STT Tên ch tiêu K T QU GI I H N
T I A
1 T ng s vi sinh v t hi u khí CFU/ml <1 102 2 Escherichia coli CFU/ml <1 0 3 Clostridium perfringens CFU/ml <1 0 4 Coliforms CFU/ml <1 10
5 T ng s n m men - n m m c CFU/ml <1 10
6 Staphylococcus aureus CFU/ml <1 0
Nh n xét:
K t qu phân tích các ch tiêu vi sinh đ u th a mãn gi i h n t i đa vƠ đáp ng
TCVN 7401:2002 quy đ nh đ i v i đ u ng pha ch s n không c n.
Ph ng pháp x lý nhi t đ c s d ng đ x lý s n ph m tr c khi b o qu n là
ph ng pháp thanh trùng Pasteur 95o
C trong 30 phút. K t qu ki m nghi m vi sinh cho th y ph ng pháp x lý nhi t đư ch n đáp ng đ c yêu c u tiêu di t vi sinh v t,
đ m b o ch t l ng cho s n ph m và không b h h ng trong quá trình b o qu n.
K t lu n:
S n ph m đ t yêu c u ch t l ng vi sinh.
nh tính h p ch t Flavonoid trong s n ph m
ng 1 ( C): n c c t + vài gi t dung d ch FeCl3
ng 2: s n ph m n c linh chi + vài gi t dung d ch FeCl3
1 2
Hình 3.8 K t qu đnh tính h p ch t Flavonoid trong s n ph m
nh tính h p ch t Saponin trong s n ph m
* Cách ti n hành: chu n b 2 ng nghi m s ch.
- ng nghi m 1: l y 3 ml d ch n c linh chi cho vào ng nghi m, l c m nh trong 2 phút. yên và quan sát hi n t ng t o b t.
- ng nghi m 2: l y 2 ml d ch n c linh chi, nh thêm 3 gi t H2SO4 đ c. * K t qu :
- ng nghi m 1: d ch n c linh chi t o b t và c t b t cao, khá b n v ng trong 15 phút, s b có th k t lu n trong d ch n c linh chi có ch a saponin.
- ng nghi m 2: xu t hi n mƠu đ -tím. Nh v y, trong d ch n c linh chi có ch a saponin.
nh l ng h p ch t polyphenol trong s n ph m cu i
- HƠm l ng polyphenol trong s n ph m
D a vƠo ph ng trình ngo i suy y = 12,72x + 0,0277 có đ c t đ ng chu n ta
tính đ c hƠm l ng polyphenol trong s n ph m là: 0,059 = 12,72x + 0,0277
x = 0,025 mg/ml
V i x lƠ l ng polyphenol.
S n ph m N c th o d c t n m linh chi
Hình 3.10 Quy trình ch bi n n c th o d c t n m linh chi
S N PH M Chi t chai
Ghép n p
Thanh trùng, 95oC,30phút
Linh chi đ Vi t Nam X lí, xay nh N c Bài khí L c tinh 12% ng, D ch 72% Gia nhi t Trích ly, t l 1:60,75oC,40phút L c thô Làm ngu i nhanh Ph i ch Bã Bã
Ch ng IV
PH N 4: K T LU N VẨ KI N NGH 4.1 K t Lu n
Qua quá trình th c hi n đ tài, d a trên k t qu c a các thí nghi m đư kh o sát
chúng tôi đ a ra m t s k t lu n nh sau:
- Khi kh o sát ngu n nguyên li u có th đánh giá đ c m t s đ c tính c a nguyên li u n m linh chi phù h p v i nh ng tiêu chu n d c li u đư quy đnh. Qua đó
ch n l a đ c ngu n nguyên li u t t, uy tín, giá c h p lí vƠ đ t ch t l ng cao v
d c tính, c ng nh đ m b o an toàn s c kh e cho ng i tiêu dùng khi s d ng s n ph m n c th o d c t n m linh chi. Trong đó đư xác đ nh đ c:
m nguyên li u là 8%
Tro toàn ph n là 1,46% và tro không tan trong HCL đ t 0,14%.
HƠm l ng polyphenol t ng s là 0,053 mg/ml
- Trong giai đo n kh o sát quá trình trích ly b ng n c thì nh n th y các nghi m th c t i u cho đi m c m quan cao, đ ng th i đ t đ c các ch tiêu v hƠm l ng ch t khô hòa tan, hƠm l ng polyphenol cao, đ nh tính có Saponin v i kh n ng
t o b t vƠ đ b n b t lâu nh t :
T l nguyên li u và dung môi là 1:60 .
Nhi t đ trích ly là 75oC .
