2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.3. Phương pháp chọn mẫu
Mẫu nghiên cứu được chọn trên cơ sở lấy mẫu thuận tiện có chủ đích.
Mẫu nghiên cứu được thu thập liên tục trong suốt thời gian nghiên cứu.
Qui trình khám và làm xét nghiệm:
*Khám phụ khoa: Đánh giá tổn thương âm hộ, âm đạo, cổ tử cung bằng khám lâm sàng: viêm cổ tử cung, lộ tuyến cổ tử cung, polyp cổ tử cung, sùi mào gà…
*Lấy bệnh phẩm làm xét nghiệm PAP (PAP truyền thống hoặc ThinPrepPAP) và HPV. Kỹ thuật lấy bệnh phẩm gồm các bước như sau:
- Nằm ngửa chống chân dạng rộng hai đùi, xương cụt sát ra cạnh bàn để khi đặt mỏ vịt quan sát được toàn bộ cổ tử cung
- Một mỏ vịt kim loại hoặc nhựa mỏ vịt được đặt trong âm đạo để kiểm tra cổ tử cung. Nếu cần thiết, nước muối sinh lý có thể được sử dụng để bôi trơn và làm ấm mỏ vịt cho bệnh nhân thoải mái.
- Để đảm bảo một mẫu thích hợp được thu thập, giải phẫu bề mặt của cổ tử cung phải được bộc lộ đầy đủ, bao gồm các biểu mô tế bào vảy của cổ ngoài, ranh giới vảy- trụ, vùng chuyển tiếp-phải tập trung vào việc lấy mẫu tế bào ở vùng chuyển tiếp để phát hiện đầy đủ sự hiện diện của chứng loạn sản.
Chất nhầy cổ tử cung có thể được loại bỏ nhẹ nhàng bằng một miếng gạc, đảm bảo rằng cổ tử cung ít bị tổn thương.
- Để có được mẫu vật tốt, dùng chổi cổ tử cung hoặc que gỗ bẹt cổ tử cung áp sát vào bề mặt của cổ tử cung và quay theo một hướng duy nhất, xoay ít nhất 360º đối với que gỗ bẹt và 5 vòng quay đối với chổi. Khi sử dụng que gỗ, có thể dùng thêm bàn chải cytobrush nếu cần thiết để lấy được nhiều tế bào tuyến ống cổ
- Đối với ThinPrep, lấy bệnh phẩm bằng cây chổi, đẩy vào đáy lọ 10 lần và sau đó xoay mạnh và bỏ đi. Đối với tế bào học thông thường, các mẫu vật được bôi lên một lam kính và sau đó phun dung dịch cố định hoặc đặt trong dung dịch cồn 90%.
- Nếu làm xét nghiệm PAP truyền thống thì lấy tế bào cổ tử cung phết lam kính rồi mới dùng chổi lấy bệnh phẩm làm HPV. Nếu làm Thin Prep PAP thì lấy một lọ bệnh phẩm bằng chổi làm xét nghiệm HPV trước rồi dùng mẫu bệnh phẩm sau khi làm HPV xong làm xét nghiệm Thin prep PAP .
Hình 2.1. Lấy bệnh phẩm cổ tử cung (Nguồn: Viện y học ứng dụng Việt Nam)
Chú ý: Lấy mẫu bệnh phẩm nhẹ nhàng tránh để chảy máu cổ tử cung và hạn chế lẫn máu vào bệnh phẩm.
- Vận chuyển bệnh phẩm đến phòng xét nghiệm xét nghiệm giải phẫu bệnh và phòng xét nghiệm sinh học phân tử.
*Xét nghiệm tế bào học cổ tử cung theo phương pháp Thinprep:
- Xử lý mẫu bằng máy T2000 bằng kỹ thuật chuyển tế bào có kiểm soát bằng màng lọc. Máy T 2000 sử dụng nguyên lý Cơ- Khí- Lỏng để phân tán, tập hợp và chuyển tế bào: sau khi tế bào được tập hợp trên màng lọc TransCyt được đảo ngược rồi ép nhẹ lên lam kính ThinPrep, cho kết quả là các tế bào phân bố đều trên một vòng tròn xác định.
- Phiến đồ sẽ được nhuộm bằng phương pháp nhuộm papalicolaou, gắn lamen và được đánh giá kết quả dưới kính hiển vi quang học bởi các nhà giải phẫu bệnh.
- Đánh giá tế bào cổ tử cung theo phân loại Bethesda 2014:
* Quy trình tách chiết và định danh các typ HPV nguy cơ cao trên hệ thống máy Cobas 4800:
- Khởi động hệ thống Cobas 4800: sử dụng nguồn điện 220V và 50Hz
- Bật thiết bị Cobas 4800
- Khởi động và đăng nhập vào phần mềm cobas 4800
- Bảo trì hàng ngày (tuần) thực hiện theo hướng dẫn trên phần mềm máy tính - Lấy mẫu và thuốc thử (mẻ 24 hoặc 96)
- Khởi động mẻ chạy: Chọn Work flow type, test, đặt tên mẻ chạy - Nạp mẫu, tạo khai báo mẫu, nạp đồ tiêu hao, nạp hóa chất
- Bắt đầu mẻ chạy
- Unload và dán màng cho MWP - Dán Microwell Plate
- Kiểm tra và in kết quả
- Nhận định kết quả, kết luận và khuyến cáo
Bảng 2.1. Phiên giải kết quả xét nghiệm HPV – Cobas
HR HPV (+)
High Risk HPV Positive
Kết quả dương tính cho một hoặc nhiều chủng HPV: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
HR HPV (-)
High Risk HPV Negative*
HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 và 68 DNA không phát hiện hoặc dưới ngưỡng định lượng
Invalid High Risk HPV Invalid
Kết quả không có giá trị, mẫu phải được xét nghiệm lại.
HR HPV (+) 12 typ khác, HPV16 (+), HPV18 (+)
Other High Risk HPV Positive, HPV16 Positive, HPV18 Positive.
Mẫu dương tính với HPV typ 16, typ 18, một hoặc nhiều typ HPV khác : 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.