CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu mô hình hỗn hợp từ tháng 6 năm 2018 đến tháng 12 năm 2018.
2.2.2. Các chỉ số nghiên cứu
Bả ng 2.1: Khoảng tham chiếu của canxi ion hóa, canxi toàn phần, protein toàn phần, albumin và creatinin trong máu [1]
Mứ c đô ̣
Thấp Trung bình Cao
Canxi ion hó a (mmol/L) < 1,17 1,17 – 1,29 ≥ 1,29 Canxi toàn phần
(mmol/L) < 2,15 2,15 – 2,55 ≥ 2,55
Protein toàn phần (g/L) < 66 66 – 87 ≥ 87 Chỉ số
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
17
Albumin (g/L) < 35 35 – 52 ≥ 52
Creatinin (àmol/L) < 59 59 – 104 ≥ 104
Bả ng 2.2: Phân đô ̣ suy thâ ̣n theo KDIGO 2012 [16]
Giai đoa ̣n Mứ c lo ̣c cầu thâ ̣n (ml/phút/1,73m2)
I ≥ 90
II 60-89
IIIa 45-59
IIIb 30-44
IV 15-29
V < 15
2.2.3. Phương pháp thu thập số liệu
Các thông tin chung được thu thập tại phần mềm quản lý bê ̣nh nhân; các xét nghiệm hóa sinh được thực hiện và thu thập dữ liệu tại Khoa hóa sinh, Bệnh viện Ba ̣ch Mai. Công thức tính toán iCa được sử dụng trong nghiên cứu này được trình bày ở bảng 2.3.
Bả ng 2.3: Các công thức sử du ̣ng tính canxi ion hóa huyết thanh Công
thứ c
Tá c giả,
năm Công thứ c TLTK
1 Bộ Y Tế 𝑖𝐶𝑎 = 0,25 × (0,9 + (2,2 × 𝐶𝑎𝑇)
− (0,03 × 𝐴𝑙𝑏)) [1]
2 Bộ Y Tế 𝑖𝐶𝑎 = 𝐶𝑎𝑇 − (𝑃𝑟𝑜𝑇 × 0,017) [1]
3 Hana, 1967 𝑖𝐶𝑎 = (118 × 𝐶𝑎𝑇) (118 + 𝑃𝑟𝑜𝑇)⁄ [24]
4 Potgen, 1976
𝑖𝐶𝑎 = 0,25 × (24 × 𝐶𝑎𝑇 − (𝐾 3⁄ )) (𝐾 + 6)⁄
𝐾 = 0,1 × ((0,19 × 𝑃𝑟𝑜𝑇) + 𝐴𝑙𝑏)
[35]
5 Butter, 1984 𝑖𝐶𝑎 = 0,005 × 𝐴𝑙𝑏 + 0,98 [12]
6
Antonio, 2016
𝑖𝐶𝑎 = 0,815 × 𝐶𝑎𝑇0,5
[29]
7 𝑖𝐶𝑎 = 0,813 × 𝐶𝑎𝑇0,5
− 0,006 × 𝐴𝑙𝑏0,75 8
𝑖𝐶𝑎 = 0,826 × 𝐶𝑎𝑇0,5
− 0,023 × 𝑒𝐺𝐹𝑅
× 0,0167
Cá c chỉ số được tính với đơn vi ̣: CaT: canxi toàn phần (mmol/L); iCa:
canxi ion hó a (mmol/L); ProT: protein toàn phần (g/L); Alb: albumin huyết thanh (g/L); eGFR (ml/s/1,73m2) là công thức tính mức lọc cầu thận theo CKI- EPI 2009 [16, 28].
