
2.2. Phươna pháp nahièn c ứ u ...
2.2.1 . P h ư ơ n s p h á p p h â n l o ạ i ...
2.2.2. Phương pháp mố lôm lấy tuyến sinh d ụ c ...
2.2.3. Phương pháp lam tiêu ban nhuộm é p ...
"hương 3: Kết quà và thảo luận ...
3.1. Sự p h á t tr iế n cùa tin h h o à n ...
3.1.1. Đ ặ c đ i ế m phát trié n h ìn h th á i cua tin h h o á n ...
3.1.2. Đặc điếm phát triến của các nans tin h ...
3.1.3. Đặc điếm tế bào học sự phát trién cùa tinh h o à n ...
3.2. Cấu trúc buồna trứng và sự tạo trứ ng ...
3.2.1. Đặc điểm phát triển hình thái của buồng trứ ng ...
3.2.2. Đặc điếm phát triển của các noãn b à o ...
Chương 4 : Kết luàn và đề nghị 4.1. Kết luận...
4.2. Đề n g h ị ...
rái liệu tham khảo...
5hụiục ... . 1 .. 3 ...3 ...3 ...4 4 .. 4 .. .5 ...6 ...6 ...6 10 . 10 .10 . 10 11 11 13 13 13 13 16 .21 21 92 26 26 .27 .29
PHIẾU ĐÃNG KÝ
KẾT QUẢ NGHIÊN cứ u KH-CN
Tèn đề tài (hoặc d ự án):
Nghiên cứu điêu khiên giới tính tôm càniz Miicrobruchium nippoiìense (Dc Haan)
Mã số: Q G - 0 1 .o .i
Cư q u a n chu trì đẽ tài (hoạc d ự án): Trường Đai hoc Khoa hục Tư nhiẽn
Địa chí: 334 Nguvón T rã i. T h a n h xuân, Hà noi
Tel: 04 8585277
Cơ q uan q u án lý đé tài: Đại hoc Quốc gia Hà nội
Địa chi: 144 Xuân Thuv, C ầu giáv, Hà nội Tel: 04 S340564
Tỏng kinh phí thưc chi:
T r o n ị ỉđ ỏ : - Từ n s á n sách N hà nước: 60 triẽu đỏm - Kinh phí cùa trường:
- Vay tín dụng: - Vòn tự cỏ: - T h u hói: Thời gian nghiên cứu: 2 nám
Thời gian bát đầu: T h á n g 5 n ă m 2001 Thời gian két thúc: T h á n g 5 n a m 2003 Tẽn các cán bọ phôi hợp nghièn cứu:
: GS.TS N guyễn Quốc Khang. PGS.TS Nguyễn Xuân Quýnh. ThS. N guyễn Lai Thành. ThS. N g uyễn Thị An. CN. Bùi Việt Anh. CN. Chu Văn Trung. CN. Phan Ngọc Quang
Sô đãng ký đé tài
Ngày:
Số chứng nhận đăng ký kết quá nghiên cứu:
Bảo mật:
a. Phổ biến rộn2 rãi: X b. Phổ biến hạn chế: c. Bào mât:
Tóm tá t kế t quá n g h iê n cứu:
Lan đau lion ticn the giơi đa có được các dần liêu vồ câu trúc mõ hoc lu veil androgen ờ loài M ư cm h rư rlụ u m nipponcnsc. Tuyên aom rốn luyến sát với ong tinh và các cột tê bào toá tia. Cắt mắi gày phì dại tế bào với nhiều khõni! hào tron a tế bào chất
Tuyòn androgen có một sỏ' thanh phán protein dạc trims the hiện ớ các hãn" 15- 16 kDa. ỉ 1-13 kDu. ticn biin íỊcl điỏn di. Có mõt ticii phán protein chun° °iữu tu vòn gốc mắt và tuyến androgen the hiện ớ hãnII 19-20 kDa.
