Sự tổng hợp hợp chất phenol ủược khảo sỏt ở cỏc thời ủiểm 12, 24, 36, 48, 72, 96 và 120 giờ sau khi chủng nấm tấn cụng. Sự tớch tụ hợp chất phenol ủược thể hiện ở vựng tế bào quanh ủĩa ỏp cú màu xanh lỏ cõy sau khi nhuộm với Toluidine Blue O và quan sát dưới kính hiển vi quang học (Hình 3.5)
Kết quả ghi nhận ở thời ủiểm 36 giờ sau chủng nấm tấn cụng (GSTC), chưa cú sự xuất hiện của hợp chất phenol. ðến 48 GSTC, phenol ủó ủược tổng hợp ở vựng tế bào dưới ủĩa ỏp trờn tất cả cỏc nghiệm thức. Phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp phenol trong tế bào chỉ có nghiệm thức xử lý với cỏ cứt heo tươi không khác biệt so với ủối chứng xử lý với nước cất cũn cỏc nghiệm thức khỏc ủều khỏc biệt so với ủối chứng xử lý với nước cất. ðiều này cho thấy, ở thời ủiểm 48 GSTC cỏ cứt heo tươi khụng cú khả năng kớch khỏng so với cỏc nghiệm thức ủược xử lý với sống ủời hộo, cỏ hụi hộo, sống ủời tươi. ðến 72 GSTC, nghiệm thức xử lý bằng sống ủời hộo cú phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp phenol trong tế bào cao nhất (61.67%), khác biệt so với không xử lý (28.33%) (bảng 3.3). ðiều này cho thấy nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo cú khả năng giỳp cõy lỳa khỏng bệnh chỏy lỏ thụng qua phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp phenol trong tế bào (Hỡnh 3.4).
Bảng 3.3: Phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp polyphenol trong tế bào khi ủược xử lý bằng dịch trớch thực vật qua 4 thời ủiểm sau khi chủng nấm tấn cụng
Nghiệm thức
Phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tớch tụ hợp chất phenol trong tế bào ở cỏc thời ủiểm
48 GSTC 72 GSCT 96 GSTC 120 GSTC Sống ủời tươi
36,33 a 45,33 bc 68,67 a 59,67 a Cỏ cứt heo tươi
23,67 b 33,33 cd 47,67 b 45,47 a Cỏ hôi héo
34,33 a 42,33 bc 67,00 a 64,23 a Sống ủời hộo
44,00 a 61,67 a 74,33 a 70,37 a Nước cất (ủối chứng õm)
21,67 b 28,33 d 38,32 c 20,33 c Clorua ủồng (ủối chứng dương)
42,00 a 49,67 ab 68,00 a 62,39 a
CV (%) 5,81 7,71 5,23 7,89
Các chữ số trong cùng 1 cột giống nhau không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% qua phép thử Duncan. Số liệu ủược chuyển sang arcsinx khi xử lý thống kờ
ðến thời ủiểm 96 GSTC, tỉ lệ ủĩa ỏp tạo sự tớch tụ hợp chất phenol ở nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo (74.33%), cỏ hụi hộo (67.00%), sống ủời tươi (68.67%) ủều khỏc biệt so với nghiệm thức khụng ủược xử lý (38,32%). Ngoài ra, ở thời ủiểm này cũng ghi nhận trờn nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo và cỏ hụi hộo cú một số vựng tế bào quanh ủĩa ỏp cú màu xanh dương, cú thể ủõy là những hợp chất carbohydrate hoặc tinh bột ủó ủược tổng hợp (de Neergaard, 1997). ðiều này chứng tỏ khi ủược xử lý với sống ủời hộo và cỏ hụi hộo ủó