Que c y Erlen th y tinh c m̀i 250ml
èn c n, b t l a - Becher 250ml, 500ml - Erlen 250ml, 500ml - B̀nh đ nh m c 100ml - a khu y - Pipet 1ml, 5ml, 10ml, 20ml - Buret - Nhi t k - ng nh gi t - V i l c - Ph u l c THI T B - Cân k thu t - Cân phân t́ch - Ḿy xay sinh t
- B p đi n - T m nuôi c y vi sinh v t
- Ḿy l c - Ḿy ly tâm
Trang 29
2.3 Quyătr̀nhătinhăluy năd u
H̀nhă2.2ăQuyătr̀nhătinhăluy năd uăćăbasa
D u ć thô Th y h́a Trung h̀a R a d u S y d u T y m̀u L c D u ć tinh luy n T p ch t T p ch t NaOH dd NaCl N c ńng t ho t t́nh dd NaCl Ch t keo, phospholipid
Trang 30
Thuy t minh quy tr̀nh:
Th yă h́a:
Trong d u thô t n t i ćc t p ch t nh́m phospholipid v̀ ch t keo h̀a tan, m c đ́ch c a th y h́a l̀ s d ng dung d ch mu i n ng đ ph̀ h p, khu y tr n v̀o d u đ di n ra ph n ng hydrat h́a, l̀m t ng đ phân c c c a ćc th̀nh ph n ǹy, do đ́ gi m đ h̀a tan c a ch́ng trong d u, sau đ́ ć th đ l ng v̀ d̀ng n c đ r a b ćc th̀nh ph n k t t a.
Trung h̀a:
M c đ́ch công đo n ǹy ch y u l̀ lo i b ćc acid b́o t do ć trong d u b ng ćch s d ng ki m (NaOH).
Ngòi ra, trong qú tr̀nh trung h̀a th̀ x̀ ph̀ng sinh ra l i ć t́c d ng h p ph v̀ ḱo theo ćc t p ch t kh́c nh protein, ch t m̀u, ch t nh a v̀ th m ch́ c nh ng t p ch t c h c v̀o k t t a. Do đ́, d u sau trung h̀a đ̃ đ c lo i b ph n l n t o ch t v̀ ć m̀u śng h n. T̀y v̀o ch s acid ban đ u c a d u ć thô, đ c x́c đ nh khi kh o śt nguyên li u, ta ć th s d ng ki m nh ng n ng đ v̀ đi u ki n nhi t đ ph̀ h p.
R ad u:
M c đ́ch nh m lo i h t x̀ ph̀ng ra kh i d u sau qú tr̀nh trung h̀a.
S yăd u:
M c đ́ch nh m lo i n c c̀n śt l i trong d u đ tŕnh l̀m d u d b oxy h́a.
T yă mƠu:
M c đ́ch lo i b ra kh i d u ćc h p ch t t o m̀u không mong mu n, bên c nh đ́ c̀n lo i b l ng phospholipid, ćc s n ph m oxy h́a v̀ x̀ ph̀ng c̀n śt l i trong d u. S d ng than ho t t́nh l̀m ch t h p ph v̀ ć kh n ng t y m̀u cao v̀ t l h́t d u t ng đ i th p, gi m thi u s hao h t d u.
L c:
M c đ́ch c a công đo n cu i c̀ng ǹy l̀ lo i b đ t ho t t́nh v̀ t t c ćc t p ch t c̀n śt l i, đ m b o cho ch t l ng c a s n ph m d u tinh luy n.
Trang 31
Ćch ti n h̀nh:
Th yă h́aăvƠăr aăd u:
Sau khi l y m u d u thô cho v̀o d ng c ch a, ti n h̀nh th y h́a d u v i dung d ch mu i NaCl n ng đ 0,3%, đun d u v̀ dung d ch mu i đ n nhi t đ 50 – 60oC, cho t t dung d ch mu i v̀o d u, khu y đ u v̀ m nh đ t ng s pha tr n mu i trong d u, t o h nh , l ng n c mu i s d ng l̀ 8% (v/w) so v i l ng d u. Ti p t c duy tr̀ nhi t đ v̀ khu y đ u trong 40 ph́t, s khu y tr n liên t c l̀ c n thi t đ duy tr̀ h nh , gi cho dung d ch mu i phân t́n đ u trong d u v̀ ph n ng hydrat h́a di n ra tri t đ , sau đ́ đ l ng v̀ chuy n v̀o b̀nh ĺng.
