Nhân gi ng b ng h t hay con g i là nhân gi ng h u tính, trong thiên nhiên s th ph n c a Lan do côn trùng th c hi n, c u trúc hoa hoàn toàn thích ng
v i s th ph t lo u trúc c a
hoa và s chín c uan sinh d u nên s giao ph n
nh sâu b có tính b t bu i v i t t c các loài Anoectochilus. S th ph n
c ng t c côn trùng th c hi c a mùi
t, màu s c s c s và nh ng c u t o c a hoa là nh ng nhân t thu hút các tác nhân th ph n t kho ng cách xa.
n nuôi tr m b o k t qu c a s giao ph n cao và t o ra các gi ng lai theo ý mu i ph i ti n hành th ph n nhân t o. S th
ph n có th cùng cây, có th khác cây.
m: d làm, giá thành h c nhi u
cây kho , không b b m giao ph n chéo có th c
nh ng dòng bi n d cho v t li u ch n t o gi ng. Tuy nhiên trong th c t h t lan Kim tuy n r t hi m, s ng h t r t nhi l n y m a th i
cây ra hoa có ch ng t t.
1.3.2. Nhân gi ng b ng cây con
Khi r i nhi u, cây có t 3-5 lá, cây c ng cáp có th tách
tr n và d làm nh t.
1.3.3.
L y m t gi hành c t ra làm nhi n, m n có nhi u m t các n này vào m m; ch c n cát và rêu. Sau vài tu n s xu t hi n nh ng cây con có th ng vào các ch u m i.
áp c n, d làm, quen v i t p quán, kinh
nghi m c ng, giá thành th
có m t s tr ng ng 2- ng gi ng
không cao, cây hoa tr ng lâu b thoái hoá, b nh virus có nhi u kh truy n và phát tri n, t m ph m ch t hoa.
1.3.4. Nhân gi ng in vitro
Nhân gi ng in vitro t hi n nay có th nhân gi ng
lan trên quy mô công nghi p. So v ng
t phát tri n 2-
pháp nuôi c y mô) s s n xu t ra m t s ng cây con g n ng
kho ng 4 tri .
S ng b ng in vitro c a lan Kim tuy n nói riêng và hoa Lan nói
c ng d ng r c sinh s n qua
d ng d hành (protocorm). Cùng m ng t o hàng lo t protocorm và các protocorm có th ti p t c phân chia thành các protocorm m i ho c phát tri n thành cây hoàn ch nh.
a) Các y u t n quá trình nhân gi ng b c y mô t bào
u ki n nuôi c y mô t bào th c v t
- u ki n vô trùng
Nuôi c y in vitro là nuôi c u ki n vô trùng. N m b o t u ki n vô trùng, m u nuôi c y ho ng s b nhi m, mô nuôi c y
s b ch u ki n s thành b i c a nuôi c y mô in
vitro.[13]
t li u thông d ng nh t hi n nay là dùng các ch t hóa h c, tia c c tím có kh t n m và vi khu u là m t thao n thành công trong nuôi c y mô t bào. Tuy nhiên, n u t c n và th i gian x lý thích h p s cho t l s ng cao,
ng hay s d ng m t s hóa ch n
kh n kh trùng: N i h p vô trùng, t s y, bu ng c y và t c y vô trùng, phòng nuôi cây [13].
- u ki n ánh sáng và nhi
Ánh sáng và nhi là hai y u t chính có n quá tr nh ng c a mô nuôi c y.
+ Ánh sáng
S phát sinh h nh thái c a mô nuôi c y ch u ng t các y u t : th i gian chi ánh sáng và ch ng ánh sáng. Th i gian chi u n quá tr nh phát tri n c a mô nuôi c y. Th i gian chi u sáng thích
h p v các loài cây là 12 - n s
phát sinh h nh thái c a mô nuôi c y [13].
C ánh sáng cao kích thích s ng c a mô s c l i,
ánh sáng th p kích thích s t o ch ánh sáng
thích h p cho mô nuôi c y là 1000 - 7000lux, ngoài ra ch
ng t i s phát sinh h nh thái c a mô th c v làm u cao c a thân ch i ánh sáng tr ng. N u mô nuôi c y trong
ánh sáng xanh th s c ch i có ng t t t i s ng
c a mô s o. Hi n nay, trong các phòng thí nghi m nuôi c cung c p ngu n
2000 - i ta s d nh quang
t cách b nh nuôi c y t 35- 40cm [13].
