Chương 2: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.1 Bước ủầu nuụi nhõn loài B. dorsalis trong hai ủiều kiện: phũng thí nghiệm và nhà lưới
2.1.1 Thiết lập nguồn ruồi ban ủầu a. Thu thập và ủ trái
Trỏi ổi bị nhiễm ruồi ngoài ủồng tại xó Tầm Vu, huyện Chõu Thành, tỉnh Hậu Giang ủược thu thập ủể mang về phũng thớ nghiệm, sau ủú ủược ủ trong hộp nhựa ủó cú lớp mạc cưa ẩm dày khoảng 5 mm tạo ủiều kiện cho nhộng phỏt triển.
Hỡnh 2.1 Trỏi ủược ủ
b. Sàn lọc nhộng
Sau 10 ngày, một số nhộng xuất hiện trong lớp mạc cưa. Số nhộng này sẽ ủược tỏch ra bằng cỏch sàn lọc với cỏc dụng cụ như rõy hay rổ. Cỏc trỏi nhiễm ruồi tiếp tục ủ thờm 10 ngày ủể thu ủược số nhộng cũn lại. Trong mười ngày tiếp theo này, 2 lần sàn nhộng ủược tiến hành và mỗi lần cỏch nhau 5 ngày.
c. Phát triển ruồi từ nhộng
Nhộng thu ủược của mỗi lần ủược chia làm 2 và ủược rói ủều trờn lớp mạc cưa dày khoảng 5 mm chứa trong hai nắp nhựa khỏc nhau. Một ớt nước ủược phun lờn lớp mạc cưa ủể tạo ẩm ủộ. Một cỏi phễu ủược ủặt ỳp lờn trờn mỗi nắp nhựa ủể duy trỡ ẩm ủộ và tạo lối thoỏt ra cho ruồi sau khi vũ húa nhằm trỏnh cho ruồi khụng bị chết do cỏnh bị dớnh nước. Hai nắp chứa nhộng ủược ủặt vào hai lồng nuụi thành trựng. Ngoài ra, một hộp nước và một ủĩa ủường cỏt cũng ủược ủặt vào trong mỗi lồng ủể làm thức ăn cho thành trựng sau khi chui ra. Một lồng ủược ủặt ở trong NL, lồng cũn lại ủược ủặt trong PTN. Sau khi thành trựng ủầu xuất hiện, một ủĩa carot (sẽ ủược ủề cặp trong phần thức ăn cho thành trựng) ủược ủặt thờm vào lồng ủể làm thức ăn cho thành trựng. Thức ăn và nước ủược thay 3 ngày một lần.
13
Hỡnh 2.2 Phễu và nắp sẽ ủược dựng ủể chứa mạc cưa và nhộng
d. Phân loại thành trùng
Cụng tỏc phõn loại dựa vào tài liệu của Drew et al. (2002) và ủược tiến hành kỹ lưỡng hàng ngày. Ở ðBSCL, RðT chủ yếu có 2 loài là B. dorsalis và B.
correcta nên việc phân loại cũng chủ yếu tập trung vào 2 loài này. Thành trùng thu ủược từ lần ủầu tiờn này ủược gọi là ruồi F0, thành trựng nở từ trứng ruồi F0 ủược gọi là ruồi F1, cỏc thế hệ kế tiếp ủược cộng thờm một ủơn vị. Lưu ý, cỏc RðT vũ húa trong thời gian 2 - 3 tuần sẽ ủược cho vào chung một lồng ủể ủảm bảo ủộ ủồng nhất về tuổi (Walker et al.,1996).
2.1.2 Nuôi nhân a. Thu trứng
Chuẩn bị vật liệu
- Trỏi ổi tươi ủược cắt thành miếng nhỏ hỡnh trụ ủặt vào giữa nắp của dome - Một miếng xốp thấm nước ủược ủặt lờn miếng ổi ủể giữ ẩm cho trứng - Sau ủú, phần hộp của dome ủược ủặt ỳp lờn nắp chứa ổi bờn trong.
