Phụ lục 2: Lên men tái sử dụng nhiều chu kì A.oryzae
thu nhận FTS vào SX FOS
• Phương pháp:
- Cấy giống: bào tử + 100ml môi trường (1% sucrose, 0.2% dịch chiết nấm men, pH 5.5). Hấp 1210C, 15p.
ủ 30±10C, 24h, 250v/p.
- Lên men tái sử dụng thu enzyme:
Giống + 100ml môi trường (10% sucrose, 0.8% dịch chiết nấm men, 1% NaNO3, 0.03% MgSO4. 7H2O, 0.4% K2HPO4, 0.9% KH2PO4, 1% NH4Cl và 0.6% NaCl, pH 5). ủ 30±10C, 48h, 250v/p gạn thu dịch enzyme thô.
bổ sung môi trường mới, lặp lại 6 chu kì như trên sau mỗi 24h
- Sản xuất FOS: hỗn hợp PỨ (1.5ml sucrose 60%, đệm citrate 0.1M pH 5.5, 0.5ml dd enzyme thô).
Phụ lục 3: Cố định tế bào A.japonicus vào chất mang gluten
• Phương pháp:
- CB sợi nấm: bào tử + môi trường (20% sucrose, 1% dịch chiết maltose, 1% dịch chiết nấm men)
ủ 300C, 36h, 200v/p.
thu nhận tế bào (sợi nấm), trộn với chất làm đồng nhất polytron, đệm
Triton X-114 ở 40C, trong 24h, và làm đông khô ở -850C.
- CB gluten: 10g gluten + 200ml dd NaOH 0.05N ly tâm. Chỉnh về pH 11 với HCl 0.1N. Thêm 5ml dd tinh bột oxy hóa (22% w/v). Chỉnh về pH 6. Thu nhận phần keo lắng.
- Cố định tế bào: trộn gel gluten + sợi nấm nghiền nhỏ, định hình dạng sợi đường kính 0.25cm, sấy khô, cắt nhỏ 0.25x0.4cm. Trữ 40C.
- Sản xuất FOS:
Theo mẻ: mảnh TB cố định + 100ml dd sucrose 40%, 370C, 125v/p.
Liên tục: nhồi 8g mảnh TB cố định vào cột 18 x 1.55cm, cho dd sucrose 40% đi qua cột với vận tốc xác định, 370C 40
Phụ lục 5: So sánh So sánh PP lên men liên tục và không liên tục 42 Canh trường nuôi cấy tế bào Canh trường nuôi cấy tế bào
Cố định tế bào Thiết bị phản ứng cột Dung dịch sucrose Dung dịch sucrose Tinh sạch Tinh sạch Cô đặc Cô đặc Thanh trùng Thanh trùng