2. T NG QUAN TÀI L IU
2.2.4 Các bc trong nuôi cy mô t bào th cv t[4]
nh sinh tr ng, ch i bên hay chóp đnh và ch i non n y m m t h t đ c s d ng đ nuôi c y. M u c y tr c khi c y vào môi tr ng đ c kh trùng b ng natrihypochlorit, canxihypochlorit hay chlorua th y ngân.
Môi tr ng th ng đ c s d ng đ nhân gi ng in vitro hi n nay là môi tr ng MS (Murashige và Skoog, 1962). i v i m u d b hóa nâu, c n b sung thêm than ho t tính vào môi tr ng hay ngâm m u tr c khi c y v i h n h p ascorbic acid và citric acid.
26 M u nuôi c y đ c c y trên môi tr ng t o th nhân gi ng. Có hai th nhân gi ng in vitro: th ch i (multiple shoot), th c t đ t (cutting). Tuy nhiên có nh ng loài ch có th t o c m ch i t mô s o.
nhân gi ng, trong môi tr ng nuôi c y th ng b sung cytokinin, GA3 và các ch t h u c khác.
2.2.4.3 Nhân gi ng
V t li u nuôi c y là nh ng th ch i, môi tr ng nuôi c y thông th ng gi ng v i môi tr ng t o th ch i, đôi khi n ng đ ch t đi u hòa sinh tr ng gi m cho phù h p v i quá trình nhân gi ng kéo dài. i u ki n nuôi c y thích h p giúp cho quá trình t ng sinh đ c nhanh. Cây nhân gi ng in vitro có tr ng thái sinh lý tr và
đ c duy trì trong th i gian vô h n.
2.2.4.4 Tái sinh cây hoàn ch nh
ây là giai đo n t o cây con hoàn ch nh có đ y đ thân, lá và r chu n b chuy n ra v n m. Các ch t có tác d ng t o ch i đ c lo i b , thay vào đó là các ch t kích thích quá trình t o r (th ng là các ch t thu c nhóm auxin). i u ki n nuôi c y t ng t v i đi u ki n t nhiên bên ngoài.
2.2.4.5 Chuy n cây ra v n m
Cây con đ c nuôi c y trong đi u ki n n đnh v dinh d ng, ánh sáng, nhi t
đ , đ m… nên khi chuy n cây ra đ t, v i đi u ki n t nhiên hoàn toàn khác nh dinh d ng th p, c ng đ ánh sáng m nh, nhi t đ cao, m đ th p, cây con d m t n c và hay héo.
kh c ph c tình tr ng này ta nên m cây con trên lu ng m hay ch u có c ch t d thoát n c, t i x p, gi đ c m. Trong th i gian đ u c n ph i đ c che ph nylon đ gi m quá trình thoát h i n c lá (7 – 10 ngày). R đ c t o ra trong quá trình c y mô s d n d n b l i đi và r m i xu t hi n, cây con th ng đ c x lý v i ch t kích thích ra r .
27