P HN 2 VT L IU VÀ H NG HÁ NGHIÊ NC U
2.12.1.Chun b thí ngh im
D ch khu n: 2 ch ng B. polyfermenticus F27, B. subtilis Q111, đ c t ng sinh
riêng bi t trong 20 mL môi tr ng NB 37 OC, 24 gi , l c t c đ 200 vòng/phút (Nguy n Th Tr n Th y, 2009). M t đ vi khu n sau khi t ng sinh đ c xác đnh
b ng ph ng pháp đ m tr c ti p trên bu ng đ m (m c 2.5.1) tr c khi b t đ u th nghi m và đ c gi l nh cho đ n khi th nghi m đ tránh sai s .
Chu n b d ng c đ ng m u: bình serum 100 mL h p vô trùng 121 OC, 15 phút. Nguyên li u cá sau khi qua s ch đ c cho vào các bình serum, m i bình 50 mL.
2.12.2. Ti n hành thí nghi m
Nguyên li u cá sau khi s ch đ c cho vào bình schott sau đó đ c kh trùng v i các đi u ki n khác nhau theo b ng 2.1.
B ng 2.1. B ng b trí thí nghi m kh o sát nhi t đ kh trùng
Th t Nghi m th c Th tích nguyên li u Nhi t đ Th i gian
1 NT 1 500 mL 70 OC 30 phút
2 NT 2 500 mL 80 OC 30 phút
3 NT 3 500 mL 121 OC 30 phút
Ki m tra m t đ vi sinh trong các m u: pha loãng dch cá đ n n ng đ thích h p trang lên đ a NA 37 OC, 24 gi .
Ki m tra kh n ng th y phân c a nguyên li u cá v i đi u ki n: m t đ VK ban
đ u là 106 CFU/mL, n ng đ NaCl là 5%, n ng đ m t r 0%, pH = 6,5.
2.12.3. c k t qu
K t qu m t đ vi sinh đ c xác đ nh theo ph ng pháp gián ti p (m c 2.5.2) Ki m tra các ch s đ m: đ m nit t ng s b ng ph ng pháp Kjeldahl (m c 2.6.1), đ m axit amin b ng ph ng pháp đ nh đ m axit amin (m c 2.6.2) t i 2 th i
đi m b t đ u và sau khi th y phân 5 ngày.
2.13. Thí nghi m xác đnh y u t nh h ng
2.13.1. Thi t k thí nghi m
xác đnh y u t quan tr ng nh h ng đ n quá trình th y phân, thí nghi m
đ c b trí v i các bi n s sau: n ng đ vi sinh v t b sung, n ng đ mu i, pH (Tr n Thanh D ng, 2007), n ng đ m t r b sung (Lê Xuân Ph ng, 2008).
Thí nghi m đ c b trí theo thi t k Plackett – Burman (Plackett và Burman, 1946) m i nghi m th c đ c th c hi n v i 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16 c a Minitab Inc. (USA).
Giá tr các bi n s đ c trình bày trong b ng 2.2 v i m i bi n đ c kh o sát 2 m c đ cao (+1) và th p (-1).
B ng 2.2. Giá tr các bi n s trong thí nghi m xác đnh y u t nh h ng đ n quá trình th y phân theo thi t k Plackett – Burman
Th t Y u t n v Giá tr t ng c p đ -1 1 1 M t đ VK ban đ u CFU/mL 104 106 2 NaCl % 1 5 3 M t r % 0,3 1,2 4 pH - 5 7
nh h ng c a các y u t đ n s th y phân, th hi n qua đ đ m axit amin (Tr n
Thanh D ng, 2007) xác đnh đ c sau 36 thí nghi m, đ c mô t qua ph ng trình
h i quy b c nh t g i giá tr y u t th i là Xi (i = 1, 2, 3, 4) là: Y= + 1X1+ 2X2+ 3X3+ 4X4 V i: : là ch n (intercept) t c giá tr lúc Xi = 0.
i: là đ d c (gradient) c a y u t th i.
D a vào ph ng trình h i quy, n u m c ý ngh a đ t trên 95% (p < 0,05), thì y u t đó đ c coi là có nh h ng đ n s th y phân nguyên li u cá (Nguy n V n Tu n, 2007).
2.13.2. Ti n hành thí nghi m (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
D ch khu n: 2 ch ng B. polyfermenticus F27, B. subtilis Q111, đ c t ng sinh
riêng bi t trong 20 mL môi tr ng NB 37 OC, 24 gi , l c t c đ 200 vòng/phút (Nguy n Th Tr n Th y, 2009). M t đ vi khu n sau khi t ng sinh đ c xác đnh b ng ph ng pháp đ m tr c ti p trên bu ng đ m (m c 2.5.1) tr c khi b t đ u th nghi m và đ c gi l nh cho đ n khi th nghi m đ tránh sai s .
Chu n b d ng c đ ng m u: bình serum 100 mL h p vô trùng 121 OC, 15 phút. Nguyên li u cá sau khi qua s ch và kh trùng đ c cho vào các bình serum, m i bình 50 mL.
Các y u t kh o sát đ c b sung theo đúng thi t k Plackett – Burman c a ph n m m Minitab 16.
Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh:
• Th i gian: 20 ngày
• Nhi t đ : nhi t đ phòng
• T c đ l c: 120 vòng/phút
2.13.3 c k t qu
Sau 20 ngày th y phân, k t qu đ c xác đ nh b ng cách đo n ng đ đ m axit amin trong các bình serum. N ng đ đ m đ c xác đnh b ng ph ng pháp đnh
l ng đ m axit amin (m c 2.6.4).
