CHUONG 3. KET QUA VÀ THẢO LUẬN 3.1. Khao sát cấu trúc hợp chat Q1
3.2. Khảo sát cấu trúc hợp chất Q2
Hợp chất Q2 (10.88 mg) thu được từ phân đoạn EA4.3 có những đặc điểm
sau:
-Dang bột mau trắng, tan tốt trong methanol.
-SKLM với hệ giải ly C-Me-H2O 40:10:1, hiện vết dưới dén UV, dùng với acid sulfuric 20% hơ nóng cho vết màu tím hồng.
-Phé 'H-NMR (CD:OD, phụ lục 6): các độ chuyên dịch được trình bày trong
bảng 3.2.
-Phé C-NMR (CD:OD, phụ lục 7): các độ chuyên địch được trình bay trong
bảng 3.2.
-Phô COSY (CD;OD, phụ lục 8).
-Phô HSQC (CD:OD, phụ lục 9).
-Phô HMBC (CD:OD, phụ lục 10).
Biện luận cấu trúc
Phé 'H-NMR xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của proton anomer tại dy 5.39 (1H, d, 1.0 Hz) và 4.43 (1H, d, 7.5 Hz), các proton gắn trên carbon mang oxygen
cộng hưởng trong vùng ồn 4.43-3.20. Ngoài ra con có các tín hiệu của § nhóm
methyl gắn trên carbon tứ cấp tai dy 1.25, 1.23, 1.08, 1.07, 1.05, 0.94 và 0.87, trong đó có proton của một nhóm methyl xuất hiện dưới dang mũi đôi tại Sy 1.23 (d, 6.5 Hz) giúp dự đoán trong cau trúc hợp chất Q2 có chứa phân tử đường
rhamnose.
Pho !3C-NMR cho thấy hợp chất Q2 có hon 30 carbon. Trong đó 2 carbon
anomer cộng hưởng tai dc 105.6 và 101.9, các carbon mang oxygen cộng hưởng trong ving dc 90.3-62.8 ppm.
Qua những dữ liệu NMR trên giúp đự đoán hop chat Q2 là một triterpene có gắn hai phân tử đường.
24
Kết hợp phô HSQC và HMBC cho thấy hợp chất Q2 có carbon olefin tứ cấp
tại dc 150.9 vả hai carbon >C=O ở ðc 213.0 va 180.0 ppm.
Sự biến mat của proton olefin trong khung triterpene cùng với sự xuất hiện tin hiệu cộng hướng carbon olefin >C= tại ồc 150.9 giúp dự đoán hợp chất Q2 có nói
đôi dạng >C=C<.
Tương quan HMBC ti proton của hai nhóm methyl cong hưởng tại du 0.86
và 1.07 đến các carbon cộng hướng tại d¢ 90.2 (>CH-O-—); 40.4 (=C<, C-4); 57.4
(=CH-, C—5) giúp xác định hai nhóm methyl này ở vị trí C—4. Proton của nhóm methyl cộng hướng tại ồn 1.25 cho tương quan với các carbon cộng hưởng tại dc 150.9 (=C=, C-13); 46.3 (=C<, C-14); 44.0 (=C<, C-8) và 29.2 (=CH:-, C-1Š5)
giúp dự đoán nỗi đôi ở vị trí C—13. Ngoài ra, tương quan giữa các proton của hai
nhóm methyl cộng hưởng tai 54 1.08 và 1.05 tới các carbon cộng hướng tại dc
213.0 (=C=O), 46.4 (=C<, C-20), 37.5 (=CH:-) giúp dự đoán nhóm oxo nằm ở vị trí C-19 hoặc C-21. Một số tương quan HMBC khác được the hiện qua hình
3:2.
Từ những dữ liệu trên giúp dy đoán hợp chất Q2 là triterpenoid có khung sườn oleanan, có nỗi đôi >C= ở vị trí C=13, một nhóm oxo (>C#O) và có gắn
thêm hai phân tử đường.
Khi thực hiện SKLM hợp chất Q2 với hệ dung môi C-Me-H;O 40;10:1 cho vết hap thu UV giúp dự đoán hợp chất có nỗi đôi liên hợp.
Trong khung sườn oleanane, khi nỗi đôi >C=C< ở vị trí C—13 và C-18 thì độ dịch chuyên hỏa học dc của hai carbon C=-13 vả C—18 nằm trong khoảng 135.6—126.3 ppm [26]. Khi nỗi đôi C—13 và C-18 liên hợp với nối đôi >C=O ở
vị trí C-19 thi C-13 va C-18 có độ dich chuyén hóa học bc 151.1 (C=13) va
134.2 (C-18) [27].
Kết hợp so sánh số liệu phỏ NMR của hợp chất Q2 với sé liệu NMR của hợp chất 2a,3a-dihydroxy-19-oxo-olean-13(18)-ene-28-oic acid (hợp chất so sánh) cho thấy có sự tương đông ở vong D, E (bảng 3.2) nên dy đoán hợp chất Q2 có nỗi đôi tại vị trí C-13 và C-18.