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
18
Bả ng 2.4: Công thức tính mức lo ̣c cầu thâ ̣n theo CKD-EPI 2009 [16]
Giớ i Creatinin
(àmol/L) Cụng thứ c
Nữ ≤ 62 𝑒𝐺𝑅𝐹 = 144 × (𝐶𝑟𝑒 × 0,0113 0,7)⁄ −0,329 × 0,993𝑡𝑢ô ̉𝑖
> 62 𝑒𝐺𝑅𝐹 = 144 × (𝐶𝑟𝑒 × 0,0113 0,7)⁄ −1,209 × 0,993𝑡𝑢ô ̉𝑖 Nam ≤ 80 𝑒𝐺𝑅𝐹 = 141 × (𝐶𝑟𝑒 × 0,0113 0,9)⁄ −0,411 × 0,993𝑡𝑢ô ̉𝑖
> 80 𝑒𝐺𝑅𝐹 = 141 × (𝐶𝑟𝑒 × 0,0113 0,9)⁄ −1,209 × 0,993𝑡𝑢ô ̉𝑖 Cre: Creatinin huyờ́ t thanh (àmol/L) và đụ̉i đơn vi ̣ eGRF từ
ml/phú t/1,73m2 sang ml/s/1,73m2 là nhân với 0,0167.
2.2.4. Phương tiện nghiên cứu Trang thiết bị
− Máy phân tích điện giải tự đô ̣ng 9180, hãng Roche (Thụy Sĩ) sử du ̣ng để đo nồng đô ̣ iCa bằng phương pháp ISE trực tiếp (hình 5.2).
Hình 2.1. Máy phân tích điê ̣n giải 9180 hãng Roche
− Hệ thống máy phân tích hóa sinh COBAS 8000, hãng Roche (Thụy sĩ)
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
19
Hình 2.2. Hệ thống máy phân tích hóa sinh Roche (COBAS 8000) Hóa chất
− Hóa chất định lượng canxi toàn phần, canxi ion hóa, protein toàn phần, albumin, creatinin của công ty Roche (Thụy Sĩ).
− Huyết thanh kiểm tra mức 1 và mức 2 của Randox.
− Ống nghiệm chống đông bằng Heparin, nước chất, nước RO.
Nguyên lý của phương pháp phân tích
− Canxi toàn phần được định lượng theo phương pháp màu thông qua phương trình:
𝐶𝑎2++ 𝑜 − 𝑐𝑟𝑒𝑠𝑜𝑙𝑝ℎ𝑡𝑎𝑙𝑒𝑖𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑥𝑜𝑛𝑒 𝑝𝐻 𝑘𝑖ề𝑚→ 𝑝ℎứ𝑐 𝑐𝑎𝑙𝑐𝑖𝑢𝑚 − 𝐶𝑃𝐶
− Canxi ion hóa được đo bằng phương pháp ISE trực tiếp.
− Albumin định lượng theo phương pháp so màu:
𝐴𝑙𝑏𝑢𝑚𝑖𝑛 + 𝐵𝐶𝐺𝑝𝐻=4.1→ 𝐴𝑙𝑏𝑢𝑚𝑖𝑛 𝐵𝐶𝐺 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑥
− Protein toàn phần được định lượng theo phương pháp so màu dựa trên nguyên tắc phản ứng Biure. Độ đậm của màu tỷ lệ với nồng độ protein trong mẫu.
𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 + 𝐶𝑢2+𝑝𝐻 𝑘𝑖ề𝑚→ 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 − 𝐶𝑢2+(𝑃ℎứ𝑐𝑚à𝑢 𝑥𝑎𝑛ℎ 𝑡í𝑚)
− Creatinin được định lượng theo phương pháp Jaffe (đo điểm đầu và cuối):
𝐶𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛 + 𝐴𝑐𝑖𝑑 𝑝𝑦𝑐𝑟𝑖𝑐 𝐴𝑙𝑘𝑎𝑙𝑖𝑛𝑒 𝑝𝐻
→ 𝑝ℎứ𝑐 ℎợ𝑝 𝑣à𝑛𝑔 𝑐𝑎𝑚
Quy trình phân tích
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
20 Công thứ c
Hình 2.3. Quy trình xét nghiệm các chỉ số hóa sinh trong nghiên cứu 2.2.5. Xử lý số liệu
Các số liê ̣u đươ ̣c lưu trữ ta ̣i phần mềm quản lý khám chữa bê ̣nh của Bê ̣nh viện Ba ̣ch Mai, làm sa ̣ch và xử lý số liê ̣u trên Excel 2013 và phần mềm SPSS 20.0. Trong đó sử du ̣ng các phép phân tích thống kê:
Đánh giá đô ̣ chính xác: kiểm đi ̣nh sự khác biê ̣t trung bình bằng test-t ghép că ̣p, biểu đồ Bland – Altman khảo sát sự tương hợp giữa 2 phương pháp ở biến liên tu ̣c. Hê ̣ số kappa khảo sát sự tương hợp các nhóm ha ̣ canxi máu, tăng canxi máu giữa 2 phương pháp, phân đô ̣ ma ̣nh theo Alman (1991) (Bảng 2.5). Giá trị p thể hiện sai khác có ý nghĩa khi p < 0,05 và sai khác không có ý nghĩa khi p > 0,05.
