− Nếu mua thuốc thử pha sẵn của các hãng Sigma, giá thành là 700.000VND/100ml
− Nếu thuốc thử Schiff chúng ta tự pha giá thuốc thử khoảng 10.000VND/100ml.
− Theo chúng tôi, nên tự pha lấy thuốc thử Schiff để sử dụng với lý do sau:
+ Đảm bảo được chất lượng thuốc thử cũng như chất lượng tiêu bản được nhuộm.
+ Chủ động về thời gian.
+ Tiết liệm được tiền bạc (dùng thuốc thử tự pha rẻ hơn 70 lần so với thuốc thử mua pha sẵn).
KẾT LUẬN
Nghiên cứu kết quả nhuộm Periodic Acid Schiff của mẫu bệnh phẩm sau phẫu thuật của các mô có chế nhày và các mô có biểu hiện glycogen tại Bộ môn giải phẫu bệnh, trường Đại học Y Hà Nội với các pH nước rửa khác nhau sau bước phản ứng với thuốc thử Schiff và với 2 loại thuốc thử Schiff khác nhau, chúng tôi rút ra kết luận sau:
1. Quy trình nhuộm Periodic acid Schiff
1)Tẩy parafill bằng xylen: 3 lần x 2 phút/lần. 2)Chuyển vào bể cồn 1000, 950, 850 mổi bể 2 phút 3)Rửa nước chảy 5 phút. (*)
4)Oxy hóa carbonhydrat trong dung dịch acid periodic 1% trong 10 phút làm xuất hiện các nhóm aldehyd.
5)Rửa nước chảy 5 phút.
6)Cho phản ứng với thuốc thử Schiff từ 2-5 phút.
7)Biệt hóa trong nước rửa có pH1=4, pH2=7, pH3=10 trong 15 phút. 8)Nhuộm nhân trong hematoxylin từ 30s- vài phút.
9)Rửa nước chảy 5 phút.
10) Tẩy trong cồn acid vài giây. 11) Rửa nước chảy 10 phút. 12) Loại nước bằng cồn 950,1000 13) Làm trong qua 3 bể toluene. 14) Gắn bôm Canada.
( Nếu muốn phát hiện glycogen thì sau bước (*) cần một tiêu bản làm chứng bằng cách cho tiêu bản chứng thủy phân 1h trong Diastase 1% ở 370C hoặc enzym amylase, còn tiêu bản kia làm song song với tiêu bản chứng,
nhưng ngâm 1h trong nước cất ở 370C. sau đó nhuộm các bước tiếp theo của (*) bình thường.
Nếu muốn nhuộm tế bào hoặc phiến đồ thì bắt đầu từ bước 5).
2. pH nước rửa sau bước phản ứng với thuốc thử Schiff có ảnh hưởng tới chất lượng nhuộm tiêu bản nhuộm Periodic Acid Schiff như sau:
Với thuốc thử Schiff mua của hãng Sigma pH nước rửa sau bước nhỏ thuốc thử Schiff không ảnh hưởng tới chất lượng, màu sắc tiêu bản.
Với thuốc thử Schiff pha theo hướng dẫn của cuốn “ Kỹ thuật hiển vi học thông thường” pH nước rửa sau bước nhỏ thuốc thử Schiff có tính acid cho tiêu bản có màu sắc tươi, rõ ràng hơn pH nước rửa trung tính hoặc kiềm tính.
Tuy nhiên khả năng bắt màu của thuốc thử Schiff pha giảm nhanh sau 2 tuần, vì thế nên pha thuốc thử Schiff và dùng trong vòng 1 tuần.
KIẾN NGHỊ
Khi nhuộm Periodic Acid Schiff, sau bước phản ứng với thuốc thử Schiff nên biệt hóa tiêu bản trong nước rửa có pH tính acid.
Chất lượng tiêu bản nhuộm Periodic bị ảnh hưởng bởi rất nhiều yếu tố chủ quan, còn nhiều vần đề cần được nghiên cứu, vì vậy sau đề tài này của tôi đề nghị được nghiên cứu tiếp.
Tiếng Việt
1. Bộ môn Giải phẫu bệnh – Trường Đại học Y Hà Nội (1976): Kỹ thuật
hiển vi học thông thường.
2. Nguyễn Thị Thu Hương (2005): Thử tìm phương pháp pha thuốc thử
Schiff trong hoàn cảnh Việt Nam. Khóa luận tốt nghiệp cử nhân kỹ thuật
y học. Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội.
3. Bùi Anh Tuấn (2008): Kỹ thuật nhuộm PAS và BLUE ALCIAN trong
phát hiện chất nhầy Polysarcaride. Khóa luận tốt nghiệp cử nhân kỹ
thuật y học. Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội.
