Qui trình chung (MeOH, EtOH, Acetone): Trong một bình 3 cổ có lắp sinh hàn hồi lưu, nhiệt kế, phễu nhỏ giọt và được nạp đầy khí nitơ, ethanol (50 mL) rồi imatinib base 2 (4,93 g, 10 mmol) được lần lượt cho vào, sau đó methansulfonic acid ( 0,96 g, 10 mmol) đã được hòa trong ethanol (5 mL) được nhỏ giọt vào ở nhiệt độ phòng. Hỗn hợp được đun hồi lưu trong 20 phút, để nguội rồi lọc. Dịch lọc được
47
cô quay còn 50% để lạnh kết tinh. Tinh thể hình thành được lọc rủa, sấy khô cho 5,3 g sản phẩm muối imatinib mesylate với hiệu suất 90%.
Qui trình chung (Ethyl acetate, Cyclohexanone và 4-Methyl cyclohexanone ):
Trong một bình 3 cổ có lắp sinh hàn hồi lưu, nhiệt kế, phễu nhỏ giọt và được nạp đầy khí nitơ, imatinib base 2 (4,93 g, 0,01 mol) được tạo huyền phù trong ethyl acetate (75 mL). Hỗn hợp được đun hồi lưu và methansulfonic acid ( 0,96 g, 0,01 mol) đã được hòa trong ethyl acetate (5 mL) được nhỏ giọt vào trong khoảng 30 phút rồi được đun hồi lưu thêm 30 phút nữa và để nguội. Kết tủa hình thành được lọc, rửa bằng ether, được sấy khô thu được 5,5g sản phẩm muối imatinib mesylate với hiệu suất 92%.
Nghiên cứu các điều kiện tạo muối imatinib mesylate
Phản ứng tạo muối được thực hiện trong các dung môi khác nhau theo quy trình chung trên, kết quả thu được được trình bày trong bảng 18.
Bảng 18: Ảnh hưởng của dung môi đến hiệu suất phản ứng
STT
Imatinib base 2 (g/mol)
MsOH (g/mL)
Dung môi mL
Điều kiện, thời gian pƣ
Hiệu suất (g/%)
1 4,93/10 0,96/10 MeOH (50+5) Hồi lưu/ 30 phút 5g/85%
2 4,93/10 0,96/10 EtOH (50+5) Hồi lưu/ 30 phút 5,3g/90%
3 4,93/10 0,96/10 Acetone (50+5) Hồi lưu/ 30 phút 5,37g/91%
4 4,93/10 0,96/10 Ethyl acetate
(75+5) Hồi lưu/ 60 phút 5,37g/91%
5 4,93/10 0,96/10 Cyclohexanone
(75+5) Hồi lưu/ 60 phút 5,4g/92%
6 4,93/10 0,96/10
4-Methyl cyclohexanone
(75+5)
Hồi lưu/ 60 phút 5,4g/92%
Từ kết quả thu được trên bảng 18, chúng tôi thấy các dung môi sử dụng đều cho hiệu suất cao, đặc biệt những dung môi có độ phân cực thấp như cyclohexanone và 4-methylcyclohexanone cho hiệu suất đến 92%. Tuy nhiên chúng tôi lựa chọn
48
dung môi ethanol với hiệu suất gần tương đương cho quá trình này để tránh độc hại cho người lao động và tồn dư dung môi của sản phẩm.