Ổi ủược xem là loại trỏi cõy thớch hợp ủể hấp dẫn ruồi ủến ủẻ trứng, ngoài ra dome cỡ nhỏ cũng ủược nhận thấy cho kết quả tốt hơn dome cỡ lớn (Nguyễn Thị Thu Thủy và ctv., 2001).
Cỏch tiến hành ủặt dome
- Dome ủược ủặt vào trong lồng thành trựng (Hỡnh 2.6A) - Số lượng dome: 2 – 4 dome/lồng
- Vị trớ ủặt: dome ủược ủặt dọc theo mặt lồng nơi nhiều ỏnh sỏng nhất cho số lượng ruồi nhiều nhất ủến dome.
- Thời gian ủặt dome: 9:30 – 13:30 giờ.
- Việc thu trứng ủược tiến hành 3 ngày một lần, khỏc với cỏc qui trỡnh trước là 5 ngày một lần.
14
- Tuổi thành trựng khi bắt ủầu ủặt dome: 15 ngày sau khi thành trựng vũ húa bắt ủầu ủặt dome.
Thu trứng từ trên dome
- Bỡnh xịt nước (chỉnh tia nước thật mịn) ủể rửa trứng từ dome, miếng xốp giữ ẩm và nắp vào trong một hộp chứa.
- Sau khi trứng lắng xuống thỡ chắt nước cẩn thận ủể khụng mất trứng.
- Ống tiờm nhựa cú phõn ủộ 1 ml (ống tiờm ủược cắt bỏ chúp) ủược dựng ủể hỳt tất cả trứng vào. Sau ủú, ống tiờm ủược ủảo ngược cho tất cả trứng lắng xuống và cẩn thận ấn pớt tụng ủể ủẩy nước ra ngoài. Số trứng trong 0,1 ml (100 àl) tương ứng khoảng 1.500 trứng (Nguyễn Thị Thu Thủy và ctv., 2001).
Hỡnh 2.3 Dome cú ủặt ổi bờn trong (A), trứng thu ủược từ dome (B) và trứng ủược ủặt trờn giấy hỳt ẩm sậm màu (C)
b. Các bước tiếp theo Cách nuôi ấu trùng
- Thành phần thức ăn cho ấu trùng (Nguyễn Thị Thu Thủy và ctv., 2001;
Lê Quốc ðiền và ctv.,2002).
Thành phần Trọng lượng (g) Tỉ lệ (%)
Thịt trỏi ủu ủủ (ủể rỏo 24giờ) 947 94,7
Men Torula 50,5 5,1
Nipagin (methyl-p-hydroxybenzoate) 2,5 0,2
Tổng cộng 1000 100,0
A B
C
15 - Cách chuẩn bị thức ăn ấu trùng
+ ðu ủủ chớn ủảm bảo khụng xịt thuốc trừ sõu và khụng tồn dư ủộc chất.
Trỏi ủược thu hoạch khi vừa cú vệt nhỏ chuyển màu vàng, giữ trỏi trong mựng lưới ủể trỏnh ruồi giấm.
+ ðu ủủ ủược gọt vỏ, bỏ hột và cắt lỏt trỏi chớn, xay trộn phần thịt trỏi ủó cõn trong mỏy xay sinh tố, bắt ủầu từ tốc ủộ chậm cho ủến khi ủặc lại.
+ Men Torula và Nipagin ủược thờm từ từ vào mỏy xõy cho ủến khi cỏc thành phần này trộn vào nhau hoàn toàn.
+ Thức ăn ủó hoàn tất sau ủú ủược chuyển vào hộp nhựa và trữ tủ lạnh ở 40C tối ủa một thỏng.
+ Thức ăn ủụng lạnh trước khi sử dụng cho ấu trựng ăn phải ủược làm tan, sau ủú ủặt trong một cỏi rõy ủể thoỏt nước làm rỏo thịt trỏi. Trong khi làm tan phải phủ miếng voan mỏng hoặc ủể vào một cỏi lồng rỗng trỏnh nhiễm ruồi giấm Drosophila sp.
-Cỏch tiến hành ủặt trứng vào thức ăn
+ Thức ăn cho ấu trựng ủược ủổ vào ủĩa (500 g/ủĩa) với tỉ lệ như sau (Nguyễn Thị Thu Thủy và ctv., 2001; Lê Quốc ðiền và ctv., 2002).