+ Nhi
Trong nuôi c y mô t bào th c v t, nhi là nhân t quan tr ng ng t i s phân chia t bào và các quá tr nh sinh hóa trong cây. Tùy thu c vào xu t x c a m u nuôi c u ch nh nhi cho phù h p. N u nhi
200C/150C ho c 200C/280C thì t l ra r c kho ng 33%, th m chí th p
trung bình thì ho i ch t t cao t o
nhi u t bào không có t ch c. Nh n chung nhi thích h p nh t cho s sinh ng t t nhi u loài cây ban ngày là 250C - 280 17 - 200C [13].
b) ng nuôi c y mô t bào th c v t
các ch ng, các ch t c n thi t
cho s phân chia, phân hoá t ng b ng c a cây.
Thành ph n hóa h c c n s thành
công hay th t b i c a nuôi c y t bào và mô th c v t. M i m t lo i v t li u khác nhau có nh i khác nhau v thành ph ng, khi b u nghiên c u m t s loài m i ho c gi ng m i c n ph i ch n l ng nghiên c u
m t lo n phù h p.
T nh 1933, các nhà nghiên c u u t ng
nuôi c y th c v t nhi u lo c s
d ng cho m t s c s d ng r t
ph bi ng MS (Murashige&Skoog, 1962) là
c s d ng r ng rãi nh t trong nuôi c y mô c a t bào th c v t, môi ng MS thích h p cho c th c v t 1 lá m m, 2 lá m ng Gamborg (1965) còn g i là B5 dùng th nghi c s d ng trong tách và nuôi t bào tr n.
Tuy có r t nhi u lo ng nuôi c y mô t bào th c v u g m m t s thành ph n sau [14]:
+ Các mu ng.
+ Ngu n cacbon.
+ Các vitamin và aminoacid.
+ Ch t b sung, ch i tr ng.
+ Các ch ng.
- Các mu ng:
i v i cây tr ng, các ch t quan
tr ng. Ví d , magiê là m t ph n c a phân t di p l c, canxi c u t o màng t n quan tr ng c a vitamin, amino axit và protein. Ngoài
ra, các nguyên t n c a m t s enzim
c n thi t cho ho ng s ng c a t bào.
Mu i khoáng là thành ph n không th thi ng nuôi c y t bào th c v t, làm v t li u cho s t ng h p các ch t h
Các ion c a các mu i hòa tan giúp nh áp su t th m th u c ng trong t bào, duy tr n th hóa c a th c v t. Ví d : K, Ca r t quan tr ng trong
u hòa tính th m l c c a t bào [14].
c) n chính trong quá trình nhân gi ng nuôi c y mô t bào c 0: Ch n l c và chu n b cây m
c khi ti n hành nhân gi ng in vitro c n ch n l c c n th n các cây m (cây cho ngu n m u nuôi c y). Các cây này c n s ch b nh và n sinh
ng m nh. Vi c tr ng các cây m u ki ng thích h p v i ch sâu b nh hi u qu c khi l y m u c y s làm gi m
t l m u nhi ng c a m u c y in vitro.
c 1: Nuôi c y kh ng
n kh u vào nuôi c y in vitro n này c n
m b o các yêu c u: T l nhi m th p, t l s ng cao, mô t n t ng t t. khi l y m u c n ch o n phát tri n c a cây. Quan
tr ng nh nh ch i ng nh ch nh ch i hoa và cu i
n thân, m c 2: Nhân nhanh
n kích thích mô nuôi c
ng: ho t hóa ch i nách, t o ch i b nh và t o phôi
vô tính. V là ph u ki n ngo i c nh thích
h có hi u qu cao nh t. Theo nguyên t ng có nhi u cytokinin s kích thích t o ch i. Ch nuôi c y t ng là 25 - 270C và 16 gi
chi ánh sáng kho ng 2000 lux.
c 3: T o cây in vitro hoàn ch nh
t o r cho ch i ta chuy n t ng nhân nhanh sang môi
ng t o r ng t o r c b sung m ng nh auxin. M t
s ch i có th t o r ngay sau khi chuy n t ng nhân nhanh giàu cytokinin
ng không ch a ch u ti n
t o r c a ch chuy ng
tr ng t nhiên. T o r cho ch i là m t ph n r t quan tr ng c a b t k quy trình nhân in vitro nào.
c 4: Thích u ki n t nhiên
ng nghi i t l s ng
t t c n ph m b c cây trong ng nghi c nh ng tiêu chu n hình thái nh nh, có giá th ti p nh n cây in vitro thích h p và ph i ch ng
u ch m, s chi u sáng c ng
phù h p.