CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU
3.2 Phương pháp nghiên cứu
3.2.3 Phương pháp phân tích mẫu
Thu mẫu và bảo quản: Thu mẫu vào bình 1lít và bảo quản mẫu lạnh cho đến khi phân tích mẫu xong
Chuẩn bị:
- Dung dịch H2SO4 98%.
- Dung dịch H2O2 30%: Pha 600 ml H2O2 50% thành 1.000 ml với nước cất.
- Dung dịch 4-nitrophenol 0.2%: cân 0.2g 4-nitrophenol hoà tan với nước cất thành 100 ml.
- Dung dịch NaOH 10N: hòa tan 400g NaOH với nước cất thành 1000ml.
Tiến hành:
- Đong 50 ml mẫu vào ống oxi hóa và đồng thời làm một mẫu trắng bằng nước cất.
- Cho vào 5 ml H2SO4 98%.
- Để nguội, tiếp tục cho vào 2 ml H2O2 30%.
- Oxi hóa trên hệ thống Kejdalh với thời gian và nhiệt độ đã được set up sẵn..
Chú ý: Sau khi oxi hóa nếu mẫu chưa trắng (mẫu chưa oxi hóa hết thì tiếp tục thêm 1 ml H2O2 và oxi hóa tiếp (để nguội mới thêm vào để phòng nguy hiểm).
- Oxi hóa xong, để nguội.
- Pha loãng bằng một ít nước cất cho vào bình định mức.
- Nhỏ vào 3 giọt nitrophenol.
- Chuẩn độ bằng NaOH 10 N đến khi dung dịch vừa có màu vàng.
- Để nguội.
- Dùng H2SO4 1:3 chuẩn độ cho đến khi dung dịch không màu.
- Pha loãng bằng nước cất đến 100 ml.
Chú ý: Để mẫu lắng sau 24 giờ mới đem phân tích.
Đo Tổng đạm kjeldahl :
Lấy 5 ml mẫu nước đã oxi hóa + 20ml nước cất và dùng phương pháp Idophenol blue để xác định TAN.
Xác định hàm lượng TAN bằng phương pháp Indophenol Blue (APHA et al,1995)
Chuẩn bị thuốc thử:
Nước cất không đạm: hòa tan 2 ml FeSO4.7H2O có nồng độ 100 g/l vào 1000 ml nước máy, thêm vào 0,1-0.2 ml H2SO4 đậm đặc để hạ pH xuống dưới 4,5 (phản ứng với chỉ thị methyl cam). Sau đú, chưng cất đến khi cũn lại ẳ thể tích, loại bỏ 50 ml nước đầu.
Dung dịch A: Hòa tan 11,1 ml phenol(>89%) với ethanol 95% thành 100ml.
Dung dịch được sử dụng trong một tuần.
Dung dịch B: Hòa tan 0.5g Sodium Nitroprusside với 100 ml nước cất không đạm. Chứa trong lọ nâu và được sử dụng trong một tháng.
Dung dịch C: Hòa tan 20 g Trisodium citrate và 1g NaOH với nước cất không đạm thành 100 ml, sau đó thêm vào 25 ml NaOCl 5%. Dung dịch C được chuẩn bị và sử dụng hết trong một ngày.
Dung dịch chuẩn:
Dung dịch stock N-NH4 500 mg/l: Hòa tan 0.2358 g (NH4)2SO4 với nước cất không đạm thành 100 ml.
Dung dịch chuẩn N-NH4 10 mg/l: pha 1 ml dung dịch stock (500 mg/l) với nước cất không đạm thành 50 ml.
Tiến hành phân tích:
Chuẩn bị đường chuẩn:
Chuẩn bị 6 ống nghiệm và nước cất không đạm: từ dung dịch chuẩn ta dùng nước cất không đạm pha thành 5 ml với nồng độ giảm một nữa dần từ ống đâu tiên là 1 mg/l và ống số 5 là 0,0625 mg/l ống số 6 không có nồng độ (5 ml nước cất không đạm)
Thêm lần lượt các thuốc thử sau:
4 giọt dung dịch A, lắc điều
4 giọt dung dịch B, lắc điều
10 giọt dung dịch C, lắc điều.
Đậy mẫu, ủ trong nhiệt độ phòng và trong điều kiện ánh sáng yếu trong vòng 30 phút. Đo độ hấp thụ quang ở bước sóng 630 nm ở nước ngọt và 640 nm ở nước lợ.
Tính kết quả
Dựa vào nồng độ tương quan giữa nồng độ C và độ hấp thụ quang A của mẫu chuẩn , lập phương trình tương quang dạng:
A = aC+b.