Đu hoan thiện được phương pháp khứ tuyên androgen ờ lõm non
Mcicrobrachiiiiìi nipponẹnse. Đây là một phương pháp phẫu thuật tinh vi . Ty lê >óns sau phẫu thuật tương dối nhỏ. 527c. tuy nhiên ty lệ thành còng là lớn. Sau 3 Ihãns khư tuyên androgen ớ tom đực non đã íiàv đáo iiiởi hoàn toàn tìr con dực sane con cái. ca biệt có những con cái dao giới có buồn SI trứníi lứn khỏna kém SI ì nhóm cái dõi chứna cùng tuỏi. Rất !ý thú là sự đáo giới xây ra với cá các tính trạ na vinh dục thứ cấp. ihí dụ như vị trí lỏ de. sự tiêu biến sai đực ơ các con đao giới.
Nghiên cứu mõ học cho thấy sư biên đổi hoàn toàn từ tuyên đực sana tuvén cái. Việc nuôi đé các tòm này chưa thực hiên dược do chưa có đủ điêu kiện nuôi và chưa có C ỏ n 2 n g h ệ ư ơ n 2 t ò m cíu t h ê .
Kiên nghị vo quv mo và đoi tượnjí áp dụnii nghiên cứu:
Ap dụng tại các Cư sứ nghiên cứu va nuoi thu\ sán , tren các doi tượng tóm nuói. troniỉ phạm vi toàn quốc
Chu nhiệm đè tài Thu trưưns cơ quan chu trì đẽ tái
Chu tịch Hội đon" đánh oiá chinh Ihưc
Thu trương cuquan quan lý đè tai Họ tên Nau vẻ n Mộng •* Hùns • "" •• Học h àm học v ị PGS. TS / ị 1 : m Ĩ S Kí tên Đóng dấu ị p p ' 1' s
TÓM TĂT C Á C C Ồ N G TRÌNH NCKH CỦA CÁ NHÃN
(bài báo, báo cáo tai Hội niỊhị khoa học
Đ Ó N G TRONG BÁO C Á O CỦA ĐỂ TÀI
NCỈÀNH SINH HỌC
IA. Niĩuvễn Mộng Hùnu. 2002.
H iĩih t h a i v u Ciiu t i u c t u ỵ c n í i n d r o g c n ơ t o m cùIIII í V l ibi'tK'hiIIIÌIIIIpp<I/ICIÌV d c Haan. Tạp c h í : Di tru von hoc và ưnsi dung. M) I năm 2003. Tr. ] 7-20
TÓM TẤT
Tuyên androgen ớ M acrobnichĩitiìi Iiipponcns đe Huun là mọt khối mo nhỏ. tronu suốt, hám vào phán goc ngay gần iỏ rnớ của õim Jan tinh. Nchièn cứu mò học cho biêt tuyên gôm các sơi tõ bào hi cu mô. Các sợi phán hố theo hình nan quạt \ (Vi tàm là vung ham cua tuycn \cVi ons dán tinh. Các soi co thò lion lươn tao nhỡn*’ câu trúc giỏng nang tuyên. Các té hào tích 1IIV chãt liẽt. tự huv vù iĩiai phóns chát tiẽt vé phiu thành óng dẫn tinh.
1B. Ntỉuvỗn M o n2 Hiins. 2002.
Morphology and histologic structure of the amli'O'jenic Ỉỉlund 111 \L /c ri‘hriichini)i nipponcn.se De Haan. Genetics and application. N"l. 2003. Pp. 17-20
SUM M ARY
The blue claw shrimp (MacrobrcK biltm r o so n h e rỳ i). is a popular object of fanning. But in the North VietNam. because of the weak resistance to the low temperature (15-18"C). farming o f this shrimp can be only on the sum m er time. In the North o f Vietnam, there are about 24 species of fresh waller shrimp. One of them. M acrobrachiurn ìùpponense đe Haan is most important species, their size is not as larse as M rosenbergit but thev are largest than other spesies of fresh water shrimp. M acrobrcichiiirn nippoiieii.se de Haan occupies large percent of protein food o f Vietnamese people.
M acrobrachiurn nipponen.se de Haan is gonochoristic. male much bigger and more valuable than female prawn. Therefore, production of all male populations have verv important economic effect.
The androgenic °Uind is thousht to be exclusive soured ot hormone responsible for sex-differentation and sexual characteristics in crustaceans. Andrectomv (ablation OÍ androgenic gland) in the early stage ot development can completely reverse the sex o f the mule into lemale . Crossing the sex-rcversed female with the normal male gives all-male offspring.
