2.1 Nội dung nghiên cứu
Xác định ảnh hưởng của 4 mức nhiệt độ (20°C, 25°C, 30°C, 35°C) đến một số đặc điểm sinh học và vòng đời của ong B. hebetor ký sinh trên ấu trùng sâu sáp G.
mellonella.
2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Đề tài được thực hiện từ tháng 05 năm 2022 đến tháng 10 năm 2022 tại phòng
thí nghiệm Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông Lâm Thành
phó Hồ Chí Minh
2.3 Vật liệu và dụng cụ sử dụng trong nghiên cứu
- Nguồn ấu trùng sâu sáp G. mellonella 28 ngày tuôi - Nguồn ong ệ. hebetor
- Vật liệu nuôi: Hộp nhựa (25 x 15x 8,5 cm), lồng mica (dài x rộng x cao: 30 x 25 x 28 cm), que gỗ (dài x rộng: 15 cm x 2 cm), hộp nhựa có kích thước (đường kính x
chiều cao: 7 cm x 3 em), ống phacol 50 mL, mật ong pha loãng nồng độ 30%.
- Thức ăn nhân tạo được trộn theo công thức của Bộ môn Bảo vệ Thực vật bao
gồm 212 g hỗn hợp bột ngũ cốc (bắp, tắm, khoai mì), phụ phẩm ngũ cốc (cám gạo, cám mì), đạm động vật, đạm thực vật, khoáng hữu cơ, dẫn xuất của axit Formic, premix vi khoáng — vitamin, axit amin, chat phụ gia, khoáng đa lượng), 25 g cám bắp, 125 g mật ong,13 g sáp ong, 125 g glycerin, ở điều kiện nhiệt độ 28 + 2°C, độ am 70 + 5%.
- Dụng cụ, thiết bị quan sát mẫu và lấy chỉ tiêu: đĩa petri (đường kính x chiều cao:
8,5 cm x 1,5 cm), kẹp gap côn trùng, bút, giấy ghi chép, kéo, kính lúp soi nổi: (Hãng:
KTECK, Model: KTST — 978PRO, độ phóng đại: 17x — 110x, Dai Loan).
- Tu dinh 6n: (Hang: NKsystem, Model: LH — 80CCFL — 6CT, Nhat Ban).
20
2.4 Phương pháp nghiên cứu
2.4.1 Nhân nguồn sâu sáp G. mellonella
Nguồn sâu sáp được cung cấp từ Bộ môn Bảo vệ Thực vật Trường Dai học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh. Nhân nuôi sâu sáp trong phòng thí nghiệm ở nhiệt độ 28 + 29C. Bắt thành trùng của sâu sáp cho vào lồng mica (dai x rộng x cao: 30 x 25 x 28 cm) thả vào những que gỗ có kích thước (dài x rộng: 15 x 2 cm) được bó lại với nhau, dùng vải den che lồng lại dé thành trùng cái sâu sáp đẻ trứng. Sau 24 giờ đem các que
21
gỗ đã có trứng ra cho vào hộp nhựa hình chữ nhật có kích thước (dài x rộng x cao: 25 x 15 x 8,5 em) có sẵn thức ăn dé nhân nuôi.
Sau khi trứng nở, bổ sung thêm thức ăn dé sâu sáp phát triển. Nuôi sâu sáp cho đến khi ấu trùng đạt 28 ngày tuôi sau đó tiễn hành thu thập các ấu trùng đủ tuổi để phục
vụ cho thí nghiệm.
Galleria mellonella_
Hình 2.2 Nhân nguồn sâu sáp G. mellonella 2.4.2 Nhân nguồn ong B. hebetor
Ong B. hebefor được thu thập trên âu trùng sâu đầu đen tại Bến Tre sau đó được định danh và nhân nuôi trên ấu trùng sâu đầu đen tại phòng thí nghiệm Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông học, Trường Dai học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh khoảng 4— 5 thế hệ. Sau đó nhân nuôi bằng cách cho 50 ấu trùng sâu sáp 28 ngày tuổi vào trong hộp nuôi côn trùng có nắp lưới hình chữ nhật có kích thước (dài x rộng x cao: 25 x 15 x 8,5 cm) tiếp xúc với 35 con thành trùng cái và 15 con thành trùng đực ong B. hebetor trong 24 giờ, cho ăn thêm mật ong 30%. Mỗi ngày cho thêm 50 ấu trùng sâu sáp 28 ngày tudi mới vào dé ong B. hebetor ký sinh. Thu ong B. hebetor 1 ngày tuôi đề tiến hành làm
thí nghiệm.