Trong đó:
A: độ hấp thụ quang,
C: nồng độ của mẫu chuẩn (mg/l)
Từ đó suy ra nồng độ của mẫu cần phân tích:
a b CM AM
.
Sau khi biết được tổng nitơ Kjeldahl ta tiếp tục xác định hàm lượng nitrite và nitrate tự do trong nước
Xác định hàm lượng NO3- bằng phương pháp khử cadmium và so màu diazonium(APHA et al,1995)
Chuẩn bị thuốc thử:
Nước cất không chứa NO2-
: Thêm vào 1 lít nước cất 1 ml H2SO4 đậm đặc, 0,2 ml MnSO4 (36,4 g MnSO4.H2O /100 ml) và 1-3 ml KMnO4. sau đó chưng cất lại, loại bỏ 50ml nước đâu. Dùng nước này để pha dung dịch và mẫu chuẩn, thuốc thử.
Thuốc thử: cân 0,2 g N-1-Naphthylethylenesiamine Dihydrochloride, 2 g Sulfanilamide pha, trộn 2 hỗn hợp với nhau thêm khoảng 50 ml nước cất không đạm không nitrite vào, dùng đũa thủy tình khuấy điều cho vào bình định mức thêm 20 ml dung dịch acid sulfuric đậm đặc và định mức thành 100 ml
Dung dịch chuẩn
Dung dịch NaNO2 500 mg/l: Sử dụng dung dịch NaNO2 500 mg/l do nhà sản xuất cung cấp hoặc hòa tan 0,2463g NaNO3 trong 100 ml nước cất.
Dung dịch NaNO2 10 mg/l : hòa tan 2 ml dung dịch NaNO2 500 mg/l với nước cất thành 100 ml
Thiết lập đường chuẩn:
Chuẩn bị 6 ống nghiệm để sẵn 5 ml thể tích nước cất không đạm không nitrite riêng ống sau cùng ( ống thứ 6) chưa 9 ml nước cất, sau đó hút 1 ml dung dịch mẹ vào ống 6 ta được dung dịch NaNO2 1 mg/l, sau đó giảm một nữa nồng độ dần, bằng cách hút một nữa thể tích dd ống 6 qua 5, 5 qua 4….đến ống 2 ta hút một nữa còn dư của ống 2 bỏ, vậy nồng độ của ống 1 bằng 0.
Lần lược cho 0,2 ml thuốc thử vào các ống nghiệm, chờ dung dịch có màu hồng, tiến hành đo mẫu ở bước sóng 540 nm.
Mẫu được lọc qua cột cadmium để khử NO2 thành NO3-, sau đó cho thuốc thử vào, thao tác tương tự như mẫu đường chuẩn, tiến hành so màu diazonium. Nồng độ NO3-
của mẫu được tính dựa vào phương trình đường chuẩn và hiệu suất cột khử.
Tính kết quả:
Kết quả phân tích của tổng nitơ kjeldahl được tính như sau:
TKNwater = (a - ablank )*(100/50)*(25/5) Tổng nitơ trong mẫu nước ta có là:
TNwater=TKNwater + [NO2-] + [NO3-]
Phương pháp Persulfate theo APHA, 1998 (Method 4500-N C. Persulfate method)
Thu mẫu: Thu mẫu vào chai nhựa 1 lít, trữ lạnh Chuẩn bị hoá chất:
Dung dịch oxy hóa: 20.1 g Postassium persulfate (< 0.001 %N) và 3 g NaOH khan bằng 800 ml nước cất. Sau đó định mức thành 1000 ml, trữ trong bình repipet để sử dụng.
Dung dịch đệm borate: hòa tan 60.8 g H3BO3 và 8 g NaOH khan bằng 800 ml nước cất. Sau đó định mức thành 1000 ml, trữ trong bình repipet để sử dụng.
Dung dịch NaOH 6N: hòa tan 12 g NaOH khan với 35 ml nước cất và chuẩn về 50 ml. Trữ trong chai nâu, ở nhiệt độ thấp để sử dụng.
Tiến hành:
- Hút 10 ml nước mẫu (lưu ý: không lọc mẫu) vào ống công phá - Thêm vào 5 ml dung dịch oxy hóa, đậy chặt lắc điều
- Autoclave trong 20 phút ở 121oC - Làm lạnh ở nhiệt độ phòng
- Thêm vào 1 ml dung dịch đệm borate (đậy nắp lắc điều) - Thêm 3 giọt dung dịch NaOH 6 N ( đậy nắp lắc điều) - Định mức với nước cất thành 50 ml
- Phân tích NO3- bằng cột khử Cadmium và so màu Diazonium
Tính kết quả: Hàm lượng NO3- đo được cũng chính là hàm lượng nitơ tổng số.