- Dùng phương trình tuyến tính thu được để tính mật độ vi khuẩn trong mẫu khi biết giá trị OD.
trong 20ml đệm phosphate pH7;
Phá màng tế bào bằng sóng siêu âm trong vòng 30 giây (lặp lại 5 lần); Dịch sau khi xử lý đem ly tâm ở tốc độ 10000 rpm trong 30 phút; Dịch sau khi xử lý đem ly tâm ở tốc độ 10000 rpm trong 30 phút; Thu lấy dịch nổi sau ly tâm đem phân tích.
Tiến hành tương tự đối với mẫu đối chứng gồm: 10g sinh khối B.subtilis
hoặc B.licheniformis và 100ml nước cất.
Dựa vào kết quả phân tích phổ UV-Vis để xác định lượng sinh khối vi khuẩnphù hợp cho quá trình sinh tổng hợp nano bạc. phù hợp cho quá trình sinh tổng hợp nano bạc.
2.2.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ AgNO3 đến quá trình sinh tổng hợp nano bạc nano bạc
Chủng B.subtilis, B.licheniformis được nuôi cấy lắc trong môi trường [MT1]
ở 37oC, 200rpm;
Sau 24 giờ, dịch vi khuẩn được ly tâm tốc độ 3000 rpm, 15 phút; Thu sinh khối và rửa với đệm phosphate pH 7,0; Thu sinh khối và rửa với đệm phosphate pH 7,0;
Chuyển 10g sinh khối vào bình chứa 100ml dung dịch AgNO3 có nồng độ
lần lượt là 0.5mM, 1mM, 2mM, 3mM;
Tiến hành ủ trong tối và lắc với tốc độ 200rpm, ở 37oC trong 4 ngày; .
Lấy 100 µl dịch nuôi cấy ở mỗi nồng độ đem pha loãng và trải trên môi trường Nutrient Agar [MT3]; trường Nutrient Agar [MT3];
Ủ ở 37oC trong 24-48 giờ. Đếm số khuẩn lạc thu được, xác định được mật độ
vi khuẩn sống sót ứng với các nồng độ AgNO3 khác nhau.
Đồng thời dịch nuôi cấy cũng được ly tâm 5000 rpm trong 15 phút
• Với B.subtilis thu lấy dịch nổi sau ly tâm đem đo UV-Vis.
• Với B.licheniformis thu sinh khối, rửa sạch và huyền phù sinh khối
trong 20ml đệm phosphate pH 7;