Sau m t th i gian đ l ng c n trong b̀nh, quan śt th y hi n t ng pha n c bên d i tr nên đ c tr ng, đi u ǹy cho th y dung d ch mu i đ̃ phân c c h́a t t ćc th̀nh ph n phospholipid, ch t keo ć trong d u v̀ lôi ḱo ch́ng v pha n c. Bên c nh đ́, do ćc th̀nh ph n phospholipid v̀ ch t keo ć t́nh acid, nên khi b phân c c h́a, ch́ng c ng lôi ḱo 1 ph n ćc acid b́o t do ć trong d u v̀o pha n c, l̀m gi m ch s acid c̀a d u v̀ t o s thu n l i cho qú tr̀nh trung h̀a sau đ́.
M van x lo i b pha dung d ch mu i n m ph́a d i, ti p t c d̀ng n c c t 90oC r a v̀ x nhi u l n đ n khi th y pha n c bên d i tr nên trong v̀ không c̀n đ c th̀ ng ng l i v̀ hòn t t qú tr̀nh th y h́a.
M t đi m c n l u ́ l̀ sau khi k t th́c qú tr̀nh r a d u, m t ph n n c r a s n m l i trong m u d u v̀ gây nh h ng đ n hi u qu c a qú tr̀nh trung h̀a, do đ́, tr c khi th c hi n trung h̀a d u, c n gia nhi t d u đ n nhi t đ sôi c a n c v̀ s y đ n khi n c bay h i hòn tòn.
Sau khi th y h́a v̀ r a, đ trong c a d u đ̃ đ c c i thi n h n so v i ban đ u. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trung h̀a:
Gia nhi t d u đ n 90oC, cho t t NaOH n ng đ 4% v̀o v̀ khu y đ u liên t c, l ng ki m s d ng ph thu c v̀o l ng d u đem trung h̀a, duy tr̀ nhi t đ v̀ khu y trong 50 ph́t đ ph n ng di n ra hòn tòn. Sau khi k t th́c th i gian ph n ng quan śt th y hi n t ng c n x̀ ph̀ng n i lên trên b m t, d u ph́a d i kh́ trong v̀ śng m̀u, đi u ǹy l̀ do x̀ ph̀ng t o th̀nh đ̃ ć t́c d ng lôi ḱo ćc t p ch t ć trong d u v̀ c m t ph n s c t v̀o k t t a, do đ́ d u sau trung h̀a đ̃ đ c c i thi n đ́ng k v ch t l ng c ng nh m̀u s c v̀ đ trong.
Trang 32 C n ch́ ́ l̀ trong qú tr̀nh trung h̀a, vi c khu y đ u v̀ liên t c ngay th i đi m cho NaOH v̀o d u l̀ r t quan tr ng, hi u qu c a vi c khu y s quy t đ nh hi u qu c a vi c lôi ḱo t p ch t v̀ quan tr ng h n l̀ śp v̀o k t t a. M t s m u d u sau khi trung h̀a đ m t th i gian s xu t hi n hi n t ng “đ́m mây” tr ng l l ng trong d u, đi u ǹy l̀ do trong qú tr̀nh trung h̀a, x̀ ph̀ng t o t a không đ ng lo t nên không lôi ḱo đ c h t ćc ch t nh́m phospholipid, đ kh c ph c th̀ ngay t khi nh gi t NaOH đ u tiên v̀o m u d u, c n thi t ph i khu y nhanh đ phân t́n đ u l ng ki m cho v̀o v̀ c x̀ ph̀ng sinh ra, cho ki m v̀o đ u đ n v̀ liên t c, k t h p v i duy tr̀ vi c khu y tr n h p ĺ s gíp t i u h́a ph n ng v̀ t ng hi u qu lôi ḱo t p ch t c a x̀ ph̀ng.