The results o f our studies show (he androgenic gland in M a crohnuhium nippom nts do Haan as a small, transparent mass of tissue, looslv attached to the posterior vas deferens, above the point where the vas deferens enters the coxopodite ot the leg. The histologici.ll cxiiminaiion rcvoulcd thill the gliind consist of the cords of epithelial cells. The cords arranged radially with the center in the point of contact o f the gland to the vas deferens. The’ cords may lold upon themselves. The cells accumulate the secret, disintegrate and liberate the secret into the connective tissue sheath o f vas deferens.
2.A . Nguyễn M ộng Hùng. Chu Văn Trims (2003)
Anh hưởng của Celt măt tới càu trúc tuyén androtien O' tôm cànu Mui raỉviichiiiin nipponens de H a a n .
Tạp chí Sinh học. sô đậc biệt dành cho [ lôi Iiítii Khoa học Khoa Sinh hoc thán1' I I năm 2002. Tập 25. số 2A. 2003. Tr. 146-148
TÓM TẮT
Sau 3 tuàn cãt măt, kích thước tuvẽn androíen O' tòm càĩiíi M lU'j't i/vticliium
nipponense dc Haan tăng lẽn 3 làn. Sư tãns kích thước III} en [a do ca sự tăns sinh tê bào và sự tãng kích thước từng tê hào do tích luv nhiêu chat liet hơn. Phương thức tiêt có thể là tự huv và chất tiêt được siĩai phóng vào vo mó liên két cua ònn dần tinh.
2 B . Niỉuvén M ộng H ùns. Chu Vãn Trune
Effects of evestalk ablation on the size and histology of the androgenic aland of M a cro b n u Ilium nipponense De Haan. Journal of Biolocv. Y.25. N" 2A. 2003. Pp. 146-148.
SU M M A RY
After 3 week o f eyestalk ablation, the size of the androgenic eland of
Mcicrobrachiimi tìipponense de Haan increase 3 time, therefore the volum of the gland must be increased about 27 time. The aland is enlarged both by the
increasing num ber of cells and by the accumulation of more secret by the individual cells. The mode o f secretion may be holocrinic and the secret may be liberated into the connective tissue sheath of the ductus defterens of the shrimp.
3 A. N guyền M ộng Hùna. Bùi Việt Anh. 2004
Cát bỏ tuyến Iindrogcn gây chuyển đưc sang cái ơ tôm càng Muciobrachiưm nipponene.se De Haan. Tạp chí Di truyên và ung dụng sò 1 nam 2004
TÓM TẮ T
Tôm càng là loài dị hình giới tính, khi trưởng thành trong lượn2 tom đực hơn 3 0 ^ so với trọng lượng tôm cái. Như vậy vé mãt kinh tê. tạo được cang nhieu tom đực tron2 quằn thế cang tốt. Với mực đích đó chúng tỏi đa tiên hành eãt bỏ tuyên androgen ở tòm non"loài M acrobrac/iiiim mpponense de Haan đẽ dao giơi tom đực
thành tôm cái với hv vọng sẽ dùng các con cái giá này đỏ tạo quần thê tôm càn" toàn đực.
Chúng tỏi đã hoàn thiện được phương pháp khư luyến androgen ơ lòm non. Đàv là một phương pháp phẫu thuật tinh vi . Tý lệ sòng sau phẫu thuật là 52r/c ( 100 'con trong số 192 con thí nghiệm) . Sau 3 tháng khư Iuyèn androaen KY.Í tôm đực non đã đáo giới hoàn toàn từ con đực sang con cái. với ca hai lỗ đe mớ ớ £ốc chán hò thứ 5 và sự ticii biên hoàn toàn gai đực. cá biộl có nhữníì con cái đáo ‘Tiứi có buồng trứng lớn không kém gì nhóm cái đối chứnii cime tuổi, Nỉihiên cứu mỏ học cho biết trong buồng trứng đáo giới, các lieu tluiỷ săp xếp thưa hơn. đỏi khi van còn các yếu tố sinh tinh.
Tiếc rằng chúng tỏi chưa biết cách ưưna nuòi ấu thè tõm càne nén khỏníi thê xác định được giới tính hâu thê. như nu ười ta dã làm được vói túm càna xanh.
3B. Nguyễn Mộiiii Hùnsỉ. Bùi Việt Anh. 2004.
