- Tư liệu của quỏ trỡnh sắc ký
b. Tốc độ giấy
3.4 Khảo sỏt hệ dung mụi rửa giải (pha động)
Trong sắc kớ hấp thụ pha ngược, pha tĩnh là cỏc chất cú bề mặt khụng phõn cực nờn pha động phải là hệ dung mụi phõn cực, chất tan nào cú độ phõn cực kộm hơn sẽ bị lưu giữ lõu hơn ở trong cột, vỡ vậy chất nào cú độ phõn cực kộm hơn sẽ được rửa giải ra sau. Ngược lại trong 1 dóy đồng đẳng với hệ pha ngược thỡ thời gian lưu sẽ tăng theo chiều dài của mạch cỏc bon, của nhúm thế và số nhúm thế. Vỡ vậy đối với hỗn hợp nghiờn cứu thỡ lần luợt từ mono cho đến penta được tỏch .
Theo cỏc tỏc giả Jitka Frộbortovỏ. [21], S. Dupeyron[2]. theo tớnh chất của hệ pha ngược và tớnh chất của chất nghiờn cứu, chỳng tụi chọn ba hệ dung mụi sau để tiến hành khảo sỏt nhằm lựa chọn 1 hệ dung mụi phự hợp nhất, ba hệ đú là:
1. Metanol:Acetonitril.
2. Acetonitril : H3PO4 0.007M . 3. Metanol: H2O: Acetonitril .
Sau khi khảo sỏt để tỡm một thành phần thớch hợp nhất(tại thành phần đú khả năng tỏch cỏc chất là tốt nhất) cho từng hệ pha động trờn chỳng tụi nhận thấy ở cỏc tỉ lệ
4. Metanol:Acetonitril... (85 :15 v/v) 5. Acetonitril : H3PO4 0.007M (58 :42 v/v) 6. Metanol: H2O: Acetonitril (49 :48 :3 v/v) Khả năng tỏch của mỗi hệ là tốt nhất.
Bảng 3.4 ảnh hưởng của hệ dung mụi đến thời gian lưu Cột Hypersil ODS 5àm250 x 4.6 250 x 4.6 àm.7 10 11 13
Stt Hệ pha động 1 2 3 4 5 1 Metanol:Acetoniltril (85:15 v/v) 7(P) 8(p) 9.5(p) 11(p) 13,5(phút) 2 CH3OH : H3PO4 0.007 M (57 : 43 v/v) 10 13 15 20 26
3 Metanol : H2O :Acetonitril (49:48:3 v/v) 5 6 9 11.5 18,5 1: 2clophenol 3: 2.4.6 triclophenol 2 :2.4clophenol 4: 2.3.4.6 tetraclophenol 2.4clophenol 4: 2.3.4.6 tetraclophenol 5 : penta.clophenol
Thời gian lưu (tR) của chất phõn tớch cú 1 ý nghĩa quan trọng trong kỹ thuật sắc kớ. Nú cho ta biết cỏc chất phõn tớch được rửa giải nh thế nào trong cỏc điều kiện đó chọn và được dựng để xỏc định tớnh chất phõn tớch.
Hệ số dung tớch k’i được xỏc định bằng cụng thức. k’i = (tR -tO)/tO
Qua thực nghiệm ta xỏc định được tR. Với thời gian khụng lưu giữ mẫu (tO) cú thể xỏc định được bằng việc đo khoảng thời gian xuất hiện pic của dung mụi (pha động) được chọn để sắc kớ. Với hệ dung mụi CH3OH/H2O/CH3CN. (49:48:3v/v) thỡ tO = 1,5 phút Hệ Axetonitril : : H3PO4 0.007M to=4phút Hệ Metanol: Axetonitril (85:15v /v) t0=3.5phút.
Thụng qua tR và tO,chỳng tụi xỏc định được hệ số k’i của mỗi loại hệ dung mụi. Mối quan hệ giữa hệ dung mụi và hệ số k’được biểu diễn ở hỡnh 3.5.
hypersil-ODS , cỡ hạt 5àm
Hệ số k’ của mỗi clophenol trong mỗi hệ dung mụi khỏc nhau càng nhiều thỡ sự phõn giải (sự tỏch) giữa chỳng càng tốt. Nhỡn vào hỡnh 3.5 chúng ta thấy hệ 3. (Metanol :H2O:Axetonitril). cho ta kết quả tỏch tốt nhất.
Để giải thớch kết quả bảng 3.5 chỳng tụi sử dụng định nghĩa độ phõn cực của Rohscheneider trong tài liệu do tỏc giả Phạm Luận viết[3] , cỏc dung mụi cú độ phõn cực là: metanol = 5,11, axetonitril = 5,8 H2O = 10,2 nờn ta cú độ phõn cực của hệ 3 là: 7.6 cú nghĩa là hệ pha động 3 là CH3OH / H2O / CH3CN cú độ phõn cực nằm giữa độ phõn cực của ba dung mụi, và tạo ra lực rửa giải tớch hợp và khỏc nhau đối với 5 clophenol. Vỡ lí do đú mà hệ dung mụi thứ 3 (Metanol: H2O: Axetonitril (49:48:3v /v).tỏch tốt hơn 2 hệ dung mụi (1) và (2).
Mặt khỏc, chỳng ta biết rằng khi thay đổi thành phần pha động dẫn đến làm thay đổi độ chọn lọc của 1 hệ pha sắc kớ. Nếu độ chọn lọc của pha động cao sẽ làm cho cỏc chất tỏch được ra khỏi nhau. Độ chọn lọc này phụ thuộc vào 3 yếu tố chớnh đú là.
- Bản chất và đặc trưng của pha tĩnh.
- Bản chất của pha động và thành phần của nú. - Bản chất và cấu trỳc của phõn tử chất mẫu.
Tất cả cỏc yếu tố này quyết định đến hệ số dung tớch k’i của chất tan, tức là sự lưu giữ. Vỡ thế chỉ khi chọn được thành phần phự hợp thỡ nú mới cú hiệu quả tỏch tốt.
- Hỡnh 3.5 cho ta thấy ảnh hưởng của hệ dung mụi pha động đến kết quả tỏch 0 2 4 6 8 10 12 1 2 3 1
CH3OH:CH3CN CH3OH :H3PO4 CH3OH: H2O:CH3CN
Hỡnh 3.5 Ảnh hưởng của hệ dung mụi pha động
Qua kết quả khảo sỏt ở trờn ta thấy rằng hai hệ pha động 1 và 3 đều cho một kết quả tỏch tốt. Nhưng với hệ 3 cho ta hiệu suất tỏch cao hơn , giỏ thành rẻ hơn, tuy nhiờn thời gian lưu cú dài hơn một chỳt so với hệ 1. Trong cỏc thớ nghiệm tiếp theo chỳng tụi chọn hệ pha động 3 để khảo sỏt.