3.6.1.1. Kết quả xác định kiểu gen P khi chạy sản phẩm RT – PCR trên gel agarose 2%
Hình 20. Kết quả điện di trên gel agarose xác định kiểu gen P
*Chú thích: Giếng 7 là thang chuẩn
Qua hình 20 cho thấy kết quả chạy điện di 12 mẫu thu đƣợc 11 băng có kích thƣớc 224 bp (tƣơng ứng với kiểu gen P[8]), chỉ có giếng số 4 không xuất hiện băng nên chƣa biết đƣợc kiểu gen P của mẫu này. Kết quả thu đƣợc này phản ánh sự phổ biến của kiểu gen P[8] trong cả nƣớc năm 2010.
200bp 300bp 400bp 500bp 100bp 224bp
3.6.1.2. Sự phân bố kiểu gen P lưu hành tại Việt Nam
Kết quả phân tích 883 mẫu xác định kiểu gen P thu đƣợc ở bảng 12 nhƣ sau:
Bảng 12. Tỷ lệ lƣu hành các kiểu gen P tại Việt Nam năm 2010 Kiểu gen
Tổng số P4 P6 P8 Pmix Pnt
Số mẫu 31 5 835 11 1 Tỷ lệ (%) 3,51 0,57 94,56 1,25 0,11
* Chú thích:
Pmix: kiểu gen P hỗn hợp của P4, P6 và P8 Pnt: kiểu gen P không xác định được
Từ kết quả thu đƣợc theo bảng 12 chúng tôi có đồ thị hình 21 nhƣ sau:
3.51% 0.57% 94.56% 1.25% 0.11% P4 P6 P8 P mixed P NT
Hình 21. Tỷ lệ các kiểu gen P tại việt Nam
Theo bảng 12 và biểu đồ hình 21 cho thấy trong tổng số 883 mẫu đƣợc xác định kiểu gen P có 835 mẫu xác định là kiểu gen P[8] chiểm tỷ lệ 94,56%, có 2 kiểu gen khác lƣu hành cùng với P[8] là P[4] và P[6] chiếm tỷ lệ tƣơng ứng lần lƣợt là 3,51% và 0,57%, kiểu gen hỗn hợp của 3 kiểu gen P[8], P[4] và P[6] có 11 mẫu chiếm tỷ lệ 1,25%. Đặc biệt xuất hiện 1 mẫu không xác định đƣợc kiểu gen P chiếm tỷ lệ 0,11%.
Theo kết quả thống kê từ năm 1998 đến 2009 [6] kiểu gen P[8] lƣu hành phổ biến với tỷ lệ 69,36%, các kiểu gen P[4] và P[6] chiếm tỷ lệ lần lƣợt là 8,17% và 2,40%. Các kết quả này cũng tƣơng tự với kết quả chúng tôi thu đƣợc, tuy nhiên tỷ lệ chƣa xác định kiểu gen P những năm trƣớc đây còn cao chiếm 13,25%.
3.6.1.3. Sự phân bố các týp P lưu hành theo khu vực
Bảng 13. sự phân bố các kiểu gen theo khu vực trong cả nƣớc Địa Điểm Miền Bắc Miền Trung Miền Nam
Kiểu gen và tỷ lệ (%) P4 27 (9,34) 4 (1,37) 0 (0,00) P6 4 (1,38) 0 (0,00) 1 (0,33) P8 254 (87,89) 288 (98,63) 293 (97,02) Pmix 4 (1,38) 0 (0,00) 7 (2,32) Pnt 0 (0,00) 0 (0,00) 1 (0,33) Tổng 289 292 302
Từ kết quả phân tích thu đƣợc ở bảng 13 nhận thấy tỷ lệ P[8] lƣu hành phổ biến ở cả 3 miền với tỷ lệ tƣơng ứng của miền Bắc, Trung, Nam lần lƣợt là 87,89%, 98,63% và 97,02%, tuy nhiên tỷ lệ này có sự khác biệt giữa các miền. So sánh sự khác biệt tỷ lệ P[8] giữa miền Bắc với miền Trung và Nam thu đƣợc giá trị P tƣơng ứng lần lƣợt là 0,0000 và 0,000024 đều nhỏ hơn 0,05, nhƣ vậy sự khác biệt giữa miền Bắc với hai miền còn lại có ý nghĩa thống kê. Tỷ lệ giữa miền Trung và Nam không có ý nghĩa thống kê với P = 0,1797 > 0,05. nhƣ vậy có thể kết luận rằng chủng P[8] lƣu hành ngày càng phổ biến theo chiều từ Bắc vào Nam.