Chất 3: dạng bột màu trắng
CTPT: C30H35N7O4S ; KLPT: 589 Mp 214-224oC
ESI- MS: m/z = 590 [M+H]+, 612[M+Na]+
1H NMR(DMSO-d6) δ 10.15(s, 1H), 9.27(d, J=1,84, 1H), 8,95(s, 1H), 8.68(dd, J=1,17, 4,65 Hz, 1H), 8.50(d, J= 5.1 Hz, 1H), 8.47(d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.08(d, J=1,31, 1H), 7.90(d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.51–7.41(m, 5H), 7.20(d, J= 8.32 Hz, 1H), 3.52(s, 2H), 3,45(Brs, CH3SO3H), 2,49-2,33(bs, 8H), 2.23(s, 3H), 2,19(s, 3H);
13C NMR (CDCl3) δ 173.8, 165.4, 162.7, 159.0, 151.5, 148.5, 142.5, 137.8, 136.5, 134.9, 133.8, 132.7, 130.8, 129.3, 126.9, 124.1, 123.8, 124.0, 115.2, 112.9, 108.4, 62.5, 55.1, 53.1, 46.0, 17.7;
3.6. Tinh chế imatinib base
Trong một bình cầu 2 cổ có lắp sinh hàn hồi lưu với khuấy từ đã được nạp đầy khí ni tơ, dung dịch huyền phù của imatinib base (100 g) trong etanol (500 mL) được đun hồi lưu đến tan hoàn toàn. Than hoạt tính (10 g) được cho từng thìa vào và hỗn hợp tiếp tục được đun, khuấy hồi lưu trong 20 phút sau đó dung dịch được lọc nóng trên phễu lọc để loại chất tẩy màu. Dịch lọc trong suốt được quay cất loại dung môi đến kiệt. Kết tủa trắng hình thành được lọc rửa bằng isopropanol và sau đó được tạo huyền phù với isopropanol (200 mL). Dung dịch huyền phù mới được đun hồi lưu dưới khí quyển ni tơ và khuấy trong khoảng 4 giờ rồi để nguội và tiếp tục khuấy đến nhiệt độ phòng. Kết tủa trắng hình thành được lọc, rửa với isopropanol, được sấy trong tủ sấy chân không ở 40 oC trong khoảng 4 đến 6 giờ thu được 91 g sản phẩm imatinib base màu trắng với hiệu suất 91%.
3.7. Xác định hàm lượng của sản phẩm imatinib mesylate bằng phương pháp HPLC Hàm lượng của imatinib mesylate được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) tại Khoa vật lý đo lường Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương.
49
* Điều kiện sắc ký: Cột phenomenexC18 (5 m, 150 x 3,9 mm), nhiệt độ cột 25oC với tốc độ dòng 1,2 mL/ phút, detector 268 nm; thể tích tiêm 20 l;
* Pha dung dịch pH 2,5: Hòa tan 7,5 g Natri 1-octanesulfonate trong 800 mL nước, điều chỉnh pH đến 2,5 bằng axit phosphoric 10% và pha loãng với nước đến 1000 mL)
* Pha mẫu: Dung môi pha mẫu là metanol – axit hidrocloric 0,1M (6/4).
Mẫu (71 mg) được pha trong bình định mức 100 mL, các dung dịch mẫu được lọc qua màng lọc 0,45m.
- Dung dịch chuẩn là imatinib mesylate chuẩn - Dung dịch thử là imatinib mesylate tổng hợp
Chương trình dung môi theo Bảng 19 với Pha động A: Dung dịch pH 2,5:Methanol (420 : 580) Pha động B: Dung dịch pH 2,5:Methanol (40 : 960)
Bảng 19: Chương trình chạy dung môi HPLC Thời gian
(Phút) Pha động A Pha động B
0 100 0
17 100 0
27 30 70
27,1 100 0
35 100 0
* Tiến hành: Kiểm tra tính thích hợp của hệ thống sắc ký. Tiến hành sắc ký đối với dung dịch chuẩn. Độ lệch chuẩn tương đối của diện tích píc imatinib mesylate trong 6 lần tiêm lặp lại không quá 2,0 %. Hệ số đuôi của píc imatinib mesylat không lớn hơn 1,5. Số đĩa lý thuyết không dưới 1500. Tiến hành sắc ký đối với cả dung dịch chuẩn và dung dịch thử.
50
CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Quy trình tổng hợp imatinib mesylate đƣợc thực hiện theo hình sau:
Các sản phẩm trung gian được tổng hợp theo các quy trình đã được nghiên cứu trong phần thực nghiệm. Các điều kiện phản ứng ở mỗi bước phản ứng đã được khảo sát để đạt được hiệu suất cao nhất như các kết quả được trình bày trong các bảng từ Bảng 1 đến Bảng 18. Các điều kiện tối ưu cho mỗi bước phản ứng đã được nghiên cứu là:
* Bước I: (AcPy/DMF-DMA) (1/2, mol/mol) và lượng dung môi tương ứng 1 mol AcPy là 3,5 mL xylene.
* Bước II: (7/GuaNO3/NaOH) (1/1/1) (mol/mol/mol) trong lượng dung môi là 1 mmol tác nhân 7/12,5 mL butanol.
51
* Bước III: (21/23/CuI/DMEDA/K2CO3) (1,1/1,0/0,25/0,25/2,0) (mol/mol/mol/mol) và lượng dung môi tương ứng 1 mol chất 23 dùng 5L dioxane.
* Bước IV: tỉ lệ mol các tác nhân phản ứng là Chất 8/N2H4.H2O/FeCl3/C (1/2/0,015/1,6) (mol/mol).
