Ngày th 30 Ngày th 34 1 MS-T ( C1) 2,20(1,62)a 2,70(1,76)a 2 MS-N ( C2) 0,00(0,71)c 0,00(0,71)b 3 N6-T 0,00(0,71)c 0,00(0,71)b 4 N6-N 0,00(0,71)c 0,00(0,71)b 5 YP-T 1,00(1,21)b 1,90(1,53)a 6 YP-N 1,10(1,26)b 2,30(1,66)a cv (%) 17,13 19,01
(Trong cùng m t c t các s có cùng m u t không khác bi t nhau m c khác bi t 0,05 qua phép th Duncan)
S li u trong ngo c đƣ đ c chuy n đ i sang (x+0,5)1/2 trong quá trình th ng kê.
Chú thích:
MS-T ( C1): Nuôi c y bao ph n ki u gen NK67 trên môi tr ng MS
MS-N ( C2): Nuôi c y bao ph n ki u gen ảN88 trên môi tr ng MS
N6-T: Nuôi c y bao ph n ki u gen NK67 trên môi tr ng N6
N6-N: Nuôi c y bao ph n ki u gen ảN88 trên môi tr ng N6
YP-T: Nuôi c y bao ph n ki u gen NK67 trên môi tr ng YP
30 Nh n xét:
Qua b ng 3.1, t l phôi t o thành t bao ph n b p trên ba môi tr ng MS, N6 và
YP đ c th hi n nh sau:
- Trên môi tr ng MS, ch bao ph n c a ki u gen b p t NK67 có kh n ng c m
ng t o phôi, t l phôi là 2,2%.
- Trên môi tr ng N6, bao ph n c hai ki u gen đ u không t o phôi, các bao ph n d n hóa nơu trên môi tr ng này trong quá trình nuôi c y (Hình 3.7).
- Trên môi tr ng YP, bao ph n c a c hai ki u gen đ u có kh n ng t o phôi. T l phôi hai nghi m th c YP-T là 1,0% và YP-N là 1,0%.
ngày th 30 sau nuôi c y, ba nghi m th c có phôi, t l phôi nghi m th c MS-T là cao nh t. n ngày th 34, t l phôi ba nghi m th c trên không có s khác bi t (B ng 3.1). Kh n ng c m ng t o phôi c a hai gi ng b p có khác bi t trên các
môi tr ng nuôi c y. Ki u gen NK67 có kh n ng c m ng trên môi tr ng MS và
YP, trong khi NH88 ch t o phôi trên môi tr ng YP.
So sánh kh n ng t o phôi c a bao ph n b p trên ba môi tr ng MS, N6, YP cho th y bao ph n b p c a c hai ki u gen NK67 vƠ HN88 đ u có kh n ng c m ng t o phôi trên môi tr ng YP.
Th o lu n:
Trong th c t , kh n ng c m ng t o phôi c a bao ph n ph thu c r t l n vào ki u gen, ch có kho ng 30% ki u gen b p có kh n ng c m ng t o phôi (Petalino và Jones, 1986). Hai ki u gen b p đ c s d ng trong nghiên c u đ u có kh n ng t o phôi.
Trên môi tr ng MS, m t nhóm tác gi Trung Qu c đƣ thu đ c 1% phôi đ c
t o thành t nuôi c y bao ph n b p (Anonymous, 1975). Môi tr ng YP thích h p cho s c m ng t o phôi c a nhi u ki u gen b p (Genovesi và Collins,1982). K t qu trong nghiên c u c a chúng tôi c ng cho th y s ki u gen c m ng trên môi tr ng YP cao
h n môi tr ng MS. T l phôi t o thành trong thí nghi m 1 là 2,3% ki u gen HN88
31
đ c 5,8% phôi ki u gen DH5xDH7. Tuy nhiên, t l này bi n đ ng m nh tùy theo ki u gen c ng nh tr ng thái sinh lý c a cây m .
Trên môi tr ng YP, bao ph n b p không có kh n ng c m ng t o phôi khi b
sung 2,4-D và c m ng t t khi b sung TIBA vƠo môi tr ng nuôi c y (Ku và cs, 1981; Zheng và cs, 1983). Ng c l i, trên môi tr ng N6 bao ph n b p l i c m ng t o phôi t t khi b sung 2,4-D (Fu và cs, 2011) và không c m ng khi b sung TIBA (Zheng và cs, 1983).