Trong số các kiểu gen P có sự khác biệt rõ ở kiểu gen P[4]. Trong đó miền Bắc tỷ lệ cao nhất chiếm 9,34%, miền Trung chiếm tỷ lệ thấp với 1,37% trƣờng hợp và miền Nam không xuất hiện kiểu gen P[4]. Sự khác biệt giữa miền Bắc với miền Trung, Nam và miền Trung với miền Nam có ý nghĩa thống kê với giá trị P tƣơng ứng lần lƣợt là 0.0000 ; 0,0000 và 0.0411. Nhƣ vậy tỷ lệ kiểu gen P[4] tăng dần theo chiều từ Nam ra Bắc
Các kiểu gen còn lại chiếm tỷ lệ nhỏ và có sự phân bố đồng đều ở cả 3 miền, đặc biệt kiểu gen P không xác định đƣợc chỉ xuất hiện tại miền Nam với 1 mẫu chiếm 0,33%, so sánh với số liệu công bố từ năm 2007 đến 2009 [6] thấy rằng tỷ lệ chủng P không xác định kiểu gen ở cả 3 miền xuất hiện năm 2010 với số mẫu thấp nhất. Nhƣ vậy có xu hƣớng lƣu hành phổ biến các kiểu gen P[8] và P[4] trong cả nƣớc.
3.6.1.4. Sự phân bố kiểu gen P lưu hành theo thời gian
Để đánh giá xu hƣớng biến đổi các kiểu gen P theo thời gian chúng tôi tiến hành so sánh với số liệu thống kê dịch tễ đã công bố những năm trƣớc đây tại Việt Nam, kết quả thu đƣợc ở bảng 14 nhƣ sau:
Bảng 14. Tỷ lệ các kiểu gen P lƣu hành theo thời gian [3, 4, 6] Thời gian Các kiểu gen P và tỷ lệ lƣu hành (%)
P8 P6 P4 Pmix Pnt 1998 - 2000 41 27 120 22 12 18,47 12,16 54,05 9,91 5,41 2000 – 2001 201 11 18 2 2 85,90 4,70 7,69 0,85 0,85 2001 – 2002 85 25 22 8 14 55,19 16,23 14,29 5,19 9,09 2002 – 2003 62 3 40 11 4 51,67 2,50 33,33 9,17 3,33 2005 – 2006 162 0 7 0 54 72,65 0 3,14 0 24,22 2007 224 0 0 27 9 86,15 0 0 10,38 3,46 2008 399 1 22 46 221 57,91 0,15 3,19 6,68 32,08 2009 853 4 12 78 67 84,12 0,39 1,18 7,69 6,61 2010 835 5 31 11 1 94,56 0,57 3,51 1,25 0,11 Tổng 2862 76 272 205 384
Từ kết quả thu đƣợc tại bảng 14 chúng tôi có đồ thị hình 22 nhƣ sau: 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Tỷ lệ % P8 P6 P4 Pmix Pnt
Hình 22. Sự phân bố kiểu gen P theo thời gian
Từ đồ thị hình 22 nhận thấy sự lƣu hành các kiểu gen P có sự phân chia theo thời gian. Giai đoạn từ năm 1998 – 2000 kiểu gen P[4] chiếm ƣu thế, nhƣng từ năm 2000 trở lại đây kiểu gen P[8] lại lƣu hành phổ biến và ổn định tại Việt Nam với tỷ lệ dao động từ 51,67% và đạt cao nhất là 94,56% vào năm 2010.
Các kiểu gen P[4], P[6] xuất hiện nhiều từ năm 1998 đến 2005 nhƣng đến nay các kiểu gen này xuất hiện với tỷ lệ rất thấp. Các trƣờng hợp mang kiểu gen P hỗn hợp và tỷ lệ chủng P không xác định đƣợc kiểu gen chiếm tỷ lệ nhỏ so với những năm trƣớc đây và ít có sự biến đổi theo thời gian.