2.1 Nội dung, thời gian và địa điểm nghiên cứu
Khao sát về độ tuổi nhộng sâu sáp phù hợp cho ong 7. pupivorus ký sinh, được
thực hiện vào tháng 6 năm 2022 tại phòng thí nghiệm Côn trùng - Bộ môn Bảo vệ Thực
vật, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.
Xác định đặc điểm sinh học của ong 7: pupivorus ký sinh trên nhộng sâu sáp,
được thực hiện vào tháng 7 năm 2022 tại phòng thí nghiệm Côn trùng - Bộ môn Bảo vệ
Thực vật, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.
Xác định khả năng ký sinh và tuổi thọ thành trùng của ong 7' pupivorus trên
nhộng sâu sáp được thực hiện vào tháng 7 năm 2022 tại phòng thí nghiệm Côn trùng -
Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ
Chí Minh.
Xác định khả năng nhân nuôi ong 7: pupivorus trên nhộng sâu sáp được thực hiện vào tháng 9 năm 2022 tại phòng thí nghiệm Côn trùng - Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa
Nông học, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.
2.2 Vật liệu, dụng cụ và thiết bị trong nghiên cứu
Vật liệu nhân nuôi: Hộp nhựa (dài: 24 x rộng: 10 x cao: 7,5 cm) có lưới thoáng
khí, lồng mica (dai: 30 x rộng: 25 x cao: 28 cm), hộp nhựa (dai x rộng x cao: 25 x 15x 8,5 cm), hộp nhựa (đường kính 7 em x chiều cao 3 cm), hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 cm x 4 cm). Thức ăn nhân tạo được trộn theo công thức của Bộ môn Bảo vệ Thực vật phát triển bao gồm: 212 g hỗn hợp bột ngũ cốc (bắp, tắm, khoai mì), phụ phẩm ngũ cốc (cám gạo, cám mì), đạm động vật, đạm thực vật, khoáng hữu cơ, dẫn xuất của axit Formic, premix vi khoáng - vitamin, axit amin, chat phụ gia, khoáng da lượng), 25 g cám bắp (Công ty TNHH thương mai dich vụ GoodPrice Việt Nam cung cap), 125 ứ mật ong (mật ong Nụng Lõm do Cụng ty TNHH Nụng Lõm phõn phối), 13 g sỏp ong,
125 g glycerin (Công ty hóa chất Đắc Trường Phát cung cấp).
Dung cụ bat mẫu: cọ quét mẫu, kẹp gap côn trùng (12 cm). Ong nghiệm thủy tinh (SmL), kim tiêm y tế 1 mL.
Dụng cụ quan sát mẫu: đĩa petri (đường kính 7 cm), kính lúp sôi nổi (hãng:
KTECK, model: KTST - 978PRO, độ phóng đại: 17x - 110x, Dai Loan).
Điều kiện thí nghiệm: Nhiệt độ và độ âm phòng thí nghiệm (28 + 2°C, 70 + 5%
RH), thời gian chiếu sáng 12 giờ.
Máy đo nhiệt độ, độ âm.
Số ghi chép, bút, thước đo 20 cm (độ chia nhỏ nhất 1 mm), kéo, bông gòn, giấy
dán, băng keo.
Hình 2.1 Dụng cụ và thiết bị được sử dụng trong thí nghiệm
2.3 Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Thu thập và nhân nguồn, nhân nguồn nhộng sâu sáp, ong 7. pupivorus.
Nhân nguồn nhộng sâu sáp
Nguồn sâu sáp được tiếp nhận từ bộ môn Bảo vệ Thực vật Trường Đại học Nông Lâm Thành phó Hồ Chi Minh và nuôi theo công thức bộ môn phát triển, được nuôi trong điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ âm 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ. Bắt thành trùng của sâu sáp cho vào lồng mica (dai x rộng x cao: 30 x 25 x 28 cm) thả vào những que gỗ (dai x rộng: 15 x 2 em) được bó lại với nhau, dùng vải den che long lại dé thành trùng sâu sáp đẻ trứng. Sau 24 giờ lấy các que gỗ đã được đẻ trứng ra, cho vào hộp nhựa hình chữ nhật (dai x rộng x cao: 25 x 15 x 8,5 cm) có sẵn thức ăn cho sâu sáp.
