Nếu loại protein không có hệ số tắt thì tính nồng độ protein như sau: Nồng độ protein (mg/ml) = 1,55. A280 – 0,77. A260
Độ hấp thu ở 280nm thay đổi tùy thuộc vào loại protein nhưng hệ số tắt đo được cho mỗi protein cho phép tính nồng độ của protein tinh sạch.
Các protein hấp thụ tia cực tím cực đại ở λ =280nm
do các acid amin thơm như tryptophan, tyrosine và phenylalanine.
Không dùng được cho các dung dịch có nồng độ protein nhỏ hơn 0.1mg/ml hoặc khi có mặt nhiều chất khác mà hấp thụ cùng một vùng UV hoặc protein trong dung dịch huyền phù. A280/A260 thấp hơn 0,6 nghĩa là dung dịch protein chưa sạch, bị lẫn các chất khác.
Không dùng được cho các dung dịch có nồng độ protein nhỏ hơn 0.1mg/ml hoặc khi có mặt nhiều chất khác mà hấp thụ cùng một vùng UV hoặc protein trong dung dịch huyền phù. A280/A260 thấp hơn 0,6 nghĩa là dung dịch protein chưa sạch, bị lẫn các chất khác.
Phạm vi áp dụng
Thiết bị đo hồng ngoại để xác định hàm lượng chất béo, protein và lactoza của sữa, trên cơ sở đo hấp thụ bức xạ vùng hồng ngoại giữa ở các bước sóng đại diện cho từng thành phần cần phân tích.
Nguyên tắc:
Đo lượng bức xạ được hấp thụ bởi nhóm amit thứ hai của các liên kết peptit ở bước sóng 6,5 µm để xác định hàm lượng protein.
Đánh giá hàm lượng của protein được bằng cách đối chiếu với lượng ánh sáng hồng ngoại hấp thụ do nước ở cùng bước sóng hoặc do sữa ở bước sóng khác mà ở đó chỉ hấp thụ nhẹ hợp chất đang đo.