Th i gian trích ly trong vòng 40 phút.
- T o ra đ c s n ph m “N c th o d c t n m linh chi” có ch t l ng c m quan
đ c đánh giá vƠo lo i khá và s n ph m đ c đ m b o các ch tiêu v vi sinh v i:
T l ph i ch là 12% d ch đ ng 50% và 72 % d ch trích t n m linh chi
Thanh trùng nhi t đ 95oC trong th i gian 30 phút.
- Xây d ng và hoàn thi n “ Quy trình công ngh s n xu t n c th o d c t n m linh chi” v i các thông s t i u đư kh o sát trong quá trình th c hi n đ tài.
4.2 Ki n Ngh
Do th i gian nghiên c u g p rút, đi u ki n phòng thí nghi m l i h n ch không đ
d ng c thí nghi m, c ng nh kinh phí th c hi n đ tài nên chúng tôi v n ch a kh o sát h t các y u t nh h ng trong su t quy trình t o s n ph m hoàn thi n. Vì v y chúng tôi có m t s ki n ngh nh sau:
- Ti n hành nghiên c u thêm ngu n nguyên li u t các lo i n m Linh chi khác nhau
Linh chi đ s m, Linh chi đen, Linh chi vƠngầ.
- C n kh o sát thêm quá trình trích ly b ng dung môi Ethanol đ so sánh hi u qu trích ly c a 2 dung môi.
- Kh o sát thêm giai đo n ph i ch v i các lo i d c li u khác nhau đ t ng giá tr
c m quan c ng nh v m t s c kh e cho ng i tiêu dùng.
- Kh o sát thêm giai đo n thanh trùng c ng nh các ph ng pháp b o qu n khác đ t ng th i h n s d ng s n ph m.
TẨI LI U THAM KH O
1. Aiyegoro and Okoh BMC Complementary and Alternative Medicine, Preliminary phytochemical screening and In vitro antioxidant activities of the aqueous extract of Helichrysum longifolium DC, 2010.
2. Nguy n HoƠng D ng, 2006. Th c hành đánh giá c m quan. Nhà xu t b n i h c Qu c Gia TP.HCM.
3. Nguy n Lơn D ng, 2001, Công ngh nuôi tr ng n m, t p 1 và 2, Nhà xu t b n i h c Qu c Gia TP.HCM.
4. Nguy n H u ng, 2003. Nuôi tr ng ch bi n n m n và n m làm thu c ch a b nh. Nhà xu t b n Nông nghi p Hà N i.
5. Nguy n H u ng vƠ inh Xuơn Linh, 2000. N m n n m d c li u – công d ng và công ngh nuôi tr ng. Nhà xu t b n Nông nghi p Hà N i.
6. Tr n Hùng, 2004. Ph ng pháp nghiên c u d c li u. i h c Y D c TP.HCM. 7. Hoàng Nhân Khôi, Ti u lu n L u ch t siêu t i h n –CO2 trong công ngh trích ly
trong th c ph m, khoa CNTP vƠ u ng, H Nông Lơm TP.HCM.
8. Lê V n Vi t M n,2011, Công ngh ch bi n th c ph m, NXB H Qu c Gia TP.HCM.
9. oƠn Sáng, 2003. Linh chi nguyên ch t và b nh th i nay. Nhà xu t b n Y h c, Hà N i, Vi t Nam.
10. Lê Xuân Thám, 1996. Nghiên c u đ c đi m sinh h c và đ c đi m h p thu khoáng n m Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr). Karst. Lu n án phó ti n s khoa h c sinh h c, i h c Khoa H c T Nhiên, i h c Qu c Gia Hà N i, Vi t Nam. 11. Lê Xuân Thám (1998), N m Linh chi cây thu c quý, NXB koa h c và k thu t, Hà
N i.
