5.1. Kết luận
- Xây dựng được môi trường tái sinh hiệu quả cho giống thuốc lá V2, với tổ hợp chất điều hòa sinh trưởng BA 1 mg/l và NAA 0,1 mg/l.
- Khảo sát ảnh hưởng của kháng sinh chọn lọc streptomycin và spectinomycin khi nuôi cấy mô in vitro giống V2 cho thấy: Nồng độ streptomycin 125 mg/l và spectinomycin 100 mg/l ức chế hoàn toàn khả năng tái sinh của mô lá; nồng độ streptomycin 125 mg/l và spectinomycin 40 mg/l ức chế hoàn toàn sự ra rễ, phát triển cây con từ đoạn thân.
- Chuyển gen thành công vào lục lạp thuốc lá bằng phương pháp bắn gen với vector plasmid pITB.HIV-1 p24 mang các cấu trúc gen Prrn/HIV-1 p24/TrbcL và Prrn/aadA/TpsbA. Các dòng cây chuyển gen thu được T1, T2, T5, T6 thông qua phương thức chọn lọc và tái sinh lặp lại 4 chu kỳ với cả hai kháng sinh spectinomycin và streptomycin ở nồng độ 500 mg/l. Kiểm tra bằng PCR và Southern blot cho thấy cấu trúc gen chuyển thông qua tái tổ hợp đồng dạng vào đúng vị trí mục tiêu giữa hai gen trnG và
trnfM trên lục lạp các dòng chuyển gen; cây chuyển gen ở trạng thái đồng lạp thể chuyển gen.
- Kết quả phân tích Western blot từ mẫu lá cây ex vitro cho thấy protein HIV-1 p24 biểu hiện ở 4 dòng T1, T2, T5, T6, có kích thước như mong muốn khoảng 26 kDa.
- Phân tích ELISA ghi nhận sơ bộ được hàm lượng protein p24 tích lũy trên tổng protein tan của lá cây in vitro tương ứng với các dòng T1, T2, T5, T6 là 1,11%, 1,25%, 0,74%, 0,62% và của cây ex vitro sau 55 ngày trồng ở lá thứ 12 tương ứng với các dòng T1, T2, T5 là 1,7%, 6,2%, 5,7% và lá 20 là 6,3%, 5,3%, 3,1%.
5.2. Đề nghị
- Trồng các dòng chuyển gen ra quy mô đồng ruộng và xác định hàm lượng protein biểu hiện trong lá theo thời gian và vị trí.
- Xác định các điều kiện thu hoạch, bảo quản và ly trích protein với hiệu suất thu hồi cao và bảo đảm hoạt tính.