3.1. Khao sát cấu trúc hợp chất TV1
Hợp chất TV1 (19.6 mg) thu được từ phân đoạn EA 7.3 với các đặc điểm như sau:
— Chat dạng bột vô định hình, mau trắng, tan tốt trong dung môi methanol.
— Sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi giải ly chloroform — methanol (85 : 15), cho
vết không hap thu UV, khí phun bang dung dich sulfuric acid 20%, sấy nóng ở
nhiệt độ cao xuất hiện một vết có mau tím hồng với Ry= 0.45.
— Phố 'H-NMR (CD:OD, 500 MHz) (phụ lục 3.1a, bang 3.1)
— Phố C-NMR (CD:OD, 125 MHz) (phụ lục 3.1b bảng 3.1)
— Phỏ COSY (CD:OD) (Phu lục 3.1c).
— Phd HSQC (CD;OD) (Phu lục 3. 1d).
— Phô HMBC (CD:OD) (Phụ lục 3. le).
+ Biên luân cấu trúc:
Phé ‘H-NMR của hợp chất TV1 thé hiện tín hiệu cộng hưởng của proton olefin
—~CH=C< ở ồ; 5.23 (, H-12), proton gắn trên carbon mang oxygen 6 ồu 3.14 (dd, J = 12.0, 4.5 Hz, H-3). proton methine ở ồn 2.84 (dd, J =13.5, 3.5 Hz, H-18). Phé đô còn
thê hiện tín hiệu cộng hưởng của proton anomer ở dy 4.38 (1H, d, J = 8.0, H-1') và các
proton gắn trên carbon mang oxygen của đường trong vùng 3.0 — 3.8 ppm giúp dự đoán có sự hiện diện của một phân tử đường. Ngoài ra. phô đỗ cho thấy có tín hiệu proton
nhóm methoxy ở d4 3.77 (s, -OCHs) và tín hiệu cộng hưởng của 7 nhóm methyl -CHạ
ở trong vùng từ trường cao 6p 1.16 — 0.78.
Phô '?C—NMR kết hợp với HSQC của hợp chất TV1 thé hiện tín hiệu cộng hưởng của 37 carbon. Trong đó xuất hiện tín hiệu cộng hướng của hai carbon carboxyl tại dc
181.9 (C—28) và dc 171.4 (C-6'), một cặp carbon olefin -CH=C< ở ðc 123.7 (C—12),
145.2 (C—13). một carbon nhóm methoxy tai dc 51.7 (OCHS). Ngoài ra, trên phô còn thé hién tin hiéu cộng hưởng của một carbon anomer tai ồc 107.0 (C—]') và các carbon gắn oxygen trong vùng dc 73.2 đến 77.5 giúp xác nhận lại sự có mặt của một phân tử
đường.
Từ những dữ kiện phô NMR trên giúp dự đoán hợp chất TV1 là một saponin triterpenoid với phan aglycone là oleanoic acid và một phân tử đường.
13
Dựa vào phô COSY, HSQC, HMBC giúp xác định cầu trúc phân tử đường. Phân tir đường có 6 carbon bao gồm 1 carbon anomer ở dc 107.0, 4 carbon mang oxygen [5c
75.3 (C-2), d 77.5 (C-3), ồc 73.2 (C-4) va ọc 76.6 (C—5') ], một carbon -COO' ở dc 171.4 (C-6) và 1 nhóm methoxy ðc 51.7. Tương quan HMBC từ proton của nhóm
methoxy dy 3.77 đến carbon ở 171.4 (—COO- , C-6) giúp xác định nhóm -OCH: gan
ở(C- 6).
Proton H-4' xuất hiện dưới dạng mũi đôi - đôi (dd), J = 9.5/9.0 Hz. Các proton
H-2' — H-5' cộng hưởng dưới dang mũi dd hoặc ¿ có J lớn (J = 8.0 — 10.0 Hz) giúp xác định sự định hướng trục của các proton này. Như vậy phân tử đường được xác định là
6=@ỉ-methyl-/đ-D-glucuronate.