Loài Lượng thức ăn/ủĩa Số trứng/ủĩa Số trứng/1g thức ăn
B. dorsalis 500 g 1.650 3,3
+ Một miếng voan nilon ướt (khoảng 20 mm2) ủược ủặt lờn trờn thức ăn.
+ Ống tiờm phõn ủộ 1 ml ủược dựng ủể ủo lượng chớnh xỏc số trứng ủể lên miếng voan.
+ Một lớp mạc cưa (5 mm) ủó ủược sàng, sấy khụ và khử trựng ủược cho vào hộp chứa ủể làm mụi trường húa nhộng cho ấu trựng và làm ẩm phần trờn của mạc cưa bằng cách xịt nhẹ nước.
+ ðĩa thức ăn ủược ủặt vào hộp nhựa và phủ lờn một miếng vải voan, sau ủú ủậy nắp lại.
+ Hộp chứa ủược ghi nhón gồm số hộp và ngày.
16
Hình 2.4 Hộp nuôi ấu trùng (A) và ấu trùng phát triển trong thức ăn (B)
Nhộng
-Cách trích nhộng ra từ thức ăn
+ Khoảng 13 - 14 ngày kể từ ngày thu trứng, tiến hành sàng mạc cưa ủể thu nhộng.
+ðĩa thức ăn ủược lấy ra khỏi hộp chứa và cẩn thận quột nhộng ra khỏi mặt dưới của ủĩa.
+ Nhộng ủược tỏch ra khỏi mạc cưa bằng rõy hoặc rổ, những ấu trựng cũn bỳng nhảy phải ủặt trở lại trong mạc cưa ủể sàng lại lần sau. Nếu thấy mạc cưa khụ thỡ phun thờm một ớt nước ủể ủảm bảo ẩm ủộ.
+ Nhộng sau khi sàng ủược ủặt trong mạc cưa ẩm và ủược ủậy bằng một cỏi phễu cú ủường hầm nhằm duy trỡ ẩm ủộ và cho phộp ruồi vào lồng sau khi nở.
-Cách tính số nhộng
+ 100 nhộng (ủếm 2 lần ủể kiểm tra) ủược cõn ủể làm cơ sở tớnh toỏn số nhộng còn lại.
+ Tổng số nhộng ủược tớnh bằng cụng thức
Tổng số nhộng = x 100
Hình 2.5 Sàn nhộng
Trọng lượng 100 nhộng Tổng trọng lượng nhộng
A B
17 Thành trùng
- Thành phần thức ăn thành trùng
Thành phần Trọng lượng (g) Tỉ lệ (%)
Thịt củ carot (ủể rỏo 24 giờ) 900 85,0
ðường 98 15,0
Tổng cộng 1000 100,0
-Cách chuẩn bị thức ăn thành trùng
+ Carot ủược gọt vỏ, rửa sạch và cắt lỏt cho vào mỏy xay sinh tố, cho thờm một ớt nước vào và xay trộn cho ủến khi ủặc lại.
+ ðường và Nipagin ủược thờm từ từ vào mỏy xay cho ủến khi cỏc thành phần này trộn vào nhau hoàn toàn
+ Thức ăn ủó hoàn tất chuyển vào hộp nhựa và trữ trong tủ lạnh ở 40C tối ủa một thỏng.
+ Thức ăn ủụng lạnh trước khi sử dụng cho thành trựng phải ủược hạ nhiệt ủộ bằng cỏch ủể bờn ngoài cú phủ miếng vải voan hoặc ủặt trong một hộp không trong khoảng 5 phút.
- Cách chuẩn bị lồng thành trùng
+ Kớch thước lồng 30 x 30 x 40 cm. Lồng ủược phủ bằng vải mựng, tốt nhất là vải voan. Tất cả lồng nuụi ủược ủặt trờn kệ cú dầu ở 4 chõn kệ ủể trỏnh kiến ăn mồi.