* Bước V: tỉ lệ mol các tác nhân và xúc tác như: chất 9/chất a/TEA (1/0,9/2) (mol/mol/mol).
* Bước VI: Tỉ lệ mol chất 12/MPP(1/10) (mol/mol) ở 130 oC trong thời gian 1,5 giờ.
* Bước VII: tỉ lệ mol chất 2/methansulfonic acid/etanol (10/10/0,86) (mol/mol/mol) Bảng 20: Các hợp chất tổng hợp được
STT CTCT CTPT KLPT Tonc
(OC)
Hiệu suất
1 C9H9N2O 177 79-80 92
2 C9H8N4 172 188-191 85
4 C16H13N5O2 307 193-194 81
5 C16H15N5 277 139-142 87
6 C24H20ClN5O 429 266-268 87
7 C29H31N7O 493 208-210 85
8 C30H35N7O4S 589 214-224 90
52
4.1. Quy trình tổng hợp nguyên liệu đầu
4.1.1. Hợp chất 3-(Dimethylamino)-1-(pyridin-3-yl)prop-2-en-1-one (7)
Hợp chất enaminone 7 được tổng hợp từ 3-acetyl pyridine phản ứng với tác nhân DMF-DMA trong xylene đun hồi lưu, sau khi phản ứng kết thúc hỗn hợp đã được cất loại dung môi và sản phẩm phụ của phản ứng (MeOH sinh ra từ phản ứng). Các điều kiện phản ứng về tỉ lệ mol các tác nhân, lượng dung môi phản ứng đã được khảo sát, các kết quả khảo sát được trình bày trong các bảng 1 và bảng 2. Từ kết quả khảo sát đã tìm được điều kiện phản ứng cho hiệu suất cao giữa tỉ lệ mol giữa các tác nhân và dung môi là (AcPy/DMF-DMA) (1/2) (mol/mol) trong 3,5 mL xylene.
Hợp chất DMF-DMA là tác nhân hữu ích trong rất nhiều phản ứng hữu cơ, nó đóng vai trò như một tác nhân formyl hóa. Khả năng phản ứng của tác nhân này do sự tạo thành ion carbenium aza-oxo bền vững, carbenium này ngưng tụ với nhóm methylene có H-axit của acetylpyridine loại đi một phân tử MeOH. Sau đó dưới tác dụng của nhiệt hợp chất trung gian này loại tiếp đi một phân tử MeOH nữa để hình thành hợp chất enaminone 7.
Hình 4.1: Cơ chế phản ứng ngưng tụ của DMF-DMA và 3-acetyl pyridine
53
Cấu trúc hóa học của enaminone 7 đã được khẳng định bằng các phương pháp phổ.
Theo đó, phổ 1H-NMR của 7 cho các tín hiệu của 4 proton pyridine ở δ9,09(d, 1H), 8,68-8,67(m, 1H), 8,21 (1H, m); 7,37 (1H, dd), 2 proton nối đôi ngoại vòng tại δH 7,85 (d, J = 12,2 Hz, 1H) và 5,69 (d, J = 12,2 Hz, 1H) và tín hiệu của 2 nhóm N- CH3 tại δH 3,19 và 2,96. Phổ 13C-NMR cho tín hiệu của 10 cacbon hoàn toàn phù hợp cấu trúc phân tử của 7 gồm 1 tín hiệu của nhóm ketone ở δ 186 và 7 tín hiệu của cacbon vòng thơm và nối đôi tiếp đó là 2 tín hiệu của 2 nhóm methyl ở δ45 và δ 37. Phổ khối của hợp chất này cũng cho pic ion giả phân tử m/z: 177[M+H]+ phù hợp với trọng lượng phân tử chất 7.
Hình 4.2:Phổ 1H-NMR của hợp chất 7
54
4.1.2. Hợp chất 4-(Pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine (21)
Hợp chất 4-(Pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine 21 đã được điều chế bằng phản ứng đóng vòng của enaminone 7 với guanidine nitrate trong n-butanol với sự có mặt của NaOH cho phép nhận được mảng cấu trúc thứ nhất pyridinepyrimidine aminevới hiệu suất 81%.