Tương quan HMBC từ proton anomer H—I' ở 34 4.38 đến carbon ở dc 91.1 (C- 3) và tương quan từ proton H-3 (54 3.14) đến carbon anomer C-I' (Sc 107.0) giúp xác định phân tử đường gắn vào aglycone qua C3. Một số tương quan HMBC khác được
trình bày trong hình 3.1.
Từ những dữ liệu trên. kết hợp so sánh với số liệu phô của oleanolie acid 3-O- 6~ỉ-methyl-/đ~D-glueuronopyranoside [23] cho thấy cú sự tương đồng, nờn hợp chat TV1 được dộ nghị là oleanolic acid 3-ỉ-6'-ỉ-methyl-/-D-glueuronopyranoside.
14
%+“
4>
a 23
Oleanolic acid 3-@-6=@-methyl-đ-D-glueuronopyranoside (TV1)
*: Tương quan HMBC
Hình 3.1. Cau trúc hóa học và một số tương quan HMBC của hợp chất TV1
15
Bang 3.1. Dữ liệu phô NMR của hợp chất TV1 với oleanolic acid 3-@-6'-2-
methyl-ỉ-D-glucuronopyranoside (A)
2.84 (dd, 13.5. 3.5 42.8 | 3.29 (dd, 10.0, 2.0
Vị trí (A) (pyridine — ds) [23
carbon | dy (ppm) J-Hz) k3 dn (ppm) (J-Hz)
I 39.8
2
3 | 3.14 (dd, 12.0,4.5) | 91.1 | 3.38 (dd, 12.0, 4.0) | 89.1 |
4 5 6 7 8
9
10
T 24.5
12 |5230) 123.7 | 5.48 (, 2.5) 122.6 13
14
15
16
17 18 19 20 2]
22 23 24 25
4>- _
_ 428
1.05 (s) 1.31 (s)
0.85 (s 0.97 (s) | 16.9 |
2 0.82 (s) 0.96 (s)
2 0.81 (s) 0.82 (s) 17.4 27 1.16 (s 26.4 | 131(s 26.2
28 1801
29 |0.91(s
30 | 0.95 (s | 24.0 | 1.02 (s)
1' 4.38 (d. 8.0 4.98 (d, 8.0 2 |3.24(d4 8.0, 8.5) 4.07 (1, 8.5) 3' 3.36 (dd, 9.0. 9.0 4.25 (t. 9.0 4 | 3.51 (dd, 9.0, 9.5) 4.46 (1, 9.0)
5' 3.81 (d, 10.0) 4.58 (d, 9.5)
6 171.4 171.0 6-OCH; | 3.77 (s) 3.86 (s)
a
3.2. Khảo sát cấu trúc hợp chất TV2
Hợp chất TV2 (8.3 mg) thu được từ phân đoạn EA 7.3 với các đặc điểm như sau:
— Chất dạng bột vô định hình, màu trang, tan tốt trong dung môi methanol.
— Sắc kí lớp móng với hệ dung môi giải ly chloroform — methanol (85 : 15), cho vết không hap thụ UV, khi phun bằng dung dịch sulfuric acid 20%, say nóng ở nhiệt độ cao xuất hiện một vết có mau tim hồng với Ry= 0.5.
— Phô !H-NMR (CD;OD, 500 MHz) (phụ lục 3.2a, bảng 3.2).
— Phô !C-NMR (CD:OD, 125 MHz) (phụ lục 3.2b bảng 3.2).
— Pho COSY (CD:OD) (Phụ lục 3.2c).
— Phé HSQC (CD:OD) (Phụ lục 3.2d).
— Phô HMBC (CD:OD) (Phụ lục 3.2e).
s* Biên luận cấu trúc:
Phô 'H-NMR và phô !°C—NMR của hợp chat TV2 cho thay nhiều sự tương đồng với hợp chất TV1. Proton olefin -CH=C< cộng hưởng ở du 5.24 (brs, H-12), proton gắn trên carbon mang oxygen ở 5y 3.17 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, H-3) va 7 nhóm methyl
cộng hướng dưới dang mũi đơn ở vùng từ trường cao dy 1.16 — 0.82.