Trong nghiên c u này, bao ph n c a ki u gen NK67 và HN88 có kh n ng c m
ng t o phôi trên môi tr ng YP b sung 1 mg/l TIBA. Môi tr ng MS vƠ N6 đ c b
sung 2 mg/l 2,4-D, bao ph n c a ki u gen NK67 t o phôi trên môi tr ng MS, trên
môi tr ng N6 không có s c m ng t o phôi c hai ki u gen.
Khi so sánh thành ph n đa l ng vƠ vi l ng c a ba môi tr ng MS, N6 và YP nh n th y môi tr ng MS giƠu dinh d ng nh t, ti p theo là N6, YP. Môi tr ng YP
nghèo dinh d ng nh t trong ba môi tr ng nh ng bao ph n b p c a c hai ki u gen
l i c m ng t t nh t trên môi tr ng này. M c dù giƠu dinh d ng h n môi tr ng YP
song môi tr ng N6 l i không t o đi u ki n t t cho bao ph n hai ki u gen HN88 và
NK67 c m ng t o phôi. Môi tr ng MS giƠu dinh d ng nh t, trên môi tr ng này ch bao ph n c a ki u gen NK67 có kh n ng c m ng t o phôi. Nh v y s khác bi t v thành ph n đa l ng và vi l ng không đóng vai trò quy t đnh v kh n ng t o phôi c a bao ph n b p trong thí nghi m này.
Có nhi u khác bi t v thành ph n vitamin ba môi tr ng (Ph l c 1). Môi tr ng
MS vƠ N6 đ u ch a ba vitamin nicotinic acid (PP), pyridoxine (B6) và thiamine (B1),
đơy lƠ các vitamin đ c s d ng nhi u nh t trong nuôi c y mô trong đó thiamine đ c
coi là m t vitamin c n b n c n thi t cho s t ng tr ng c a t t c t bào. Môi tr ng MS nhi u h n môi tr ng N6 và YP vitamin myo-inositol, myo-inositol có vai trò quan tr ng trong s phân chia t bào th c v t, có vai trò trong sinh t ng h p thành t bào, c th là sinh t ng h p acid polygalacturonic và pectine. Có th myo-inositol đƣ
kích thích s c m ng t o phôi môi tr ng MS và s thi u h t vitamin này trong môi
32
đ c s d ng ph bi n trong nuôi c y bao ph n m t s loƠi ng c c nh lúa n c, lúa m ch v i n ng đ 100 mg/l (Niroula và cs, 2005; Asakaviciute và cs, 2008), lúa m v i n ng đ 50 mg/l (Last và cs, 1990). Qua quá trình th c hi n thí nghi m 1, chúng tôi nh n th y môi tr ng YP là thích h p cho nuôi c y bao ph n b p vì bao ph n c a c hai ki u gen b p đ u t o phôi trên môi tr ng này, tuy nhiên trong thành ph n môi tr ng này l i không có myo-inositol. Vì v y thí nghi m 2 đƣ đ c ti n hành nh m kh o sát nh h ng c a myo-inositol lên kh n ng c m ng t o phôi v i k v ng xác đnh n ng đ myo-inositol thích h p đ kích thích s t o phôi trong nuôi c y bao ph n b p trên môi tr ng YP.
Hình 3.6: Phôi phát sinh t bao ph n b p NK67 trên môi tr ng YP sau 34 ngày nuôi c y
33
Hình 3.7: Bao ph n b p NK67 hóa nơu trên môi tr ng N6 sau 34 ngày nuôi c y
3.3. Thí nghi m 2: Nghiên c u nh h ng c a myo-inositol và n ng đ sucrose lên s t o phôi c a bao ph n b p
Bên c nh vi c nghiên c u nh h ng c a myo-inositol, thí nghi m 2 còn nghiên c u nh h ng c a sucrose lên kh n ng t o phôi c a bao ph n b p. Hai n ng đ myo- inositol là 50 mg/l và 100 mg/l và hai n ng đ sucrose là 9% và 12% (w/v) đƣ đ c s d ng trong thí ngh m. T l phôi t o thành hai ki u gen NK67 vƠ HN88 đ c th hi n qua hai b ng sau:
34
B ng 3.2: nh h ng c a myo-inositol và n ng đ sucrose lên s t o phôi c a bao ph n b p NK67