giỳp cõy lỳa vừa tạo pholyphenol và vừa tạo hợp chất khác (Hình 3.7). Tương tự, Huỳnh Minh Châu (2003) cũng nhận thấy sự tớch tụ hợp chất khỏc ở thời ủiểm 96GSTC khi khảo sỏt khả năng kớch khỏng của clorua ủồng ủối với bệnh chỏy lỏ lỳa (Pyricularia grisea) trờn khớa cạnh mụ học. ðến thời ủiểm 120 GSTC, tỉ lệ ủĩa ỏp tạo sự tớch tụ phenol ở tất cỏc nghiệm thức ủược xử lý bằng dịch trớch thực vật ớt hơn so với thời ủiểm 96 GSTC và khỏc biệt so với ủối chứng õm. Trong ủú, nghiệm thức ủược xử lý với cỏ cứt heo tươi (45,47%) lại cao hơn so với ủối chứng (20.33%) trong khi ở thời ủiểm 96 GSTC thỡ thấp hơn so với ủối chứng. ðiều này cho thấy nghiệm thức ủược xử lý bởi cỏ cứt heo tươi cú tớch tụ ủược hợp chất phenol nhưng muộn hơn so với cỏc nghiệm thức khác
Thụng qua tỉ lệ ủĩa ỏp tạo sự tớch tụ phenol ở cỏc thời ủiểm cho thấy nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo, cỏ hụi hộo, sống ủời tươi cú sự tớch tụ phenol sớm và bền. Trong khi ủú, nghiờm thức xử lý với cỏ cứt heo tươi cú sự tớch tụ phenol muộn ở thời ủiểm 120 GSTC
Kết quả bảng 3.4 cho thấy diện tớch vựng tế bào quanh ủĩa ỏp cú sự tớch tụ polyphenol tương ủương nhau trờn nghiệm thức xử lý với dịch trớch thực vật và nghiệm thức khụng ủược xử lý ở thời ủiểm 48 GSTC. Tuy nhiờn, ở thời ủiểm 72 GSTC, nghiệm thức ủược xử lý với sống ủời hộo (799.6mm2) và cỏ hụi hộo (675.7mm2) cao hơn ủối chứng dương (406.2mm2). ðến thời ủiểm 96 GSTC và 120 GSTC thỡ diện tớch vựng tế bào xung quanh ủĩa ỏp cú sự tớch tụ phenol của nghiệm thức xử lý bởi số sống ủời hộo, cỏ hụi hộo và sống ủời tươi cao hơn so với nghiệm thức khụng ủược xử lý trong ủú nghiệm thức ủược xử lý bởi cỏ hụi hộo (264,5mm2) cao hơn so với ủối chứng clorua ủồng cho hiệu quả bền ủến thời ủiểm 120 GSTC ðiều ủú chứng tỏ, nghiệm thức ủược xử lý với sống ủời hộo, cỏ hụi hộo, sống ủời tươi cú sự tớch tụ phenol sớm và bền trong ủú nghiệm thức ủược xử lý với cỏ hụi héo cho hiệu quả kích kháng bền nhất thông qua diện tích vùng tế bào xung quanh ủĩa ỏp cú sự tớch tụ phenol
Bảng 3.4: Diện tớch vựng tế bào cú sự tớch tụ hợp chất polyphenol khi ủược xử lý dịch trớch thực vật qua 4 thời ủiểm sau khi chủng nấm tấn cụng
Nghiệm thức
Diện tích vùng tế bào có sự tích tụ hợp chất phenol ở các thời ủiểm
48 GSTC 72 GSCT 96 GSTC 120 GSTC
Sống ủời tươi 22,15 b 158,40 bc 98,93 ab 95,85 ab Cỏ cứt heo tươi 9,38 b 80,76 c 52,67 b 40,90 bc Cỏ hôi héo
60,96 ab 675,70 a 278,00 a 264,50 a Sống ủời hộo
60,63 ab 799,60 a 313,80 a 200,40 a Nước cất (ủối chứng õm)
8,76 b 23,30 d 67,80 b 26,68 c Clorua ủồng (ủối chứng dương) 105,70 a 406,20 ab 307,6 a 248,30 a
CV (%) 0,46 0,49 0,49 0,42
Các chữ số trong cùng 1 cột giống nhau không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% qua phép thử Duncan. Số liệu ủược chuyển sang: logx khi xử lý thống kờ