Bả ng 2.5: Phân nhóm bê ̣nh nhân Đo ISE
Có bê ̣nh Không bệnh Tổng
Có bê ̣nh a b a+b
Không bệnh c d c+d
Tổng a+c b+d a+b+c+d
Công thứ c tính hê ̣ số kappa: 𝑘 = 𝑝𝑜−𝑝𝑒
1−𝑝𝑒
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
21 Trong đó: po = 𝑎+𝑑
𝑎+𝑏+𝑐+𝑑 là xác xuất tương hơ ̣p quan sát.
pe = (𝑎+𝑏)(𝑎+𝑐)+(𝑐+𝑑)(𝑏+𝑑)
(𝑎+𝑏+𝑐+𝑑)2 là xác xuất tương hơ ̣p kỳ vo ̣ng.
Bả ng 2.6: Mức đô ̣ tương hơ ̣p theo Alman 1991 dựa trên chỉ số kappa
Chỉ số Kappa Đô ̣ ma ̣nh
< 0,20 Kém
0,21 – 0,40 Trung bình
0,41 – 0,60 Khá
0,61 – 0,80 Tố t
0,81 – 1,00 Rất tố t
Để đánh giá đô ̣ xác thực của công thức so với phép đo ISE trực tiếp sử
dụng công thức tính đô ̣ xác thực (1 – d%) = 1 – |𝑋̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅×1000−𝑋|
𝑋0
Trong đó: d% là đô ̣ kém xác thực (hay sự khác biê ̣t phần trăm); 𝑋 là giá tri ̣ trung bình đo bằng công thức; 𝑋0 là giá tri ̣ trung bình đo bằng ISE.
Kết quả khi tính theo công thức được đánh giá đô ̣ nha ̣y, đô ̣ đă ̣c hiê ̣u, giá trị dự đoán dương tính, giá trị dự đoán âm tính trong chẩn đoán ha ̣ canxi máu và tăng canxi máu theo phương pháp đo ISE trực tiếp, các chỉ số này tính theo công thứ c sau dựa trên bảng 2.5:
Đô ̣ nha ̣y (%) = 𝑎×100
𝑎+𝑐 Đô ̣ đă ̣c hiê ̣u (%) = 𝑑×100
𝑏+𝑑
Giá tri ̣ tiên lươ ̣ng dương tính (%) = 𝑎×100𝑎+𝑏
Giá tri ̣ tiên lươ ̣ng âm tính (%) = 𝑑×100𝑐+𝑑 2.2.6. Đạo đức nghiên cứu
Thông tin cá nhân của đối tươ ̣ng nghiên cứu đươ ̣c bảo mâ ̣t trong quá
trình thực hiê ̣n nhằm đảm bảo vấn đề y đức. Số liê ̣u đã đươ ̣c Khoa Hóa sinh- Bệnh viê ̣n Ba ̣ch Mai cho phép công bố dưới da ̣ng khóa luâ ̣n.
2.2.7. Sơ đồ nghiên cứu
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
22
Hình 2.4. Sơ đồ nghiên cứu
Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU
23