Guanidine nitrate là dạng muối axit được hình thành từ guanidine và axit nitric, khi ở dạng muối axit phân tử bền hơn nên thường được sử dụng trong thương mại. Trong phản ứng, axit được trung hòa bởi kiềm để phân tử trở về dạng trung tính và tham gia phản ứng. Guanidine có các dạng cộng hưởng trong môi trường trung tính và môi trường axit như trong hình 4.3:
Hình 4.3: Các cấu trúc cộng hưởng của guanidine trung tính và trong axit Phản ứng đóng vòng dị tố pyrimidine xảy ra theo cơ chế cộng loại liên hợp, lưỡng nucleophile cộng hợp với lưỡng electrophile. Tác nhân nucleophile (các nhóm amine của guanidine mảng N-C-N ) tấn công vào các cacbon dương điện ái
55
electrophile của enaminone (mảng C-C-C). Một quá trình cộng loại liên tiếp xảy ra để hình thành vòng dị tố pyridinepyrimidine được trình bày trong hình 4.4:
Hình 4.4: Cơ chế phản ứng đóng vòng dị tố pyrimidine
Cấu trúc hóa học của sản phẩm đóng vòng dị tố pyridinepyrimidine amine 21 được thể trên các tín hiệu phổ NMR và phổ khối ESI-MS (Hình 12, Hình 13, Hình 14) và các số liệu phổ tại phần thực nghiệm. Trên phổ 1H-NMR của 21 cho 6 tín hiệu proton thơm của vòng pyridine và vòng pyrimidine ở δ 9,16(d, 1H), δ 8,67(dd, 1H), δ 8,37(d, 1H), từ 8,36-8,33 ppm (m, 1H) , δ 7,49(dd, 1H), và ở δ7,08(d, 1H) ngoài ra còn tín hiệu tù của nhóm amine ở 3,83 ppm. Phổ 13C-NMR của chất 21 cũng chỉ ra 9 tín hiệu của 9 cacbon của 2 vòng pyridine và vòng pyrimidine. So sánh tín hiệu phổ NMR của 7 với 21 cho thấy, tín hiệu của nhóm ketone và 2 nhóm N-methyl đã được thay thế bởi tín hiệu của 2 cacbon sp2 tại δC 163,0 và 162,9. Các tín hiệu này hoàn toàn phù hợp với sự hình thành vòng pyrimidine. Điều này đã được khẳng định bằng phổ khối lượng ESI-MS của 21 với pic ion phân tử proton hóa tại m/z 173 [M+H]+.
56
Hình 4.5: Phổ 1H-NMR của hợp chất 21 4.2. Quy trình tổng hợp các sản phẩm trung gian
4.2.1. Hợp chất N-(2-methyl-5-nitrophenyl)-4-(pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine (8)
Phản ứng N-aryl hóa của pyridinepyrimidine amine 21 với 2-bromo-1- methyl-4-nitrobenzene 23 tạo thành hợp chất trung gian chìa khóa N-(2-methyl-5- nitrophenyl)-4-(pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine 8. Phản ứng “Ullmann-kiểu” này đã
57
được cải tiến thay xúc tác Pd/C bằng xúc tác CuI và sử dụng DMEDA làm phối tử với sự có mặt của basơ K2CO3 đạt được hiệu suất đến 75%.
Cơ chế của phản ứng gồm các bước: 2-bromo-1-methyl-4-nitrobenzen 23 kết hợp với CuI tạo ra phức của đồng 23a nhờ phản ứng cộng oxi hóa. Phức 3a tách khử để tạo ra hợp chất 23b và CuBr. Hợp chất 23b và 21 cộng hợp để tạo ra hợp chất 8, đồng thời hoàn nguyên lại xúc tác CuI.
Hình 4.6: Cơ chế của phản ứng tổng hợp hợp chất 8 phản ứng “Ullmann-type”
Cấu trúc hóa học của hợp chất 8 cũng thể hiện rõ trên phổ NMR và phổ MS.
Trên phổ 1H-NMR và 13C-NMR xuất hiện thêm các tín hiệu mới của proton và cacbon của mảng kết hợp 2-methyl-5-nitrophenyl đó là sự xuất hiện thêm tín hiệu của 3 proton hệ ABX ở vùng thơm và tín hiệu nhóm methyl singlet ở vùng aliphatic. Ngoài ra, phổ khối lượng cho số khối của pic ion phân tử tại m/z 307 [M]+ phù hợp với cấu trúc của 8.
58
Hình 4.7 :Phổ 1H-NMR của hợp chất 8
Hình 4.8: Phổ MS của hợp chất 8
59
4.2.2. Tổng hợp 6-Methyl-N-(4-pyridin-3-yl)pyrimidin-2-yl)benzene-1,3-diamine (9) Hợp chất pyridinpyrimidine amine 9 thu được qua phản ứng khử nhóm nitro của hợp chất nitrophenylpyridinpyrimidin 8.
