- Tái sinh tế bào trần sau chuyển gene khó khăn.
Kỹ thuật xung điện Kỹ thuật xung điện
Kỹ thuật xung điện (electroporation)Kỹ thuật xung điện (electroporation) là một phương pháp cơ học được sử dụng để đưa các phân tử phân cực vào trong tế bào chủ qua màng tế bào. Trong phương pháp này một xung điện cao thế trong từng khoảng khắc (vài phần nghìn dây) có khả năng làm rối loạn cấu trúc màng kép phospholipid, tạo ra các lỗ thủng tạm thời cho phép các phân tử DNA ngoại lai từ môi trường xâm nhập vào bên trong tế bào.
Kỹ thuật xung điệnKỹ thuật xung điện dựa trên trạng thái tương đối yếu của các tương tác kỵ nước của phospholipid képphospholipid kép và khả năng tự động tập hợp lại của nó sau khi bị rối loạn (Purves,2001). Vì vậy, một xung điện chớp nhoáng có thể gây rối loạn ở các vị trí của màng một cách tạm thờitạm thời, làm cho các phân tử phân cực có thể đi qua, nhưng sau đó màng có thể đóng lại một cách nhanh chóng và tế bào không bị ảnh hưởng gì cả.
Page 37
Các tế bào chủ và DNA ngoại lai được tạo thành dịch huyền phù và cho vào trong một cuvette nhựa có điện cực.
Để tạo ra xung điện cao thế trong một thời gian ngắn người ta sử dụng một thiết bị gọi là máy xung gen.
Máy xung điện
Khi công tắc thứ nhất đóng, tụ điện nạp điện vào và tích Khi công tắc thứ nhất đóng, tụ điện nạp điện vào và tích một điện áp cao. Khi công tắc thứ hai đóng, điện áp này một điện áp cao. Khi công tắc thứ hai đóng, điện áp này phóng qua dịch huyền phù tế bào. Một xung điện kỹ phóng qua dịch huyền phù tế bào. Một xung điện kỹ thuật cần thiết cho kỹ thuật này là khoảng 10000 - thuật cần thiết cho kỹ thuật này là khoảng 10000 - 100000 v/cm (thay đổi tùy theo kích thước của tế bào) 100000 v/cm (thay đổi tùy theo kích thước của tế bào) trong vài phần triệu giây đến một phần ngàn giây. Xung trong vài phần triệu giây đến một phần ngàn giây. Xung điện này làm rối loạn phospholipid kép của màng tế bào điện này làm rối loạn phospholipid kép của màng tế bào và tạo ra các lỗ tạm thời. Khả năng điện của tế bào lúc và tạo ra các lỗ tạm thời. Khả năng điện của tế bào lúc tăng cùng lúc tăng lên 0,5 - 1v. Vì vậy các phân tử đã tăng cùng lúc tăng lên 0,5 - 1v. Vì vậy các phân tử đã được nạp điện này đi qua màng tế bào thông qua các lỗ được nạp điện này đi qua màng tế bào thông qua các lỗ bằng cách thức như điện di
bằng cách thức như điện di