K t qu sau khi xác đ nh đ c th ng kê, phân tích b ng ph n m m Minitab 16.
2.14. Thí nghi m kh i đ u
2.14.1. Thi t k thí nghi m
Sau thí nghi m xác đnh y u t nh h ng chính, chúng tôi ti n hành thí nghi m kh i đ u c a ph ng pháp t i u hóa v i các y u t nh h ng không có ý ngh a
th ng kê trong thí nghi m tr c đã đ c lo i b .
Thí nghi m đ c thi t k d ng riêng ph n theo thi t k Plackett – Burman. Thi t k đ c b sung thêm các đi m thí nghi m trung tâm nh m đánh giá m c đ phù h p c a ph ng trình b c nh t xây d ng cho hàm m c tiêu.
M i y u t đ c kh o sát 3 m c đ : m c đ cao (+1) và m c đ th p (-1) và m c trung tâm (0). Thi t k đ c b trí d a theo ph ng pháp quy ho ch th c nghi m b ng ph n m m th ng kê Minitab 16. Thí nghi m đ c l p l i 3 l n. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)
nh h ng c a các y u t đ n s th y phân, th hi n qua đ đ m axit amin (Tr n
Thanh D ng, 2007), đ c mô t qua ph ng trình h i quy b c nh t g i giá tr y u t th i là Xi (i = 1, 2, 3, 4) là:
Y= + 1X1+ 2X2+ 3X3+ 4X4
V i: : là ch n (intercept) t c giá tr lúc Xi = 0.
i: là đ d c (gradient) c a y u t th i.
2.14.2. Ti n hành thí nghi m
D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.
Ti n hành thí nghi m kh i đ u theo thi t k c a ph n m m Minitab 16 v i 3 c p
đ thí nghi m (-1; 0; 1) cho m i y u t , th c hi n 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16. Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh: • Th i gian: 72 gi • Nhi t đ : nhi t đ phòng • T c đ l c: 120 vòng/phút 2.14.3. c k t qu Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh t ng t m c 2.13.3. 2.15. Tìm kho ng t i u c a các y u t nh h ng chính b ng ph ng pháp leo d c 2.15.1. Thi t k thí nghi m
N u k t qu c a b c kh i đ u cho th y có th mô t hàm m c tiêu b ng m t hàm h i quy b c nh t, đi u đó ch ng t vùng thí nghi m kh o sát còn xa vùng c c tr . Ti n hành các thí nghi m leo d c nh m xác đ nh vùng c c tr . Các thông s cho
ph ng pháp này đ c tính toán thông qua h s h i quy t ph ng trình h i quy c a thí nghi m kh i đ u.
y = b + b x + + b x (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
T m c c s c a các y u t này và các h s h i quy, các b c chuy n đ ng s
đ c tính nh sau:
Ch n b c chuy n đ ng ng v i y u t có giá tr tuy t đ i c a h s h i quy l n nh t và tính toán các b c chuy n đ ng còn l i b ng các công th c:
= b b
Trong đó: : kho ng bi n thiên.
b : h s h i quy c a y u t x1.
: b c chuy n đ ng c a y u t x1.
T k t qu tính toán b c chuy n đ ng c a t ng y u t nh h ng, thí nghi m b t đ u t m c trung tâm c a các y u t nh h ng chính. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)
2.15.2. Ti n hành thí nghi m
D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.
Ti n hành thí nghi m leo d c theo theo giá tr b c chuy n đ ng đã tính đ c, m i y u t nh h ng đ c c ng thêm m t giá tr b c chuy n đ ng trong m i
b c leo d c. Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh: • Th i gian: 72 gi • Nhi t đ : nhi t đ phòng • T c đ l c: 120 vòng/phút 2.15.3. c k t qu Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh t ng t m c 2.13.3. 2.16. Thí nghi m b m t ch tiêu 2.16.1. Thi t k thí nghi m
Khi vào đ n vùng c c tr , thí nghi m b m t ch tiêu đ c th c hi n nh m xác
đnh giá tr t i u c a các y u t nh h ng chính. T k t qu c a các thí nghi m
tr c, thi t k Box – Behnken đ c s d ng đ xác đnh giá tr t i u c a các y u t
nh h ng.
Thi t k đ c b trí d a theo thi t k Box –Behnken trong ph ng pháp quy
ho ch th c nghi m b ng ph n m m th ng kê Minitab 16. M i y u t nh h ng
đ c kh o sát 3 m c đ : m c đ cao (+1) và m c đ th p (-1) và m c trung tâm (0). Thí nghi m đ c l p l i 3 l n. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)
Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh:
• Th i gian: 72 gi
• Nhi t đ : nhi t đ phòng
• T c đ l c: 120 vòng/phút
2.16.2. Ti n hành thí nghi m
D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.
Ti n hành thí nghi m b m t ch tiêu theo thi t k Box – Behnken c a ph n m m Minitab 16 v i 3 m c đ thí nghi m (-1; 0; 1) cho m i y u t , th c hi n 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16.
2.16.3. c k t qu
Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh b ng cách ki m tra n ng đ đ m axit amin và m t đ vi khu n có l i trong các m u thí nghi m.
N ng đ đ m axit amin đ c xác đnh b ng ph ng pháp đ nh l ng đ m axit amin (m c 2.6.4).
K t qu m t đ vi sinh v t đ c xác đnh b ng ph ng pháp gián ti p (m c 2.5.2). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
PH N 3 K T QU VÀ TH O LU N