Ph−ơng pháp phân tích định l−ợng hoạt chất trong dịch sinh vật (máu, huyết t−ơng, n−ớc tiểu) cần đ−ợc lựa chọn và thẩm định. Mục đích của thẩm định là xác nhận độ tin cậy của phép đo hoạt chất trong môi tr−ờng đã cho. Nội dung thẩm định ph−ơng pháp gồm 6 điểm:
− Độ ổn định của hoạt chất trong điều kiện bảo quản mẫu và xử lý mẫu,
− Tính đặc hiệu (specificity), − Độ đúng (accuracy),
− Độ chính xác (precision),
− Giới hạn định l−ợng (limit of quantification), − Hàm đáp ứng (response function).
Thẩm định ph−ơng pháp phân tích gồm 2 giai đoạn:
2/ Dùng ph−ơng pháp phân tích ở giai đoạn 1 định l−ợng hoạt chất trong mẫu nghiên cứu nhằm xác định lại độ ổn định, độ đúng và độ chính xác cao.
Một vấn đề cần đ−ợc l−u ý là phân tích các hoạt chất chiral (chiral active substances), do một số thuốc có hoạt tính thay đổi tuỳ thuộc vào loại đồng phân (enantiomers). Theo CPMP, trong đánh giá TĐSH để xác định chế phẩm t−ơng đồng (essentially similar products) nên định l−ợng loại đồng phân có trong mẫu, trừ 2 tr−ờng hợp:
− Cả 2 chế phẩm cùng chứa một loại đồng phân ổn định. − Cả 2 chế phẩm chứa racemate và hai đồng phân đều tuân thủ DĐH tuyến tính.
Trong khi đó FDA qui định hơi khác. Bản h−ớng dẫn năm 2000 của CDER khuyến cáo định l−ợng racemic. Định l−ợng đồng phân chỉ đ−ợc thực hiện khi tất cả 4 điều kiện sau đều có mặt:
− Các đồng phân có tác dụng d−ợc lý khác nhau, − Các đồng phân có đặc tr−ng DĐH khác nhau, − Hiệu quả và an toàn nằm ở đồng phân,
− Quá trình hấp thu không tuyến tính ít nhất là với một đồng phân.
Theo qui định này của FDA, các d−ợc chất ít tr−ờng hợp phải định l−ợng các đồng phân chiral.