Bột Ô đầu (củ mẹ) (3.2 kg) đã xay thô, sấy khô ở nhiệt độ 60 0C, được ngâm chiết bằng ethanol (6 l x 3 lần x 24 h/lần). Dịch chiết tổng được loại cặn bằng cách lọc
Phụ tử sấy khô (2.8 kg), xay thô (5-10 mm)
Ngâm chiết trong EtOH 96 % (6 l x 3 lần x 24 h/lần)
Dịch chiết ethanol
Cao ethanol (300.8 g)
Cao n-hexan (130.6 g)
Cất thu hồi DM dưới áp suất giảm
Chiết bằng n-hexan (3 lần x 750 ml/lần), cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm
Triển khai sắc ký cột silica gel kích thước hạt: 0.063-0.2 mm. Hệ dung môi: n-hexan và EtOAc (tỷ lệ EtOAc tăng từ 0-85 %)
PĐ A (3.2 g) PĐ E (4.2 g) PĐ C (1.6 g) PĐ B (2.1 g) PĐ D (3.8 g) PĐ F (1.1 g) OD1 29 mg SK cột silica gel OD5 16 mg OD2 21 mg OP7 17 mg OD3 19 mg OD8 16 mg OD9 20 mg OD10 15 mg SK cột silica gel
54
qua giấy lọc, đem cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm, thu được cao ethanol (298.9 g). Cao ethanol được phân tán trong ít nước, kiềm hóa bằng amoniac đặc đến pH 9.0, lắc phân đoạn với n-hexan (3 lần x 750 ml/lần), gộp dịch chiết phân đoạn n-hexan và cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm, thu được cao n-hexan (129.5 g). Cao chiết n- hexan được phân tách bằng sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.063-0.200 mm, với hệ dung môi rửa giải là n-hexan - EtOAc có độ phân cực tăng dần (100:0, 80:20, 50:50, 35:65, 25:75, 15:85) thu được 6 phân đoạn lớn, kí hiệu từ G đến L. - Phân đoạn G (2.9 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan - aceton (90:10) thu được 2 phân đoạn nhỏ OG và OH.
- Phân đoạn H (1.7 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.063- 0.200 mm, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan - EtOAc (85:15), thu được PĐ OK. - Phân đoạn I (2.5 g), triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan - EtOAc(80:20) thu được chất OD4 (16 mg), Rf = 0.40 (CHCl3 - EtOAc, 85:15). Cũng từ phân đoạn I triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040-0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH (90:10) thu được chất OD6 (18 mg), tinh thể có màu trắng đục, Rf = 0.50 (CH2Cl2 - MeOH, 90:10).
- Phân đoạn K (1.5 g), triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi EtOAc - MeOH (80:20) thu được chất OD7 (12 mg), chất này hiện màu với thuốc thử Dragendorff, Rf = 0.20 (CH2Cl2 - MeOH = 95:5).
- Phân đoạn L (4.0 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH (90:10) thu phân đoạn OL. - Phân đoạn M (2.3 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi CHCl3-MeOH (90:10) thu được phân đoạn nhỏ OM.
55
Hình 3.15. Sơ đồ chiết xuất và phân lập các hợp chất từ Ô đầu
3.2.2.3. Chiết xuất polysaccharid từ Phụ tử và Ô đầu [44], [46]
Quá trình chiết xuất polysaccharid từ Phụ tử như sau: 500 g bột Phụ tử được ngâm với 3 lít nước cất trong 1 h ở nhiệt độ 90 oC. Đem siêu âm 20 phút ở 90 o
C. Lọc lấy dịch chiết nước, loại bớt nước bằng cất quay chân không dưới áp suất giảm, nhiệt độ khoảng 90 oC, đến thể tích 300 ml và thêm ethanol 96 % đến tỷ lệ 80 % ethanol về thể tích, ly tâm 15000 vòng/phút, trong 20 phút, thu lấy tủa. Hòa tan tủa trong nước,
Triển khai sắc ký cột silica gel kích thước hạt: 0.063-0.2 mm. Hệ dung môi là: n- hexan và EtOAc (tỷ lệ EtOAc tăng từ 0-85 %)
Ô đầu sấy khô (3.2 kg), xay thô (5-10 mm)
Ngâm chiết trong EtOH 96 % (6 l x 3 lần x 24 h/lần)
Dịch chiết ethanol
Cao ethanol (298.9 g)
Cao n-hexan (129.5 g)
Cất thu hồi DM dưới áp suất giảm
Chiết bằng n-hexan (750 ml x 3 lần), cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm
PĐ G (2.9 g) PĐ L (4.0 g) PĐ I (2.5 g) PĐ H (1.7 g) PĐ K (1.5 g) PĐ M (2.3 g) OG OD4 16 mg OD6 18 mg OH OD7 12 mg OK OL OM SK cột silica gel SK cột silica gel
56
tiến hành tủa polysaccharid lần nữa, thu lấy tủa, sấy khô ở 60 oC được 195.3 g polysaccharid toàn phần. Lấy 30 g bột polysaccharid thô hòa tan trong nước cất và triển khai sắc ký lọc gel trên cột Sephadex G100, dung môi rửa giải là nước cất thu được phân đoạn chứa polysaccharid chính ký hiệu là: phân đoạn I (3.2 g) và phân đoạn II (2.0 g). Quá trình chiết xuất polysaccharid từ Ô đầu tương tự như Phụ tử. Sơ đồ chiết xuất polysacharid từ Phụ tử được trình bày ở hình 3.16.
Hình 3.16. Sơ đồ chiết xuất polysaccharid từ Phụ tử
Phụ tử sấy khô, xay nhỏ (1-3 mm)
Ngâm với 3 lít nước cất trong 1 h ở nhiệt độ 90 oC, siêu âm 20 phút
Dịch chiết nước
Tủa polysaccharid
Tủa polysaccharid bằng Ethanol 96 %, ly tâm lấy tủa
Dung dịch polysaccharid
Hòa tan tủa trong nước
Polysaccharid toàn phần
Tủa polysaccharid bằng Ethanol 96 %
Triển khai sắc ký trên cột Sephadex G100
57