12. HƠ Duyên T , 2006. K thu t phân tích c m quan. Nhà xu t b n Khoa H c K Thu t Hà N i.
13. Tr nh Kim V n, 2008, Kh o sát nh h ng c a h dung môi, ph ng pháp và
nhi t đ trích ly đ n m t đ và đ b n màu c a anthocyanin t b p c i tím,Lu n
v n t t nghi p k s , H C n Th . Tài li u t Internet 14. http://blogtiengviet.net/nguyenlandung/2012/07/14/namar_c_uar_ng_taro_thaoco_ damarcc 15. http://linhchi.com.vn/bai-viet/thanh-phan-hoa-hoc-va-tac-dung-tri-benh-cua-nam- linh-chi.html 16. http://linhchinonglam.com/tin-tuc/27/gia-tri-thuc-su-cua-nam-linh-chi.html 17. http://linhchivina.com.vn/?frame=khoahoc&id=&p=6 18. http://luanvan.co/luan-van/khao-sat-sinh-truong-nam-linh-chi-den-amauroderma- subresinosum-corner-phat-hien-tai-vung-nui-chua-chan-viet-nam-2304/ 19. http://luanvan.net.vn/luan-van/de-tai-nghien-cuu-san-xuat-thuc-uong-dong-chai- tu-nhan-tran-19919/ 20. http://namlinhchihanoi.com/thanh-phan-huu-hieu-va-tac-dung-cua-nam-linh- chi.html 21. http://tai-lieu.com/tai-lieu/luan-van-xay-dung-quy-trinh-san-xuat-sinh-khoi-soi- nam-ganoderma-lucidum-6525/ 22. http://vuoncaythuoc.com/cach-chon-va-phan-biet-nam-linh-chi-that-gia.html 23. http://www.linhchivn.com/san-pham 24. http://www.tinmoi.vn/nuoc-uong-tu-thao-moc-xu-huong-tieu-dung-moi- 01719764.html
PH N 5: PH L C Ph l c A
Ph l c 1: Ph ng pháp xác đ nh đ m c a nguyên li u Nguyên t c:
S y m t l ng cân chính xác c a nguyên li u kho ng 1-3 g nhi t đ 1050C cho t i kh i l ng không đ i. Cân m u th sau khi s y. T s chênh l ch kh i l ng c a m u
tr c và sau khi s y, tính đ c đ m c a nguyên li u.
Cách ti n hành:
L y m t c c hình tr , s y khô đ n kh i l ng không đ i 1050C. Cân vào c c m t l ng chính xác kho ng 2g nguyên li u r i đem s y trong t s y nhi t đ 1050C trong 2 gi . L y c c có ch a nguyên li u đư s y đ vào bình hút m, m khóa ho c hé m n p bình hút m cho thông khí v i bên ngoài trong kho ng 1 phút r i đóng kín bình
hút m. ngu i trong bình hút m 15 phút. Cân và ghi k t qu . Ti p t c s y trong 1 gi ,
đ ngu i và cân m u nh trên cho đ n khi k t qu 2 l n cân liên ti p chênh l ch nhau không quá 5mg. ™
Tính k t qu : m c a nguyên li u đ c tính theo công th c sau: X% = 岫欠 伐 決岻 欠 茅 などど Trong đó: X%: đ m nguyên li u (ph n tr m theo kh i l ng). a: kh i l ng nguyên li u khi ch a s y (g).
b: kh i l ng nguyên li u sau khi s y đ n kh i l ng không đ i (g). Ph l c 2: Ph ng pháp xác đnh tro toàn ph n trong nguyên li u
Tro toàn ph n lƠ l ng tro còn l i sau khi nung m t nguyên li u. Các ion trong tro toàn ph n d i d ng cacbonat hay oxid.
Cách ti n hành:
Cân chính xác 1g nguyên li u cho vƠo chén nung đư nung đ n kh i l ng không
đ i. Tr i đ u n m đáy chén vƠ đ t trên b p đi n cho đ n khi n m cháy hoàn toàn và chén không còn b c khói.
t chén vào lò nung 300 –600 oC cho đ n khi vô c hóa hoƠn toƠn (tro không còn mƠu đen). Dùng k p s t l y chén nung ra, đ ngu i kho ng 30 phút trong bình hút m. Cân và ghi k t qu . t chén tro vào lò nung ti p t c nung nhi t đ trên trong 1 gi
vƠ đem ra cơn. Ti p t c lƠm nh v y cho đ n khi nào k t qu hai l n cân liên ti p chênh l ch nhau không quá 0,5 mg.
Tính k t qu : Tro toàn ph n (%): 岫罫に 伐 罫岻 茅 などど 岫罫な 伐 罫岻 茅 岫な 伐 隙岻 Trong đó: G: Tr ng l ng chén nung (g) G1: Tr ng l ng chén nung và m u th (g)
G2: Tr ng l ng chén và tro tr ng sau khi đư nung vƠ cơn đ n tr ng l ng không
đ i. (g)
X: T l đ m nguyên li u
Ph l c 3: Ph ng pháp Xác đ nh tro không tan trong acid Cách ti n hành:
Hòa tan tro toàn ph n trên vƠo 25 ml HCL 4N, đun cách th y trong 10 – 15 phút. Thành ph n tro không tan đ c l c trên gi y l c không tro. R a c gi y l c và tro b ng n c c t nóng đ n khi d ch l c cho ph n ng trung tính (th b ng gi y qu ).