Androgenic gland ablation caused the sex reverse from male to female in
Miicrobrachiiim nipponencsc De Haan. Genetics & application. N" 1. 2004 SUMMARY
The androiienic aland is thought to be exclusive source of hormone responsible tor sex-diiferentation and sexual characteristic^ in crustaceans. Andrectomy (ablation of androgenic eland) in the car]V static of development of
M acrobrachiimi rosonberiịii can completely reverse the sex nl the male into female . C r o s s i n g the s e x - r e v e r s e d f emale with the normal mal e gi ves ail -male offspring.
In our studv on Mitci'obrucliiiirn luppoiit'iise do Haan. throe month alter the ablation of the androgenic "land. 5 2 cx of shrimps survived. 1(Y< surviving
demonstrated full reverse to the female primary and secondary sexual
characteristics. Histologic examination of reversed ovary reveled large amount of interlobular collective tissue. Testicular tissue rarely cxsist in the ovary as a small follicul with some spermatoconia and primary spermatocytes.
We are not able to re a re the larvae of M acrolm iclm trn mpponcii.sc đe Haan. so we can not determine the sex of the offsprings.
SCIENTIFIC PROJECT
B R AN C H: B IO LO G Y
PRO JEC T C A TE G O R Y : (N A T IO N A L UNIVERSITY LEVEL)
1. Title: T he s tu d y o f sex reverse from male to female a lte r the an d ro g e n ic g la n d a b la tio n in M a ci'o hixicluum nipponưncsư De H aan
2. C od e N u m b e r : Q G - 0 1 -05
3. M a n a g in g In stitu tio n : H anoi University o f Science 4. Im p le m e n tin g Institu tio n : V N U
5. C o l l a b o r a t i n g I n s t i t u t i o n s : R e s e a r c h I nst i tut o f A q u a c u l t u r e ! 6- C oo rd in ator: A ss.P ro!. N i u v c n M o n <T H u n a 7. K ey im p le m e n to rs 8. D u r a t i o n : ( f r o m M a y 2 0 0 1 to M a y 2 0 0 3 ) 9. Budget: 60 m illio n V X D 10. M ain results: - R e s u l t s in s c i e n c e a n d t cc h no l oi zy : T h e r e s u l t s of o u r S t u d ie s s h o w t h e a n d r o e e n i c e l a n d in M a c r o b r a c h i i t m ỉ ù p p o n ư n s d e H a a n as a s m a l l , t r a n s p a r e n t m a s s (if t i s s u e, l o os ly a t t a c h e d t o t h e p o s t e r i o r v a s d e f e r e n s . a b o \ ' c t h e p oi n t w h e r e t he vas d e f e r e n s e n t e r s t h e c o x o p o d i t e o f t he letz. T h e h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n r e v e a l e d t h a t t h e i i l a n d c o n s i s t o f the c o r d s o f e p i t h e l i a l c e l l s . T h e c o r d s a r r a n g e d r a d i a l l v w i t h t h e c e n t e r in t he p o i n t o f c o n t a c t o f t h e g l a n d to the vas d e fe re n s . T h e cords m a v fold upon them selves. The cells a c c u m u la te the secret, d is in te g ra te an d lib e ra te the secret into the connective tissue sheath of vas d e fe re n s .
A f t e r 3 w e e k o f e v e s t a l k a b l a t i o n , t h e s iz e o f t h e a n d r o g e n i c g l a n d o f
M a c r o b ru c h iu m lìippoiìư nsc de H aan increase 3 time, therefore the voỉum o f the g la n d m u s t be in c re a s e d a b o u t 27 time. The g land is e n la rg e d both by the increasin g n u m b e r o f c ells an d bv the a ccu m u lation o f more secret by the individual cells. The m o d e o f secretio n m ay be holocrinic and the secret m ay be lib e ra te d into the c o n n e c tiv e tissue sheath o f the du ctus d e ffe re n s o f the shrimp.
T h r e e m o n th afte r the a b latio n of the a n d ro genic gland. 5 2 r f o f sh rim p s s u rv iv e d 7 0% s u rv iv in g d e m o n strated full r c \ c r s s to the fem ale prim ary a n d s e c o n d a ry s e x u a l characteristics. H istologic e x a m in a tio n o f