THỰC NGHIỆM 2.1. Đối tƣợng, nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
Củ cây bách bộ thân leo Stemona tuberosa thu hái ở Tây Nguyên vào tháng 10 -2013. Mẫu do TS. Đỗ Hữu Thư, Viện Sinh thái tài nguyên và Môi trường, VAST xác định tên khoa học.
2.1.2. Nội dung nghiên cứu
- Tiến hành ngâm chiết củ bách bộ theo hướng chiết ancaloit.
- Phân lập một số cấu tử từ cao chiết ancaloit tổng bằng các phương pháp sắc ký cột nhồi silica gel.
- Xác định cấu trúc của một số cấu tử tách được bằng phương pháp vật lý hiện đại như 1D NMR và 2D NMR.
2.1.3. Phương pháp nghiên cứu
- Phương pháp thu hái và xử lý lí mẫu. - Phương pháp ngâm chiết để thu cặn chiết.
- Phương pháp sắc kí bản mỏng, sắc kí cột để nhận dạng định tính và tách chất. - Phương pháp phổ IR, 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC, để nghiên cứu cấu trúc phân tử các chất tách được.
2.2. Thiết bị, dụng cụ, hóa chất
2.2.1. Thiết bị
- Thiết bị chiết siêu âm Ultrasonic cleaner (Hàn Quốc), tại bộ môn Hóa học Hữu cơ, khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội.
- Máy đông khô chân không Labconco, tại Bộ môn Hóa học hữu cơ, khoa hóa học, trường ĐHSP Hà Nội.
- Thiết bị đo cộng hưởng từ hạt nhân Brucker Avance 500MHz của Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.2.2. Dụng cụ
- Sắc kí cột với chất hấp phụ silicagel (Merck) kích thước hạt 40 – 60µm. - Sắc kí bản mỏng đế nhôm tráng sẵn silicagel (Merck).
- Đèn tử ngoại soi sắc kí bản mỏng.
- Các dụng cụ thông thường trong phòng thí nghiệm.
2.2.3. Hóa chất
- Dung môi: metanol, etyl axetat, n – hexan, clorofom.
- Thuốc hiện hình bản mỏng: Dung dịch H2SO4 10% trong metanol.
- Các hệ dung môi triển khai bản mỏng:
1. Hệ : n- hexan: etyl axetat 3:1 2. Hệ : n- hexan: etyl axetat 2,5: 1 3. Hệ : n- hexan: etyl axetat 2: 1 4. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1,5: 1 5. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1,2: 1 6. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1: 1 7. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1: 2 8. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1: 3 9. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1: 4 10. Hệ : n- hexan: etyl axetat 1:6
2.3. Quá trình thực hiện
2.3.1. Thu hái và sơ chế mẫu
Rễ cây bách bộ lá nhỏ thu hái tại Tây Nguyên vào tháng 10 – 2013. Sau đó rễ bách bộ được thái nhỏ, phơi khô.
2.3.2. Thu nhận dịch chiết
Rễ bách bộ có khối lượng 1,0 kg (dạng khô, thái nhỏ) được ngâm trong hệ dung môi H2O : MeOH = 80:20 (5 lít). Mẫu được ngâm trong 1 tuần, chiết siêu âm nhiều lần. Tiến hành lọc tách dung dịch có mầu vàng và phần bã. Phần bã tiếp tục được ngâm trong dung môi H2O : MeOH. Tiến hành lặp lại nhiều lần đến khi phần nước lọc chỉ còn lại mầu vàng nhạt. Phần dung dịch được tiến hành cất cô quay, thu được cao tổng có mầu vàng sậm, dạng lỏng, sền sệt (PVC). Sau đó, cao tổng được xử lý theo hướng chiết ancaloit theo sơ đồ 2.1 sau.
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ thu nhận cao ancaloit tổng
coc Cao tổng
( PVC)