CHƯƠNG 3. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2 Nội dung nghiên cứu
3.2.3 Các quy trình thực hiện trong nghiên cứu
Hình 3.3 Sơ đồ quy trình thu nhận bột hạt bí đỏ tách béo Hạt bí
Lựa chọn
Sấy
Tách vỏ
Nghiền thô
Trích ly béo
Sấy khô
Nghiền tinh
Bột hạt bí tách béo
Hạt lép
Vỏ
Béo
Rửa Ruột bí
Nước
Hexane
Giải thích quy trình chuẩn bị nguyên liệu
- Rửa: Hạt bí được rửa dưới vòi nước lạnh bằng phương pháp thủ công nhằm tách nhớt bẩn, ruột bí.
- Lựa chọn: Hạt bí sau khi rửa được lựa chọn nhằm loại bỏ các hạt lép, vỡ .
- Sấy: Hạt bí được sấy ở nhiệt độ 40 - 45 0C bằng thiết bị sấy đối lưu, đến khi hạt đạt độ ẩm không lớn hơn 10%.
- Tách vỏ ngoài: Hạt bí được tách bỏ lớp vỏ trấu bên ngoài.
- Nghiền thô: Hạt bí sau khi tách bỏ lớp vỏ trấu bên ngoài được nghiền trong máy nghiền cánh đập với đường kính lỗ rây là 10mm.
- Tách béo: Bột hạt bí sau khi nghiền được cho vào các túi vải rồi ngâm trong thiết bị có lớp vỏ áo để điều nhiệt, sử dụng dung môi hexan, nhiệt độ 40 - 45 oC, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi là 1/10, thời gian trích ly 36h. Phần béo được loại bỏ qua đường ống dẫn béo bên dưới thiết bị thu hồi béo, phần hơi dung môi được ngưng tụ và tái sử dụng.
- Sấy: Bột hạt bí sau khi tách béo sẽ được sấy lần hai trong thiết bị sấy đối lưu ở nhiệt độ 40 - 45 oC đến khi độ ẩm ≤ 5%.
- Nghiền mịn: Bột hạt bí sau khi sấy được tiếp tục nghiền trong thiết bị nghiền búa.
Bột hạt bí sau quá trình nghiền phải được qua được lỗ rây có đường kính 0,2mm.
Bảo quản: Bột hạt bí đã tách béo được đặt trong ngăn mát tủ lạnh ở nhiệt độ 0-4oC cho đến khi sử dụng.
Hình 3.4 Bột hạt bí đỏ đã tách béo
3.2.3.2 Quy trình thu nhận dịch trích globulin từ bột hạt bí đỏ tách béo
Hình 3.5 Quy trình thu nhận dịch trích globulin thô từ bột hạt bí đỏ tách béo a. Mẫu globulin đối chứng b. Mẫu globulin có sử dụng sóng siêu âm
Bột hạt bí tách béo
Trích ly
Ly tâm
Bã rắn
Dịch trích Globulin thô Dd NaCl
5%
Xử lý siêu âm
Trích ly
Bã rắn Bột hạt bí
tách béo
Dịch trích Globulin thô
Ly tâm Dd NaCl
5%
Giải thích sơ đồ thu nhận dịch trích globulin thô từ hạt bí đỏ không có sử dụng sóng siêu âm (mẫu đối chứng)
- Trích ly: Bột hạt bí đã tách béo được hòa vào dung môi (dịch nước muối 5%) theo tỷ lệ nguyên liệu/dung môi là 1/10. Dùng đũa thủy tinh khuấy đều hỗn hợp trên.
Sau đó, hỗn hợp được đưa vào thiết bị lắc với tốc độ 150 (v/p) ở nhiệt độ 300C trong 30 phút.
- Ly tâm: Hỗn hợp bột hạt bí tách béo và dung môi sau quá trình trích ly sẽ được ly tâm ở 20 oC với tốc độ 5000 (v/p) trong thời gian 30 phút. Cuối cùng, phần dịch lỏng là dịch trích globulin thô sẽ được thu nhận.
Giải thích quy trình thu nhận dịch trích globulin thô có sự hỗ trợ của sóng siêu âm
- Xử lý siêu âm: Bột hạt bí đã tách béo được hòa vào dung môi (dịch nước muối 5%) theo tỷ lệ nguyên liệu/dung môi là 1/10. Dùng đũa thủy tinh khuấy đều hỗn hợp trên. Sau đó, hỗn hợp này được xử lý siêu âm với tần số là 20kHz. Nhiệt độ mẫu trong quá trình siêu âm trong khoảng 28 – 300C (sử dụng bể điều nhiệt), công suất và thời gian siêu âm sẽ thay đổi tùy theo mỗi thí nghiệm.
- Trích ly: Mẫu sau siêu âm được đưa vào thiết bị lắc với tốc độ 150 (v/p) ở nhiệt độ 300C trong 30 phút
- Ly tâm: Hỗn hợp bột hạt bí tách béo và dung môi sau quá trình trích ly, sẽ được ly tâm ở 20 oC với tốc độ 5000 (v/p) trong thời gian 30 phút. Cuối cùng, phần dịch lỏng là dịch trích globulin thô sẽ được thu nhận.
3.2.2.3 Sơ đồ thu nhận chế phẩm globulin concentrate
Hình 3.6 Quy trình thu nhận chế phẩm globulin concentrate Ly tâm
Sấy thăng hoa
Chế phẩm Globulin
Cặn rắn Pha rắn
Pha lỏng Dịch trích
Globulin thô
Chỉnh về pI=3 Ly tâm Hoà tan pha rắn,
chỉnh về pH7 Lọc Chỉnh về pI=3
Hoà tan pha rắn, chỉnh về pH7
Lọc
Pha lỏng
Cặn rắn
Pha lỏng
Dd NaCl 5%, Dd NaOH 0.1 M
Dd HCl 0.1 M
Dd HCl 0.1 M
Dd NaCl 5%, Dd NaOH 0.1 M
Pha lỏng
Pha rắn
Giải thích quy trình thu nhận chế phẩm globulin concentrate
- Chỉnh về pI=3: Dịch trích globulin thô được điều chỉnh về pI của globulin bằng dung dịch HCl 0.2M và để yên trong thời gian 30 phút để đông tụ globulin.
- Ly tâm: Pha rắn được đem đi ly tâm ở 5000 v/p, 20oC trong thời gian 30 phút. Sau khi ly tâm tiến hành bỏ pha lỏng và thu nhận pha rắn.
- Hòa tan pha rắn, chỉnh về pH 7,0: Pha rắn thu được sau quá trình ly tâm sẽ được cho vào dung dịch NaCl 5% để tái hòa tan globulin và loại bỏ một số tạp chất không tan.
- Lọc: Phần dịch sau khi hòa tan với dung dịch NaCl 5% được đem đi lọc nhằm loại bỏ một số tạp chất không tan.
- Quá trình đông tụ globulin được lặp lại để làm tăng độ tinh sạch của chế phẩm.
- Sấy: Dịch lọc sẽ được sấy thăng hoa đến khi độ ẩm thấp hơn 5%. Sau đó đem nghiền mịn. Chế phẩm globulin concentrate thu được ở dạng bột.
Bảo quản: Chế phẩm globulin thu được có dạng bột mịn, độ ẩm dưới 5%, được đóng gói ghép mí kín, bảo quản ở 0 – 40C.