25
Tương quan HMBC từ proton anomer 5y 4.43 (Sc 105.6) đến carbon C-3 (de
90,2) giúp dự đoán phan tử đường thứ nhất gắn vào khung aglycon ở C-3.
Proton anomer thứ hai 615.39 (dc 101.9) tương quan với carbon cộng hưởng tại
5c 80.0 (C-2') giúp xác định phân tử đường thứ hai gắn vào phan tử đường thứ
nhất tại vị trí C—2',
Kết hợp pho COSY, HSQC, HMBC xác định được phân tử đường thứ nhất có
các carbon cộng hưởng tại dc 105.6, 79.0, 79.5, 72.1, 77.6, 62.8 va phan tử đường thứ hai có các carbon cộng hưởng tại d¢ 101.9, 72.1, 72.2, 74.0, 70.0 va
18.0.
Proton H-4' cộng hưởng dưới dạng mũi đôi-đôi với hằng số ghép J=8.5. 8.0 Hz giúp dự đoán H—-4' năm ở vị trí xích đạo như vậy phân tử đường thứ nhất là /- D-glucose. Từ những dữ liệu NMR trên, cấu trúc của hợp chất Q2 được dé nghị
là
3-Ó-(¿-L-rhananopyranosyl-(I—>2)-/-2-glucopyranosyl)-I9-oxo-olean-I3(18)-
ene-28-oic acid.
Hình 3.4. Một số tương quan HMBC của hợp chất Q2
Hình 3.5. Cau trúc hợp chat so sánh.
2?
Bang 3.2 Dir liệu pho ‘H-NMR và “C-NMR của hợp chất Q2 và hợp chat so
Vị trí
arbon
CB -..-....
19 20 21 22
23 24 25 26 27 28 29 30 Gle
I’
2
3
4
5
&
Rha
1”
2"
3
ro
5”
6” 1.23 (á, 6.5)
sánh?!
Q2 (CD:OD)
€ 6 m) (J-Hz dc (ppm dc m
] 355 43.4
66.4 3.22 (dd, 11.5, 7.5)
4.00 (d, 3.5)
27.4
B2
Sư Q2 B2
AAAIAWRISD bọ 2% kỳ —m—m22 22+ 7— to it20)091 1A VMS 29 H000 MÔNG) hột?SA—KASHD CCccioeil—=U—=U+x© Pb
101.9 72.1 72.2 74.0 70.0 18.0
teNNW mm mm B2 B2 Q2 t2 ho> h9 mm mỡ 9 OMANơèCb>C22~3G C62 AUS
Buse Wo mW
(**) Hop chat so sánh: 2a,3a-dihydroxy-19-oxo-olean-13(18)-ene-28-oic acid
[27]
28
KET LUẬN VÀ DE XUẤT
Cây Ruột gà dang hóng Spermacoce ocymoides Burm.f., họ Ca phê (Rubiaceae) được thu hái tại Long Án vao năm 2016 được định danh bởi TS.
Đặng Văn Sơn. Viện Sinh học nhiệt đới miền Nam. Cây sau khi thu hái được rửa
sạch, phơi khé ở nhiệt độ phòng, sau đó đem xay thành bột khô (10,5 kg). Bột
này được sử đụng phương pháp ngâm đầm đề điều chế cao ethanol ban đầu. Sau đó dùng phương pháp chiết lỏng lỏng với n-hexane, ethyl acetate dé điều chế các
loại cao tương ứng.
Bang các kỹ thuật sắc ký cột, sắc kí lớp móng, hai hợp chất với kí hiệu lần
lượt la QI (14.51 mg), Q2 (10.88 mg) đã được cô lập từ phân đoạn cao ethyl acetate EA4.
Bằng phương pháp phô nghiệm và đối chiếu với các tài liệu tham khảo, cau trúc hóa học của hai hợp chất nói trên được đề nghị là
3-Ó--D-xylopyranosyl-(I—>3)-2-D-glucopyranosyl-2,23-dihydroxyoleanolic acid (QI) va 3-O-(z-z-rhamnopyranosvl-(1—>2)-ỉ-2-glucopyranosyl)-19-oxo-olean-
I3(1§)-ene-28-oic acid (Q2).
no
HoT HO cf
toe” v r
# H E H
3-O-f-D-xylopyranosyl-{1—>3)-8-D-glucopyranosyl-2,23-dihydroxyoleanolic acid
(Q1)
3-Ó-(œ-[-rhamnopyranosyl-(I—>2)-/-D-glucopyranosyl)-19-oxo-olean-l 3(1§)- ene-28-oic acid (Q2)
Trong phạm vi của khóa luận, chúng tôi chỉ mới nghiên cứu phân đoạn
EA4 cao ethyl acetate của cây Ruột gà dang hong. Trong thời gian sắp tới, nêu có đủ điều kiện. chúng tôi sẽ tiếp tục khảo sát các phân đoạn khác của cao ethyl
acetate của cây Ruột ga dang hóng dé có thé cô lập thêm những hợp chất khác.