+ Mỗi lồng ủược ủặt 1 ủĩa nhộng (mỗi ủĩa chứa 700 nhộng), một hộp nước và 1 ủĩa ủường cho ruồi thành trựng.
+ Lồng ủặt trong nhà lưới chọn nơi thoỏng mỏt cú ỏnh sỏng nhẹ, cú thể che chắn bớt ỏnh sỏng rọi trực tiếp vào lồng. ðối với lồng ủặt trong phũng lạnh thỡ ủặt ở vị trớ nhận ỏnh sỏng ủược ủiều chỉnh thớch hợp.
+ Lồng ủược ghi nhón gồm số của lồng và ngày thỏng.
-Cách nuôi thành trùng
+ Từ thành trựng ủầu tiờn nở ủến khi bắt ủầu ủẻ trứng (giai ủoạn tiền ủẻ trứng) là thời kỳ quan trọng nhất trong việc nuụi ruồi. Chỳng phải ủược nuụi tốt trong giai ủoạn này, nếu khụng tỉ lệ trứng sẽ bị ảnh hưởng.
+ Thành trựng ủầu tiờn nở ủược ghi nhận ngày.
18
+ Khi thành trựng bắt ủầu nở ủặt thờm 1 ủĩa carot.
+ Cứ sau 3 ngày thay nước và thức ăn một lần.
+ Khoảng 10 ngày sau khi ruồi ủầu tiờn nở, lấy phễu và ủĩa nhộng ra khỏi lồng.
+ Lồng ủược kiểm tra kỹ xem ruồi bờn trong cú ủỳng loài B. dorsalis, nếu không phải bắt loại ra.
- Thay lồng thành trùng
+ Tất cả ủồ vật ủược ủem ra khỏi lồng
+ Lồng ủược ủem ra ngoài, rung nhẹ cho ruồi vào phớa sau cửa lồng và từ từ di chuyển áo bao ra khỏi khung.
+ Áo lồng ủược cuốn lại và chuyển sang lồng mới. Trong trường hợp muốn lọai bỏ thỡ ủem ỏo bao cú chứa ruồi vào tủ lạnh trong khoảng 1giờ ủể giết ruồi còn sống.
+ Áo lồng ủược giặt sạch. Nếu dựng xà phũng thỡ phải xả nhiều lần trỏnh tồn dư ủộc chất.
Hỡnh 2.6 Thức ăn cho thành trựng và dome ủược ủặt trong lồng (A), Lồng thành trựng trong ủiều kiện PTN (B) và nhà lưới (C)
A
B C
19 Sự trẻ hóa
Sau khoảng 6 – 12 thỏng, cụng tỏc trẻ húa nguồn ruồi ủược tiến hành bằng cỏch thay thế một số ruồi ủực và ruồi cỏi trong lồng bằng những ruồi ủực và ruồi cỏi ngoài tự nhiờn thụng qua việc thu thập mẫu trỏi ngoài ủồng như trong bước thiết lập nguồn ruồi ban ủầu.
Sơ ủồ quỏ trỡnh nuụi nhõn ruồi ủục trỏi cõy
2.1.3 Một số chỉ tiờu ủỏnh giỏ về tiờu chuẩn của qui trỡnh nuụi nhõn
Sử dụng cỏc tiờu chuẩn của Walker et al., (1996) ủể ủỏnh giỏ mức ủộ thành cụng của qui trỡnh nuụi, ủồng thời ủể so sỏnh tớnh hiệu quả của 2 ủiều kiện nuụi nhõn trờn. Cỏc tiờu chuẩn ủú trong phần nuụi nhõn bao gồm
- Phần trăm trứng nở: lấy 100 trứng cho vào giấy hỳt ẩm ủậm màu ẩm ủặt bờn trong ủĩa petri, sau ủú ủậy nắp lại và ghi nhón, sau 2 và 3 ngày ủếm và tớnh phần trăm trứng nở. Mỗi nghiệm thức ủược lặp lại 3 lần.
Số trứng nở
% trứng nở = x 100 Tổng số trứng
- Trọng lượng nhộng: ủo trọng lượng của 100 nhộng với 3 lần lặp lại của mỗi nghiệm thức.
13 n 10 n
15 n