Nguyín tắc
ARN không bền nín dễ bị phđn hủy bởi câc ARNase. Do đó khi ly trích ARN cần phải thận trọng, thao tâc trong điều kiện vô trùng, đeo bao tay. Ly trích ARN gồm câc bước tương tự như ly trích ADN.
Hoâ chất - Men bânh mì - Phenol - Ethanol tuyệt đối lạnh - Ethanol 70% lạnh - Kali acetate - Nước cất vô trùng Tiến hănh
Cđn khoảng 0,3 gam men bânh mì trong ống eppendorf 2 mL. Rửa sinh khối tế băo bằng câch huyền phù tế băo với 1,5mL nước cất. Trộn mẫu đều bằng mây mixer, ly tđm 5000 vòng/phút để thu nhận sinh khối.
Huyền phù hóa sinh khối trong 0,4 mL nước cất đê được lăm ấm đến 37oC. Ủở nhiệt độ năy trong 15 phút.
Thím văo eppendorf 0,6 mL phenol. Vortex có thể nhiều lần sao cho tổng thời gian vortex khoảng 20-30 phút, ly tđm 5000 vòng/phút trong 10 phút ởđiều kiện lạnh.
Thu lấy dịch chứa ARN văo một eppendorf. Ly tđm ở tốc độ trín 7000 vòng/phút trong lạnh để tủa protein, thu lấy dịch lớp trín văo một ống eppendorf khâc, thím 10mg kali acetate, hòa tan bằng câch đảo vă lắc nhẹ, thím văo đó 1mL acetate đê ướp lạnh. Đảo ống văi lần. Để yín 1 giờ trong nước đâ lạnh. Ly tđm trín 7000 vòng/phút trong 15 phút ở điều kiện lạnh. Hút bỏ dịch nổi thu nhận cặn tủa chứa ARN. Rửa tủa ARN bằng câch thím nhẹ nhăng 0,5mL ethanol 70%. Ly tđm như trín để thu nhận ARN.
http://www.ebook.edu.vn