R a d u:
Sau khi k t th́c qú tr̀nh trung h̀a, th c hi n r a d u đ lo i b c n x̀ ph̀ng c̀ng t p ch t ra kh i d u, đ u tiên d̀ng dung d ch NaCl 0,3% t ng t nh qú tr̀nh th y h́a, cho v̀o m u d u v̀o khu y tr n đ u đ t o h nh , sau đ́ đ l ng. K t th́c qú tr̀nh l ng s ć hi n t ng c n x̀ ph̀ng b lôi ḱo xu ng b m t phân ćch 2 pha d u v̀ mu i, dung d ch mu i ć m̀u cam s m, đi u ǹy l̀ do n c mu i đ̃ lôi ḱo c n x̀ ph̀ng xu ng pha n c, c̀ng v i đ́ l̀ h u h t s c t ć trong d u c ng b r a xu ng theo ćc t p ch t kh́c.
M van x lo i b pha n c bên d i c̀ng c n x̀ ph̀ng, ti p t c d̀ng n c c t 90oC r a v̀ x nhi u l n đ n khi pha n c bên d i trong su t v̀ không c̀n c n. K t th́c qú tr̀nh r a, c n đem s y d u đ lo i b h t n c t ng t nh trên, m u d u sau khi k t th́c qú tr̀nh ǹy ć t́nh ch t c m quan đ c c i thi n r̃ r t, d u ć m̀u v̀ng śng v̀ nh t h n nhi u so v i d u thô, đ trong kh́ t t, ć th nh̀n xuyên qua tuy v n c̀n h i m , m̀i c a d u đ c c i thi n, không c̀n n ng v̀ kh́ ch u nh tr c tuy nhiên khi gia nhi t th̀ xu t hi n m̀i tr l i.
T yă mƠu:
B c v̀o công đo n t y m̀u, gia nhi t d u đ n 80 – 90oC, sau đ́ cho đ t ho t t́nh v̀o v̀ khu y đ u, l ng đ t s d ng l̀ 0,5% so v i l ng d u (w/w), duy tr̀ khu y trong 1 gi , gi cho ćc h t đ t tr ng th́i huy n ph̀ l l ng đ đ t hi u qu t y m̀u cao nh t. K t th́c qú tr̀nh t y m̀u.
Trang 33
L c:
ây c ng l̀ công đo n cu i c a quy tr̀nh tinh luy n d u, l c b đ t ho t t́nh b ng ćc lo i gi y l c ć đ ng ḱnh l gi m d n, c n thi t ph i gia nhi t nh m u d u trong su t qú tr̀nh đ gi m đ nh t, thu n l i cho thao t́c l c, tuy nhiên c n c g ng k t th́c công đo n c̀ng s m c̀ng t t v̀ trong đi u ki n gia nhi t lâu, d u s d b oxy h́a do ti p x́c v i không kh́. Qú tr̀nh l c ć th d ng l i khi quan śt b ng m t d i ́nh đèn r i v̀o m u d u không c̀n th y đ t ho t t́nh v̀ m u d u hòn tòn trong su t. Thu nh n s n ph m b ng ćch cho v̀o l đ ng m u v̀ đ y n p, b o qu n
Trang 34
2.4 Nuôiăc yăviăkhu năLactobacillus plantarumăvƠăthuănh năenzymeălipase
Vi khu n L. plantarum đ c gi gi ng trên môi tr ng MRS th ch nghiêng, đ nh k 1 tu n c y truy n 1 l n. Khi c y sang môi tr ng MRS l ng đ thu enzyme, ch́ng tôi b sung thêm d u ć tinh luy n v i l ng l̀ 1% th t́ch môi tr ng, d u ć tinh luy n đ́ng vai tr̀ l̀ ch t c m ng sinh lipase c a vi khu n. Ćc ng nuôi c y đ c 37oC trong 24 gi . V̀ L. plantarum sinh enzyme lipase ngo i b̀o nên sau khi k t th́c th i gian nuôi c y, ti n h̀nh ly tâm 3500 v̀ng/ph́t trong 20 ph́t đ lo i b x́c vi sinh v t v̀ thu d ch môi tr ng ć ch a enzyme.
X́c đ nh ho t t́nh enzyme:
B ngă2.2ăH́aăch tăchu nă b ăchoăx́căđ nhăho tăt́nhălipase
H́Aă CH T ĆCHăPHA
măphosphateăpHă7ă– 0,1 M
(pha trong n c c t)
H̀a tan 7,1 g Na2HPO4 trong 500 ml n c c t. H̀a tan 6,8 g KH2PO4 trong 500 ml n c c t. Sau đ́ cho t t KH2PO4 v̀o Na2HPO4 đ n khi đ t pH 7, đo b ng ḿy đo pH.
Nh ă t ngă
d u