Tiếng Anh
4. John D.Bancroft, Marilyn Gamble. Fifth edition (2002): Theory and
practice of Histological Techniques. Pp 163-175
Tài liệu thu thập trên Internet
CHƯƠNG 1...3
TỔNG QUAN TÀI LIỆU...3
2.1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ POLYSACCHARIDE [4]...3
2.1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ CHẤT NHẦY:...5
Phân loại chất nhầy:...6
2.1.3 ĐẠI CƯƠNG VỀ GLYCOGEN...8
2.1.4 PHƯƠNG PHÁP NHUỘM PERIODIC ACID SCHIFF:...9
1.4.1. Quy trình lấy, cố định,pha, chuyển, đúc bloc, cắt và dán mảnh cắt:...9
1.1.4.1Nguyên tắc của phương pháp nhuộm PAS:...11
1.1.4.2Phương pháp nhuộm PAS và chẩn đoán lâm sàng:...13
CHƯƠNG 2...15
PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU...15
2.1.1ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU:...15
2.1.2PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU:...15
2.1.2.1Thiết kế nghiên cứu:...15
2.1.2.2Tiến hành:...15
2.1.2.3Đánh giá kết quả nhuộm PAS:...17
CHƯƠNG 3...19
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU...19
3.2. Đánh giá kết quả quá trình biệt hóa mảnh cắt bằng nước rửa sau bước nhỏ thuốc thử Schiff pha theo hướng dẫn của tài liệu “ Kỹ thuật hiển vi học thông thường” trong vòng 1 tuần sau khi pha với pH1 = 4, pH2 = 7, pH3 = 10...20
3.3 Đánh giá chất lượng tiêu bản nhuộm:...20
3.4 Một số hình ảnh minh họa kết quả nhuộm PAS trên mô chế nhày hoặc glycogen ở ba pH nước rửa khác nhau:...22
CHƯƠNG 4...28
thường”:...28
4.1.3 Về thuốc thử Schiff tự pha:...29
4.2. Chất lượng tiêu bản nhuộm:...29
4.3. Một số yếu tố kỹ thuật ảnh hưởng đến kết quả nhuộm và cách khắc phục:...30
4.4 Về thuốc thử Schiff:...32
KẾT LUẬN ...33
KIẾN NGHỊ...35
Bảng 3.1. Đánh giá kết quả quá trình biệt hóa mảnh cắt bằng nước rửa sau bước nhỏ thuốc thử Schiff mua của hãng Sigma với pH1 = 4, pH2 = 7, pH3 = 10...19 Bảng 3.2. Đánh giá kết quả quá trình biệt hóa mảnh cắt bằng nước rửa sau bước nhỏ thuốc thử Schiff pha theo hướng dẫn của tài liệu “ Kỹ thuật hiển vi học thông thường” trong vòng 1 tuần sau khi pha với ...20 pH1 = 4, pH2 = 7, pH3 = 10...20 Bảng 3.3. Đánh giá chất lượng tiêu bản nhuộm...20
Hình 1: Sơ đồ biểu diễn sự oxi hóa của acid periodic với một mắt xích α-D-glucose và một mắt xích 1-amino-2-hydroxy để tạo thành
dialdehyde...12 Hình 2: Cơ chế phản ứng của thuốc thử Schiff với các gốc dialdehyde tạo thành hợp chất có màu đỏ...13 Hình 3.3:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x100 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=4. Các hạt glycogen bắt màu rõ ràng...22 Hình 3.4:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x100 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=7.Các hạt glycogen bắt màu rõ ràng...22 Hình 3.5:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x50 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=10.Các hạt glycogen bắt màu rõ ràng...23 Hình 3.6:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=4.Các hạt glycogen bắt màu rõ ràng...23 Hình 3.7:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=7. Có quan sát được các hạt glycogen, màu sắc chưa rõ ràng. ...24 Hình 3.8:Tiêu bản mô gan nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=10. Có quan sát được các hạt glycogen, màu sắc chưa rõ ràng. ...24 Hình 3.9:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=4. Các tế bào chế nhầy bắt màu rõ ràng...25 Hình 3.10:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=7. các tế bào chế nhầy bắt màu rõ ràng...25 Hình 3.11:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff Sigma, pH=10. các tế bào chế nhầy bắt màu rõ ràng...26 Hình 3.12:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=4. các tế bào chế nhầy bắt màu rõ ràng...26 Hình 3.13:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=7. các tế bào chế nhầy có bắt màu tuy nhiên chưa rõ ràng...27 Hình 3.14:Tiêu bản sinh thiết dạ dày nhuộm PAS x400 bằng thuốc thử Schiff pha, pH=10. tế bào chế nhày có bắt màu, chưa tương phản rõ ràng giữa nhân và các tế bào chế nhày...27
Tôi xin cam đoan những số liệu và kết quả ghi trong luận văn này là do bản thân tôi đã thực hiện, nghiên cứu nghiêm túc, trung thực và chưa từng đăng tải trên bất kỳ tài liệu khoa học nào.
Tôi hoàn toàn chịu trách nhiệm với những kết quả được nêu trong luận văn này.
Hà nội, ngày 25 tháng 05 năm 2013 Tác giả khóa luận
Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng Đào tạo Đại học - Trường Đại học Y Hà Nội. Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện để em được học tập, rèn luyện và tu dưỡng tại trường.
Với tất cả lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn Ths. Bs Trần Ngọc Minh - người thầy đã hướng dẫn, chỉ bảo tận tình và đóng góp nhiều ý kiến quý báu để em có thể hoàn thành tốt khóa luận này.
Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô, anh chị trong Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội đã nhiệt tình giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu để thực hiện khóa luận.
Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ, những người thân trong gia đình đã tạo mọi điều kiện về tinh thần và vật chất cho tôi. Cảm ơn những người bạn đã luôn ủng hộ và động viên tôi trong quá trình học tập và thực hiện khóa luận này.
Hà Nội, ngày tháng 06 năm 2013 Sinh viên