Cơ chế của phản ứng khử hóa nhóm nitro về amin sử dụng hydrazine xảy ra qua các bước: sự tấn công ái nhân của hydrazine lên nguyên tử N của nhóm nitro tạo thành 1-hydroxy-1-aryltriazane1-oxide, tiếp theo sự tấn công của anion HO-vào hợp chất triazane oxide này hình thành hợp chất trung gian nitroso, giải phóng diazene và H2O. Phân tử hydrazine thứ hai tấn công vào chất trung gian nitroso cho ta 1-hydroxy-1-aryltriazane và chuyển sang dạng aniline, giải phóng N2 và H2O [28]
Hình 4.9: Cơ chế khử hóa nhóm nitro về amin bằng hidrazine
60
Cấu trúc hóa học của pyridinpyrimidine amine 9 được khẳng định bằng các phương pháp phổ. Theo đó, phổ 1H-NMR 9 được đo trongDMSO-d6 xuất hiện thêm tín hiệu của 2 proton amine dưới dạng một singlet tù ở δH 4,90, phù hợp với sự có mặt của nhóm NH2. Tín hiệu singlet của 3 proton của CH3-Ph ở δH 2,08, ở trường thấp hơn là các tín hiệu của 3 proton thơm H-Ph ở δH 6,36, (dd), δH 6,83(d) và δH 6,88(d). Ở trường thấp hơn nữa là 6 tín hiệu của 6 proton mảng pyridinpirimidine từ 6,83-9,26 ppm. Phổ 13C-NMR cho tín hiệu của nhóm methyl ở δc 17,23 và 15 cacbon ở vùng trường thơm của nhân phenyl và pyridinpirimidine phù hợp với số cacbon trong phân tử. Đồng thời phổ khối lượng (ESI negative) của 9 cho pic ion giả phân tử tại m/z 276 [M-H]- phù hợp cấu trúc phân tử dự kiến.
Hình 4.10: Phổ IR của chất 9
4.2.3. Tổng hợp 4-(Chloromethyl)-N-(4-methyl-3-(4-(pyridin-3-yl)pyrimidin-2- ylamino)phenylbenzamide (12)
Hợp chất pyridinpyrimidinphenylbenzamide methyl chloride 12 thu được qua phản ứng kết hợp của amine 9 với tác nhân chloride acid a.
61
Phản ứng xảy ra theo cơ chế cơ chế cộng loại nucleophin: đôi điện tử tự do của Nitơ tấn công ái nhân vào cacbon dương điện của nhóm chloride acid (COCl) đồng thời loại ra 1 phân tử axit HCl. HCl sinh ra được trung hòa bởi bazơ có mặt trong phản ứng như triethylamine hay các base bất kỳ nào khác. Tuy nhiên để tránh phản ứng đề HCl của nhóm ankylchloride phản ứng được tiến hành ở nhiệt độ thấp 0oC và sử dụng xúc tác êm dịu là TEA.
Hình 4.11: Cơ chế cộng loại nucleophile của phản ứng tạo 12
Cấu trúc hóa học của pyridinpyrimidine amine 12 được khẳng định bằng các phương pháp phổ. Phổ 1H-NMR của 5 đã cho thấy sự xuất hiện thêm các tín hiệu của 4 proton thơm hệ A2B2 tại δH 7,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H) và 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H) và tín hiệu của nhóm methylene tại δH 4,84 (s, 2H) của mảng benzyl kết hợp ngoài 15 tín hiệu proton của mảng phenylpyridinpirimidine. Phổ 13C-NMR cho tín hiệu của nhóm methyl ở δc 17,62, nhóm methylene ở δc 45,43 và 21 cacbon của hệ thơm và cacbon amide phù hợp số cacbon trong phân tử. Đồng thời phổ khối lượng (ESI negative) của 12 cho pic ion giả phân tử tại m/z 428 [M-H]- phù hợp cấu trúc phân tử dự đoán.
