Cỏc protein được mó húa bởi cADN cú thể được tổng- 123docz.net

III Enzym đa chức năng ATP Có trình tự nhận biết đặc hiệu

3. Cỏc protein được mó húa bởi cADN cú thể được tổng hợp (dịch mó) trong một tế

bào chủ mà ở đú khụng cần cú bộ mỏy hoàn thiện phõn tử mARN (bởi cỏc intron đó

Khái niệm chung

ADN tái tổ hợp đ−ợc thực hiện nh− thế nào? Tách chiết và tinh sạch các axit nucleic

Tạo véctơ tái tổ hợp

Nội dung

Tạo véctơ tái tổ hợp

Các loại enzym sử dụng trong ADN tái tổ hợp Nhân dòng gen và xây dựng ngân hàng gen

Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen

Một nhúm contig

Các vị trí cắt của enzym giới hạn

Dũng 1 Dũng 2 Dũng 3 Dũng 4 Dũng 5 Dũng 6 Dũng 7 Dũng 7 Dũng 8 Dũng 9 Dũng 10 Dũng 11 Dũng 12 Dũng 13 Dũng 14 Tập hợp cỏc dũng gen gồm cỏc trỡnh tự nằm

gối lờn nhau (contig) Cỏc dũng gen cú kớch thước

lớn từ 200 đến 500 kb (cú thểđược tỏch dũng bởi cỏc

vộctơ BAC và YAC) được dựng để xõy dựng cỏc bản đồ

contig. Cỏc vị trớ cắt giới hạn của từng dũng được xỏc

Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen

Có một số ph−ơng pháp để tìm dòng gen mong muốn trong

ngân hàng hệ gen: (1) Thông qua sự biểu hiện sản phẩm của gen đ−ợc tách dòng (vd: các enzym, protein có hoạt tính, …), (2) Lai axit nucleic để tìm dòng tế bào mang trình tự mong muốn, (3) nhận biết sản phẩm gen nhờ phản ứng miễn dịch.

Ph−ơng pháp xác định dòng gen thông qua sự biểu hiện của

gen có thể áp dụng khi sản phẩm của gen ở trạng thái biểu

hiện chức năng. Vd: các gen mã hóa enzym chuyển hóa hoặc tổng hợp một hợp chất dinh d−ỡng nào đó có thể xác định đ−ợc nhờ nuôi cấy trên các môi tr−ờng chọn lọc.

Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen

Tuy vậy, ph−ơng pháp lai axit

nucleic là ph−ơng pháp phổ biến

nhất. Để phát hiện các trình tự ADN, ng−ời ta sử dụng các mẫu dò ADN và ph−ơng pháp thẩm tách Southern, FISH, ... Để phát hiện các trình tự mARN, ng−ời ta sử dụng mẫu dò và ph−ơng pháp thẩm tách Northern. ph−ơng pháp thẩm tách Northern.

Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen

Ph−ơng pháp nhận biết sản

phẩm của gen nhờ phản ứng

miễn dịch là cơ sở của ph−ơng

Tóm tắt về ADN Tái tổ hợp

ADN tái tổ hợp là các kỹ thuật nhằm tạo ra những phân tử ADN mới đ−ợc “lắp ráp” từ các phân đoạn ADN có ngnồn gốc khác nhau. Cơ sở của công nghệ ADN tái tổ hợp là tính phổ biến của mã di truyền.

Công nghệ ADN tái tổ hợp phát triển nhanh chóng nhờ sự phát hiện ra và hiểu biết ngày càng rõ hơn về các loại enzym có khả năng cải biến ADN, ARN, trong đó có các enzym giới hạn.

Việc tách dòng và xây dựng ngân hàng hệ gen của nhiều loài sinh vật khác nhau, trong đó có cả những loài có hệ gen lớn nh− ng−ời, thực hiện đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid, Việc tách dòng và xây dựng ngân hàng hệ gen của nhiều loài sinh vật khác nhau, trong đó có cả những loài có hệ gen lớn nh− ng−ời, thực hiện đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid,

đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid, phage, cosmid, véctơ con thoi, YAC, BAC, … cho phép tách dòng các đoạn trình tự khác nhau có kích th−ớc từ vài kb đến 500 kb.

Có hai loại ngân hàng gen: Ngân hàng hệ gen mang toàn bộ các trình tự có trong hệ gen của một cơ thể, và th− viện cADN mang các trình tự là sản phẩm phiên mã ng−ợc từ các phân tử mARN có mặt trong một loại tế bào nhất định (phản ánh những gen đ−ợc biểu hiện trong tế bào đó).

Ngân hàng hệ gen có ý nghĩa quan trọng trong các nghiên cứu lập bản đồ di truyền, giải mã trình tự hệ gen. Th− viện cADN có ý nghĩa quan trọng trong việc tìm hiểu sự biểu hiện và chức năng của các gen trong tế bào. Ngân hàng hệ gen có ý nghĩa quan trọng trong các nghiên cứu lập bản đồ di truyền, giải mã trình tự hệ gen. Th− viện cADN có ý nghĩa quan trọng trong việc tìm hiểu sự biểu hiện và chức năng của các gen trong tế bào.