Sau đó đem gi y l c ch a ch t không tan trong HCL cho vƠo chén nung đ nung trên b p đi n đ n khi th y không còn khói tr ng bay lên. Ti p t c đ a vƠo lò nung vƠ
th c hi n nh cách ti n hành c a tro toàn ph n.
Tính k t qu :
Tro không tan trong acid (%):
= 岫陳態貸陳怠岻
陳 茅 などど
m1: Kh i l ng chén nung (g)
m2: Kh i l ng chén nung và tro không tan trong HCL (g) m: Kh i l ng m u th (g).
Ph l c 4: Ph ng pháp xác đ nh hƠm l ng polyphenol [Folin ậ Ciocalteau]
Ph ng pháp Folin-ciocalteu, là m t trong s nh ng ph ng pháp đ c s d ng
đ đ nh l ng Polyphenol toàn ph n.
Thu c th Folin–ciocalteu (h n h p mu i ph c polyphosphotungstate - molydate) r t nh y đ i v i ch t kh , n u có m t h p ch t polyphenol trong môi tr ng ki m nh thì s b kh thành s n ph m ph c molydenium-tungsten có màu xanh.
Nguyên t c:
Polyphenol ph n ng v i thu c th Folin (dung d ch màu vàng c a polyphosphatetungstenate vƠ molydate) trong môi tr ng ki m y u t o thành màu xanh
Quy trình đ c th c hi n nh sau:
Hóa ch t c n dùng: - Folin 10%.
- Na2CO3 2%. - Acid gallic.
Xây d ng ph ng trình đ ng chu n v i acid gallic;
- Chu n b d ch acid gallic g c v i n ng đ 1mg/ml trong n c c t.
- Pha loãng dung d ch g c thành các n ng đ t 0.01mg/ml đ n 0.05mg/ml b ng
n c c t.
- B trí thí nghi m nh sau vƠ ti n hành l p l i 3 l n.
ng nghi m 1 2 3 4 5 6
1ml dd acid gallic (mg/ml) 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
Folin 10% (ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Na2CO3 2%. (ml) 2 2 2 2 2 2
- L c đ u và trong bóng t i nhi t đ 45oC trong 15 phút. L c đ u trong quá trình .
- Ti n hƠnh đo đ h p ph b c sóng 765nm.
Xác đ nh hƠm l ng polyphenol trong m u d ch trích.
- Chu n b m u d ch trích t n m Linh chi đư pha loưng đ n n ng đ thích h p (n ng đ nghiên c u có ph n ng màu n m trong kho ng tuy n tính c a đ ng chu n acid gallic). Pha loãng 10 l n: Hút 1ml dung d ch m u cho vào ng nghi m
vƠ hút thêm 9ml n c c t.
- L y 0.5 ml dung d ch m u c n đo đư pha loưng cho vƠo ng nghi m, ti p theo cho nhanh 2.5ml Folin 10% và 2ml Na2CO3 2%.
- L c đ u và trong bóng t i nhi t đ 45oC trong 15 phút. L c đ u trong quá trình .
- Ti n hƠnh đo đ h p ph b c sóng 765nm.
- i v i m u nghiên c u thì hàm l ng polyphenol đ c tính toán d a theo đ ng chu n acid gallic trên.
Ph l c 5: Ph ng pháp đnh tính h p ch t Flavonoid trong s n ph m
M c đích:
Tr c h t, các d n ch t flavonoid có kh n ng d p t t các g c t do nh OH, ROO
(là các y u t gây bi n d , h y ho i t bƠo, ung th , t ng nhanh s lưo hóa,...), đ ng th i, flavonoid t o ph c v i các ion kim lo i nên có th ng n c n đ c các ph n ng oxy hóa
mà nh ng ion đó đóng vai trò nh ch t xúc tác. Do v y, các ch t flavonoid có tác d ng b o v c th , ng n ng a x v a đ ng m ch, tai bi n m ch máu não, lão hóa, thoái hóa gan, t n th ng do b c x .
Vì th , vi c đ nh tính h p ch t flavonoid có trong s n ph m hoàn thi n nh m m c
đích ch ng minh s có m t c a h p ch t có l i này trong s n ph m, đ ng th i là c s
cho các nghiên c u ch ng minh kh n ng d c tính c a s n ph m sau này. Ti n hành thí nghi m:
- Pha dung d ch FeCl3 5 %: cân 5 g FeCl3 d ng mu i khan, thêm c n 96o vào cho
đ 100 ml.
- Ti n hành ch bi n n c th o d c t n m Linh chi d a trên t t c các cách th c,