- Xác định số tế bào/ml sử dụng công thức sau:
Tổng số tế bào = (tế bào/ml) x (tổng thể tích ban đầu của huyền phù tế bào)
. . huyền phù tế bào)
XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG TẾ BÀO
- Thêm 0,5ml thuốc nhuộm trypan blue 0,4%; 0,3ml HBSS; 0,1 ml huyền phù tế bào vào 1ống nhỏ. - Trộn thật kỹ và để yên trước khi
nạp buồng đếm hồng cầu. 0,4 % thuốc nhuộm trypan blue hoặc 0,4 % nigrosin có thể được sử dụng để xác định số lượng tế bào có khả năng tồn tại và phát triển độc lập.
- Các tế bào chết sẽ bắt màu
nhuộm, các tế bào sống sẽ không bắt màu nhuộm.
XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG TẾ BÀO
Tính số lượng tế bào sống
- Tính % tế bào có thể tồn tại và phát triển độc lập như sau: Số tế bào sống
%Tế bào có khả năng tồn tại = x 100
Tổng số tế bào
- Làm sạch lớp kính đậy và buồng đếm hồng cầu bằng cách rửa với ethanol 70% và sau đó rửa với nước đã được khử ion .
- Làm khô và lưu trữ để sử dụng lần sau.
NỘI DUNG
1. CẤY CHUYỂN TẾ BÀO LỚP ĐƠN
2. CẤY CHUYỂN TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO3. ĐÔNG LẠNH TẾ BÀO 3. ĐÔNG LẠNH TẾ BÀO
4. GIẢI ĐÔNG TẾ BÀO
5. XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG TẾ BÀO
CHUẨN BỊ TẾ BÀO CHO VẬN CHUYỂN
Các bước thực hiện:
Loại bỏ môi trường cũ trong
bình nuôi, cho môi trường mới.
Đậy chặt nắp bình.
Đặt các bình nuôi trong các túi
nhựa hoặc các thùng đựng hàng chống rò rỉ.
Đặt tiếp vào thùng cách nhiệt. Dán nhãn an toàn sinh học.
Vận chuyển trong ngày hoặc qua
đêm.
CHUẨN BỊ TẾ BÀO CHO VẬN CHUYỂN
Vận chuyển đông lạnh
Lấy các lọ có chứa tế bào đông (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
lạnh ra khỏi tủ nitơ lỏng.
Đặt lên băng khô trong thùng
- Cấy chuyển các tế bào lớp đơn hay huyền phù tế bào sang môi trường
mới nhằm cung cấp chất dinh dưỡng và không gian cho các dòng tế bào phát triển liên tục.
- Đông lạnh tế bào nuôi cấy ngăn cản sự thay đổi do trôi dạt di truyền và
tránh mất mẫu nuôi cấy do lão hóa, hay vô tình làm nhiễm mẫu
- Giải đông nhằm khôi phục lại trạng thái hoạt động, đặc điểm, tính chất
của tế bào trong nuôi cấy tế bào động vật
- Đếm số lượng tế bào để xây dựng đường cong sinh trưởng, phục vụ
cho cấy chuyển tế bào.
- Việc thực hiện tốt hay không tốt các kỹ thuật trên quyết định đến sự thành công hay thất bại của quá trình nuôi cấy, muốn thành công đòi hỏi người thực hiện cần phải có những đức tính: cẩn thận, tỉ mỉ, say mê với công việc…
III- KẾT LUẬN