Kết quả bảng 3.5 cho thấy phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp phenol ở mức +++ của nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo tương ủương với ủối chứng dương ở cỏc thời ủiểm 48 GSTC, 72 GSTC, 96 GSTC, 120 GSTC cao nhất là ở thời ủiểm 72 GSTC (29.49%). Nghiệm thức ủược xử lý với cỏ hụi hộo ủến thời ủiểm 96 GSTC (23.37%) cú sự tổng họp phenol ở mức +++ ủạt cao nhất tương ủương với ủối chứng xử lý clorua ủồng. Ở tất cả cỏc thời ủiểm quan sỏt, nghiệm thức ủược xử lý bởi sống ủời tươi cú sự tổng hợp phenol ở mức +++ cao hơn so với ủối chứng khụng xử lý nhưng thấp hơn nhiều so với ủối chứng xử lý với clorua ủồng. ðiều này cho thấy, nghiệm thức ủược xử lý bởi sống ủời hộo, cỏ hụi hộo, sống ủời tươi ủều cú khả năng giỳp cõy lỳa khỏng bệnh chỏy lỏ nhờ vào sự gia tăng mức ủộ tổng hợp polyphenol cao so với nghiệm thức khụng xử lý. Trong ủú, nghiệm thức ủược xử lý với sống ủời hộo cú sự gia tăng mức ủộ tổng hợp pholyphenol sớm và bền nhất, nghiệm thức ủược xử lý với cỏ hụi hộo cú sự tớch tụ mức ủộ tổng hợp
pholyphenol muộn ở thời ủiểm 96 GSTC nhưng cao hơn so với nghiệm thức ủược xử lý bởi sống ủời tươi (Hỡnh 3.6)
Bảng 3.5: Phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp polyphenol trong tế bào khi ủược xử lý với dịch trớch thực vật ở mức +++ qua cỏc thời ủiểm
Nghiệm thức
Phần trăm ủĩa ỏp tớch tụ phenol ở mức +++ ở cỏc thời ủiểm
48 GSTC 72 GSCT 96 GSTC 120 GSTC Sống ủời tươi
3,33 bc 18,82 b 15,80 b 11,68 b Cỏ cứt heo tươi
0,43 d 8,57 c 9,16 bc 3,82 c Cỏ hôi héo
2,61 c 18,86 b 23,37 a 19,69 ab Sống ủời hộo
6,10 ab 29,49 ab 28,81 a 19,72 ab Nước cất (ủối chứng õm)
0,0 d 5,60 c 6,58 c 1,97 c Clorua ủồng (ủối chứng dương 6,57a 35,05 a 26,58 a 22,37 a
CV (%) 0,75 7,45 5,75 1,13
Các chữ số trong cùng 1 cột giống nhau không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% qua phép thử Duncan. Số liệu ủược chuyển sang arcsinx khi xử lý thống kờ
Tóm lại, qua kết quả thí nghiệm khảo sát sự tích tụ pholyphenol cho thấy các nghiệm thức xử lý với sống ủời hộo, cỏ hụi hộo, sống ủời tươi, cỏ cứt heo tươi ủều cú khả năng làm gia tăng sự tổng hợp pholyphenol trong tế bào. Trong ủú, nghiệm thức xử lý bởi sống ủời hộo cú khả năng kớch khỏng cao nhất thụng qua phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tổng hợp phenol trong tế bào, diện tớch vựng tế bào cú sự tổng hợp phenol và mức ủộ +++ ủược tớch lũy nhiều, sớm và bền qua cỏc thời ủiểm. Bờn cạnh ủú, nghiệm thức xử lý với cỏ hụi hộo cú mức ủộ +++ ủược tớch lũy muộn hơn ở thời ủiểm 96 GSTC và nghiệm thức xử lý với cỏ cứt heo tươi cú phần trăm ủĩa ỏp tạo sự tớch tụ hợp chất phenol trong tế bào xuất hiện rất muộn ở thời ủiểm 120 GSTC
CHƯƠNG 4