Phô '*C — NMR và HSQC cho tín hiệu cộng hưởng của oleanolic acid bao gồm
carbon C-3 (8¢ 91.1), carbon olefin C12, C13 (ôc 123.7, d¢ 145.2), - \COOH (C — 28
dc 182.0), 7 nhóm CHạ (Šc 33.8 — 15.9).
Tín hiệu cộng hưởng của phân tử đường hexose (proton anomer H-1' ở ôn 4.38,
d, J = 8.0 Hz) carbon anomer C-1' ở 5c 107.1, 4 carbon gắn oxygen trong vùng dc 73.5
~ 77.5) và 1 carbon -COO' ở dc 171.0.
Ngoài ra phô NMR có tín hiệu của nhóm ethoxy ở ồn 4.24/ dc 62.4 ( -CH2, C-7')
và ôn 1.29/ dc 14.4 (- CH3, C-8’).
Từ những dữ liệu NMR trên, dy đoán hợp chat TV2 có cấu trúc tương tự TV1
bao gôm phần aglycone là oleanolic acid, phần đường là —đ-D-glucoronate.
Phỏ HMBC cho thay sự tương quan từ proton H-3 (Sy 3.17) đến carbon anomer C-1' (ỗc 107.1) và ngược lại giúp xác định phân tử đường gắn vào aglycone tại C-3.
Proton methylene của nhóm ethoxy cho tương quan với carbon — COO’ ở bc 171.0 giúp
xác định nhóm ethoxy gắn vào C- 6' của đường.
17
Từ những dữ liệu trờn dộ nghị hợp chất TV2 là oleanolic acid 3-ỉ-6-ỉ-ethyl- /-D-glucuronopyranoside. TV2 có thé là chat giả tạo được tạo thành trong quá trình
ngâm dam trong ethanol
1
Hình 3.2. Cau trúc hóa hoc và một số tương quan HMBC của hợp chất TV2
18
Bảng 3. 2. Dữ liệu pho NMR của hợp chất TV2 với oleanolic acid 3-O-6'-O-
methyl-ỉ-D-glucuronopyranoside.(TV1)
cà. TV2 (CD:OD) (TV1) (CD:OD
vious bc dc
carbon | dn (ppm) (J-Hz) dn (ppm) (J-Hz)
1L | 397, | 398 _
_ 270] | 270 |
3.14 (dd, 12.0, 4.5 3.17 (dd, 12.0, 4.0)
~
SSIS lis Sâ|+ằ'â°Inl!: âœ=|S= ›|Ct
49.
‹
và~ơ `â
StS 132 OC 2 eC
pia fo | 429, 4
15 fo S89 [16 | | 4đ | 241.
cứ | | 47 | 477 | _ 18 |285(Œzd105 | 42.8 | 2.84 (dd, 13.5,3.5) | 42.8
19 |) | 43) | 44 |
20 | | 36) | 316 |
_ 21 |, | 340 8 |
23 1.05 (s) 28.9 | 1:05 (s 28.5
0.82 (s 15.9 | 0.82 (s 15.9
0.85 (s 8|08l@ | 17.
1.16 (s) 16 (s) 26.4
b2 |o22|42 Biwi BIAS S|SIelSiS MICOS œ=|S= ˆ¿›|C tkằ
26
27 —
_oe 29 30
0.91 (s)
0.94 (s
4.38 (đ, 8.0)
3.25 (dd, 8.0. 9.0
33.8
24.0 107.0 Ỉ .91 (s)
107.1 | 4.38 (d, 8.0)
3 | 3.24 (dd, 8.0, 8.5) 75.3 3.36 (dd, 9.0, 9.5 7.6 | 3.36 (dd, 9.0, 9.0 77.5
3.52 (dd, 9.0, 9.5 73.2
3.81 (đ, 9.5
| U10,—- | H14 |
8 _ |1.29(,7.0) 14.4 =
aS Iro}ewlselro |e œ|=|~|@IŠ|=l= =l 6 =l*
+
4
~
19