CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG,VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.6. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.6.6 Đánh giá tính đồng nhất về khối lƣợng
Thực hiện quy trình kiểm tra trọng lƣợng khô của mẫu chuẩn ở NICVB và IVAC. Tại mỗi phòng thí nghiệm thực hiện 10 lần thử nghiệm. Tại mỗi phòng thí nghiệm, các lần thực hiện kiểm định cùng phương pháp.
So sánh kết quả giữa hai phòng thí nghiệm theo hai tiêu chí: độ chụm của kết quả tại từng phòng và đánh giá sự khác biệt về kết quả giữa hai nơi. Khi kết quả phân tích đạt các tiêu chí trên sẽ đƣa ra giá trị trọng lƣợng của mẫu.
Quy trình
- Để ống mẫu chuẩn ở nhiệt độ phòng trong khoảng 24h.
- Cân từng ống (A) - Bẻ ống mẫu chuẩn.
- Rửa sạch ống với nước cất để loại hết phần mẫu đông khô trong ống - Sấy phần ống thủy tinh đã rửa sạch ở 1200C trong 2h.
- Cân phần đã sấy khô của từng ống (B).
Xử lý số liệu
Loại giá trị bất thường, xác định độ chụm các kết quả bằng chương trình MS-EXCEL. So sánh kết quả giữa hai phòng thí nghiệm đánh giá sự khác biệt về kết quả giữa hai nơi bằng chương trình SPSS.Tính kết quả trung bình: sử dụng chương trình MS-EXCEL.
Đánh giá: Các kết quả thu đƣợc nằm trong khoảng x 2SD 2.6.7 Đánh giá công hiệu và tính đồng nhất về công hiệu
Thực hiện quy trình kiểm tra công hiệu bạch hầu bằng phương pháp thử thách trên chuột lang tại IVAC. Quy trình đƣợc thực hiện bởi hai nhóm, mỗi nhóm thực hiện 06 lần thử nghiệm. Các lần th ực hiện kiểm định cùng phương pháp, sử dụng cùng loại chuột, trên cùng một thiết bị.
So sánh kết quả giữa hai phòng thí nghiệm theo hai tiêu chí: độ chụm của kết quả tại từng phòng và đánh giá sự khác biệt về kết quả giữa hai nơi. Khi kết quả phân tích đạt các tiêu chí trên sẽ đƣa ra giá trị công hiệu của mẫu.
31
Quy trình: Sử dụng chuột lang English, trọng lƣợng 250-350g. 12 chuột/ lồng/ 01 độ pha loãng.Mẫu chuẩn là vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn Quốc tế mã số 07/216.
Công hiệu 213 IU/ ống, mẫu thử là RD6.Vắc xin chuẩn và thử đƣợc pha để tiêm miễn dịch theo công thức nhƣ sau:
Bảng2.1: Công thức pha loãng vắc xin Loại vắc xin Độ pha loãng
so với mẫu tương ứng
Công thức pha
1 MCQT 07/216 (mẫu chuẩn)
A (1/30) 02 ống vắc xin + 30 ml NMSL B (1/60) 15 ml (A) + 15 ml NMSL C (1/120) 15 ml (B) + 15 ml NMSL 2 RD6 A (1/50) 01 ống vắc xin + 50 ml NMSL
B (1/100) 15 ml (A) + 15 ml NMSL C (1/200) 15 ml (B) + 15 ml NMSL
- Tiêm các độ pha cho mỗi lồng chuột với liều lượng 1 ml/chuột / dưới da đùi.
- Sau 28 ngày tiêm thử thách toàn bộ số chuột trên với độc tố bạch hầu theo liều lƣợng 50LD50.
- Tiêm song song dung dịch đối chứng cho 3 nhóm chuột, mỗi nhóm 4 chuột các dung dịch sau: 2LD50, 1LD50, 0,5 LD50.
- Đọc kết quả chuột trong 5 ngày sau tiêm thử thách.
- Ghi lại số chuột sống/ chết ở mỗi độ pha.
- Tính kết quả theo phần mềm Probit analysis của WHO.
* Điều kiện để thử nghiệm có giá trị:
Thử nghiệm có giá trị nếu:
+ Liều thử thách: khi tiêm cho các nhóm chuột đối chứng.
2 LD50 : 4 chuột chết hết trong thời gian 96 giờ theo dõi.
32
0,5 LD50: không có chuột chết trong thời gian 96 giờ theo dõi.
1 LD50: Chuột chết ít nhất 1 con và không quá 3 con trong thời gian 96 giờ theo dõi.
+ ED50 của mỗi loạt vắc xin phải nằm giữa liều miễn dịch nhỏ nhất và lớn nhất.
Thử nghiệm phải đạt đựơc tiêu chuẩn của chương trình Probit Analysisđặt ra về đường thẳng và đường song song của mối tương quan đáp ứng liều.
Chỉ sử dụng kết quả của thử nghiệm có giá trị để đƣa vào xử lý.
Xử lý số liệu:Loại giá trị bất thường, xác định độ chụm các kết quả: sử dụng chương trình MS-EXCEL.
So sánh kết quả giữa hai phòng thí nghiệm đánh giá sự khác biệt về kết quả giữa hai nơi: chương trình SPSS.
Tính kết quả trung bình: sử dụng chương trình Weghted Geometric Mean của WHO.
Đánh giá: Các kết quả thu đƣợc nằm trong khoảng x 2SD
Công hiệu bạch hầu thu đƣợc dự kiến lớn hơn hoặc bằng 500 IU/ống.
2.6.8 Dƣ̣ đoán ha ̣n dùng của vắc xin mẫu chuẩn
Thực hiện bảo quản mẫu ở NICVB trong điều kiện nhiệt độ: 50°C, độ ẩm 75±5% trong các khoảng thời gian: 2,3,6 tháng. Tiến hành xác định công hiệu bằng phương pháp thử thách trên chuột langở IVAC. Mẫu tại mỗi thời điểm kiểm tra lặp lại hai lần. Trung bình kết quả của hai lần thử nghiệm đƣợc đƣa vào dự đoán hạn sử dụng của vắc xin mẫu chuẩn.
Quy trình:
Bảo quản mẫu nghiên cứu trong điều kiện:
- Nhiệt độ: 50°C ± 1°C.
- Độ ẩm: 70% ± 5%.
- Thời gian: 2 tháng, 3 tháng, 6 tháng.
Tính tuổi thọ dự đoán
Công thức tính: C = k × Ctn
Trong đó:
33 C
Ctn
k
Tuổi thọ của mẫu nghiên cứu khảo sát ở nhiệt độ bảo quản của vắc xin mẫu chuẩn đông khô (-20°C).
Tuổi thọ thực nghiệm của mẫu nghiên cứu ở điều kiện khắc nghiệt (50°C).
Hệ số tương quan được tính dựa trên nguyên lý Vant-hoff.
4 2
2 10 10
t t
ttn tb
k 7
Với 2 là hệ số nhiệt độ của tốc độ phản ứng, ∆t = 50 – (-20) = 70.
Yêu cầu cho vắc xin mẫu chuẩn Quốc gia bạch hầu đông khô: tuổi thọ dự đoán lớn hơn hoặc bằng 10 năm.