22
2.4.3 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng phát triển, tỷ lệ sống và tỷ lệ đực/cái của ong B. hebetor ký sinh trên ấu trùng sâu sáp
Cho 10 cặp thành trùng ong B. hebetor 1 ngày tuổi tiếp xúc với 30 ấu trùng sâu sáp 28 ngày tuổi trong 24 giờ, chi dé 5 trứng ong B. hebetor (cùng ngày tuôi) trên 1 ấu trùng sâu sáp, tiến hành thí nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, một yếu tố với 4 nghiệm thức là 4 mức nhiệt độ khác nhau (20°C, 25°C, 30°C va 35°C), 4 lần lặp lại, trong điều kiện âm độ 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ. Các nghiệm thức được bố trí đồng nhất tại 4 ngăn tủ định ôn với mỗi ngăn là một mức nhiệt độ. Mỗi nghiệm thức gồm 4 hộp, mỗi hộp chứa 30 trứng ong B. hebefor ký sinh trên ấu trùng sâu sáp. Hang
ngày, theo dõi và ghi nhận các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Thời gian phát triển của giai đoạn trứng: được tính từ khi trứng được đẻ ra đến
khi trứng nở (ngày)
- Thời gian phát triển của giai đoạn âu trùng: được tính từ khi trứng nở đến khi ấu trùng tạo kén (ngày)
23
- Thời gian phát triển của giai đoạn nhộng: được tính từ khi au trùng tạo kén đến
khi vũ hóa (ngày)
- Thời gian hoàn thành vòng đời: được tính từ ngày trứng được đẻ ra cho đến khi thành trùng cái đẻ được quả trứng đầu tiên (ngày)
a
- Ty lệ trứng nở (%) ở 4 mức nhiệt độ được tinh bằng tổng số ấu trùng/tổng sốA
trứng
- Tỷ lệ chết giai đoạn ấu trùng (%) ở 4 mức nhiệt độ được tính bằng tổng số ấu trùng chét/téng số ấu trùng ban đầu
z
- Tỷ lệ hóa nhộng (%) ở 4 mức nhiệt độ được tinh bằng tổng số nhộng/tổng số ấuA
trùng còn sống
- Tỷ lệ vũ hóa (%) ở 4 mức nhiệt độ được tính bằng tổng số con trưởng thanh/téng số nhộng
- Tỷ lệ thành trùng đực (%) được tinh bằng tổng số con thành trùng duc/téng số
con vũ hoá
- Tỷ lệ thành trùng cái (%) được tính bằng tổng số con thành trùng cai/téng số
con vũ hoá
các pha của ong ký sinh
các pha của ong ký sinh.
robracon hebetor) trên sâu jalleria mmellonella) Po:
nhiệt |
Hình 2.4 Bồ trí thí nghiệm ảnh hưởng của nhiệt độ đến thời gian phát triển, tỷ lệ sống, tỷ lệ đực/cái ong B. hebefor ký sinh trên ấu trùng sâu sáp
24
2.4.4 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng sinh sản và tuỗi thọ của ong B. hebetor ký sinh trên ấu trùng sâu sáp
thọ vty lệ dyeiedi
sinh (Habrobracon hebetor)
‘san
Hình 2.5 Bồ trí thí nghiệm ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng sinh sản và tuổi thọ của ong B. hebetor ký sinh trên âu trùng sâu sáp
Ở mỗi mức nhiệt độ, cho 1 cặp ong B. hebetor 1 ngày tuổi tiếp xúc với 5 ấu trùng sâu sáp 28 ngày tuổi trong hộp nhựa có kích thước (đường kính x chiều cao: 7 cm x 3 cm), lặp lại 10 lần sau đó hằng ngày phải thay thé ấu trùng sâu sáp mới cùng ngày tuổi vào hộp cho ong B. hebetor tiếp tục ký sinh. Bồ trí thí nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, một yếu tố với 4 nghiệm thức là 4 mức nhiệt độ khác nhau (20°C, 25°C, 30°C và 35°C), trong điều kiện 4m độ 70 + 5%, thời gian chiếu sáng 12 giờ. Thí nghiệm được theo dõi đến khi thành trùng chết và lặp lại 10 lần.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Số trứng đẻ được hàng ngày (trứng/ngày)
25
- Thời gian đẻ trứng (ngày) được tính từ ngày thành trùng cái đẻ trứng đầu tiên tới ngày thành trùng cái đẻ trứng cuối
- Tổng số trứng đẻ được của thành trùng cái (trứng/thành trùng cái)
- Thời gian sau đẻ trứng (ngày) được tinh từ ngày thành trùng cái ngưng đẻ trứng
đến ngày thành trùng cái chết
- Tuổi thọ thành trùng (ngày) được tính từ ngày vũ hoá đến ngày thành trùng chết 2.4 Xử lý số liệu
Biểu đồ được vẽ bằng phần mềm Microsoft Excel 2016. Số liệu được tổng hop bằng phần mềm Microsoft Excel 2016 và được xử lý thống kê bằng phần mềm SAS 9.1, phân hạng theo kiều LSD ở mức ý nghĩa alpha 0,01.
26
Chương 3