Nuôi sâu sáp cho đến khi ấu trùng của sâu sáp day sức (từ 35 - 40 ngày tuổi). Sau khi hóa nhộng 3 ngày thì tiến hành cắt bỏ lớp kén bên ngoài đề lấy nhộng, tiếp tục lấy nhộng cho đến khi đủ nhộng phục vụ cho thí nghiệm.
Hình 2.2 Nhân nguồn nhộng sâu sáp trong phòng thi nghiệm Nhân nguồn ong T: pupivorus
Thu thập nguồn nhộng sầu đen đã bị ong 7: pupivorus ký sinh tại vườn dừa (GPS:
10.167600N, 106.352738E) tại xã Tân Thành Bình, huyện Mỏ Cày Bắc, tỉnh Bến Tre.
Sâu đầu đen được cho vào hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 cm x 4 cm), có
lưới thông khí, chờ cho ong 7. pupivorus vũ hóa ra khỏi nhộng.
Cho 10 cặp 7' pupivorus vào hộp mica tròn có lưới thông khí (đường kính x chiều cao: 9,5 em x 4 cm) bông tam mật ong 30%, tiếp theo cho 30 nhộng sâu đầu đen F1 3 ngày tudi vào dé ong ký sinh trong 24 giờ. Sau đó, tách riêng các nhộng sâu đầu den đã bị ký sinh cho vào hộp mica tròn, có lưới thông khí (đường kính x chiều cao: 9,5 cm x 4 cm) dé ong 7' pupivorus vũ hóa.
Nhân nuôi ong 7. pupivorus trong phòng thí nghiệm ở nhiệt độ 28 + 2°C độ âm 70 + 5%, thời gian chiếu sáng là 12 giờ. Ong 7: pupivorus trưởng thành được nuôi trong hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 cm x 4 cm), dé bông gòn, được cho ăn bằng dung dịch mật ong pha loãng (30%). Hằng ngày theo dõi, đến khi ong vũ hóa, tiếp tục lặp lại các bước trên để nhân nuôi và thu lấy nguồn ong 7. pupivorus F3 dé làm thí
nghiệm.
Nhân nguồn ong ký sinh Trichosnites pipivoras
Hình 2.3 Nhân nguồn ong 7. pupivorus trong phòng thi nghiệm
2.3.2 Thí nghiệm khảo sát về độ tuổi của nhộng sâu sáp phù hợp cho ong 7:
pupivorus ký sinh
Phương pháp thực hiện
Thả 4 giai đoạn tuổi nhộng (nhộng 1 ngày tuổi, nhộng 3 ngày tuổi, nhộng 5 ngày tuổi, nhộng 7 ngày tuổi) của sâu sáp vào hộp nhựa (đường kính x chiều cao: 7 em x 3 cm), mỗi giai đoạn 2 cá thé nhộng. Sau đó cho tiếp 5 cặp ong 7' pupivorus đã giao phối vào. Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, một yếu tô với 3 lần lặp lại. Thí nghiệm được thực hiện trong điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ âm 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ.
Hinh 2.4 Thi nghiém khao sat d6 tudi nhộng sâu sáp
Chỉ tiêu theo dõi
Số lượng ong vũ hóa ở các tuổi nhộng (con/nhộng).
Tổng số nhộng bị ký sinh (nhộng).
Tổng số ong vũ hóa (con).
2.3.3 Theo dõi thời gian phát triển các pha phát dục, vòng đời ong 7. pupivorus
Phương pháp thực hiện
Cho 50 cặp ong T. pupivorus đã giao phối (1 ngày tuôi) tiếp xúc với 150 nhộng
sâu sáp trong 24 giờ, sau đó tách các nhộng sâu sáp ra nuôi riêng trong các hộp nhựa
(đường kính x chiều cao: 7 cm x 3 cm), để vào mỗi hộp 3 nhộng đã bị ký sinh dé theo doi. Hằng ngày, tiến hành mồ ngẫu nhiên 5 nhộng sâu sáp đã bị ký sinh dé quan sát, mô tả hình thái, thời gian phát triển của ong 7' pupivorus. Mỗi giai đoạn theo dõi và ghi nhận 50 cá thé. Thí nghiệm được thực hiện trong điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ 4m 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ.
Quan sát và mô tả hình thái ong 7: pupivorus trên kính lip sôi nổi để xác định các pha phát dục và đo kích thước cơ thé ong 7. pupivorus qua các pha phát dục.
Hình 2.5 Thí nghiệm theo dõi thời gian phát triển các pha phát dục, vòng đời và đo
kích thước các pha phát dục của ong 7: pupivorus
A: nhộng sâu sáp 3 ngay tuôi dùng cho thí nghiệm; B: bô trí thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi
Thời gian phát triển các pha cơ thể, vòng đời của ong ký sinh (ngày) Thời gian phát triển của pha trứng (ngày)
Thời gian phát triển của pha ấu trùng (ngày) Thời gian phát trién của pha nhộng (ngày) Thời gian trước đẻ trứng (tiền đẻ trứng) (ngày)
Vòng đời (ngày)
Quan sát, mô tả hình dạng, đặc điểm hình thái và đo kích thước các pha phát triển của ong 7: pupivorus: tring, ấu trùng, nhộng, thành trùng (mm)
2.3.4 Xác định khả năng ký sinh và tuổi thọ ong T7: pupivorus.
Phương pháp thực hiện
Cho 1 cặp ong 7: pupivorus đã giao phối (1 ngày tuổi) tiếp xúc với 3 nhộng sâu sáp được đựng trong hộp nhựa (đường kính x chiều cao: 7 em x 3 cm). Sau 24 giờ thay các nhộng sâu sáp mới đề thành trùng cái ong 7: pupivorus đẻ trứng. Các nhộng sâu sap đã bị ký sinh được mồ và đếm số lượng ấu trùng đẻ được của các ong ký sinh (sau 3 ngày ký sinh). Các chỉ tiêu được theo déi hằng ngày cho đến khi thành trùng chết.
Thí nghiệm được bồ trí 10 lần lặp lại (mỗi lần lặp lại là một cặp ong 7: pupivorus), trong điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ 4m 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ.
Ngày bat dau:4Q/0% aoe Lan lặp lại:.2a...
Hình 2.6 Thí nghiệm khả năng ký sinh và tuổi thọ thành trùng ong 7. pupivorus
Chỉ tiêu theo dõi
Au trùng (1 - 2 ngày tuổi) đếm được hằng ngày (au trùng/ngày)
Tổng ấu trùng (1 - 2 ngày tuổi) đếm được của thành trùng cái (âu trùng/thành
trùng cái)
Thời gian đẻ trứng (ngày)
Tuổi tho của thành trùng (ngày)
Thời gian hậu đẻ trứng (ngày)
2.3.5 Khả năng nhân nuôi ong T. pupivorus trên nhộng sâu sáp.
Phương pháp thực hiện
Thí nghiệm được bồ trí 10 lần lặp lại (mỗi lần lặp lai là 3 cặp ong 7: pupivorus tiếp xúc với 1 nhộng sâu sáp) cung cấp thêm mật ong 30% (tạo điều kiện lý tưởng cho ong 7' pupivorus phát triển). Cho thành trùng ong 7: pupivorus tiếp xúc với nhộng cho đến khi thành trùng chết, trong điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ âm 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ.
Chỉ tiêu theo dõi
Đếm số ong vũ hóa, phân biệt đực/cái và tính tỷ lệ, đánh giá khả năng nhân nuôi.
2.4 Phương pháp xử lý số liệu
Tất cả số liệu được thu thập và xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel 2010.
Chương 3