62
Hình 4.12: Phổ 13C của hợp chất 12 4.3. Quy trình amine hóa điều chế imatinib base (2)
Phản ứng của ankyl halide 12 với methylpiperazine xảy ra theo cơ chế thế nucleophile lưỡng phân tử, phân tử methylpiperazine thế nguyên thử clo của ankylchloride 12. Do độ âm điện cao của nguyên tử clo làm nguyên tử cacbon của nhóm methylen dương điện. Đôi điện tử tự do của nguyên tử nitơ trong phân tử methylpiperazine tấn công ái nhân vào cacbon dương điện của nhóm methylene
Hình 4.13: Cơ chế phản ứng nucleophile lưỡng phân tử
63
Axit HCl giải phóng ra trong phản ứng được trung hòa bởi chính tác nhân methylpiperazine vì thế phản ứng thường được tiến hành với lượng dư của tác nhân methyl piperazine.
Cấu trúc hóa học của imatinib base (2) được khẳng định bằng các phương pháp phổ. Phổ 1H NMR của 2 xuất hiện thêm các tín hiệu mới của nhóm N-methyl tại δH 2,14 (s, 3H) và 8 proton của vòng piperazine tại δH 2,28 - 2,45 so với hợp chất 12. Các tín hiệu proton thơm của 3 mảng pyridinpirimidine, methylphenyl và benzylamide của chất 2 ít thay đổi. Phổ 13C-NMR cho 5 tín hiệu mới của 5 cacbon mảng methylpiperazine ở δc 45, δc 68, δc 52,53, δc 54,66. Tổng số tín hiệu cacbon phù hợp với số cacbon trong phân tử. Phổ khối tử ESI-MS của 2cho pic ion giả phân tử tại m/z 494[M+H]+ phù hợp với cấu trúc phân tử đề nghị.
Hình 4.14: Phổ 1H của hợp chất 2
64
Hình 4.15: Phổ HMBC của chất 2
65
Hình 4.16: Phổ MS của chất 2 4.4. Quy trình tạo muối imatinib mesylate (3)
Phản ứng tạo muối imatinib mesylate được tiến hành trong dung môi EtOH nhằm tránh độc hại cho người lao động cũng như tồn dư của dung môi trong sản phẩm.
Cấu trúc hóa học của imatinib mesylate (3) được khẳng định bằng các phương pháp phổ. Phổ 1H NMR của 3 xuất hiện thêm các tín hiệu mới của nhóm CH3SO3H tại δH 3,45. Tổng số tín hiệu cacbon phù hợp với số cacbon trong phân tử.
66
Phổ khối tử ESI-MS của 3 cho pic ion giả phân tử tại 590 [M+H]+, 612 [M+Na]+ phù hợp với cấu trúc phân tử đề nghị.
Hình 4.17: Phổ MS của chất 3 4.5. Việc tinh chế imatinib base
Độ tinh khiết của sản phẩm muối imatinib mesylate phụ thuộc vào độ tinh khiết của chất đầu imatinib base. Vì vậy để thu được mesylate có độ tinh khiết cao thì việc tinh chế imatinib base giữ vai trò quyết định. Imatinib base thu được từ phản ứng đun hồi lưu của một ankyl halogene 4-(chloromethyl)-N-(4-methyl-3-(4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-ylamino)phenylbenzamide với methylpiperazine ở nhiệt độ cao có màu vàng nhạt được xử lý với than hoạt tính đã cho sản phẩm màu trắng hơn. Nhiều phương pháp tinh chế imatinib base đã được công bố dưới dạng patent sử dụng một số dung môi và tác nhân độc hại khác như toluene, dichloromethane, pyridin, và NH3 [6-8]. Chúng tôi đã nghiên cứu sử dụng 2 dung môi không độc hại, thông dụng, giá thành thấp, được sử dụng nhiều trong dược phẩm là etanol và isopropanol cho cả bước tinh chế chất trung gian imatinib base và điều chế muối imatinib mesylate.
67
4.6. Hàm lƣợng imatinib mesylate theo kết quả HPLC
Dung dịch thử (chế phẩm) cho sắc ký đồ HPLC như trong hình 4.18
Hình 4.18: Sắc ký đồ HPLC của imatinib mesylate
Trên sắc ký đồ HPLC của mẫu thử ta thấy sản phẩm imatinib mesylate được điều chế có hàm lượng rất cao. Hàm lượng (%) của imatinib mesylate, tính theo chế phẩm khan, được tính theo công thức:
X(%) =
) 100 (
100 100 100
a m
S C S
t c t
Trong đó:
St: Diện tích píc imatinib mesylate trên sắc đồ dung dịch thử Sc: Diện tích píc imatinib mesylate trên sắc đồ dung dịch chuẩn C: Nồng độ imatinib mesylate trong dung dịch chuẩn (mg/ml) mt: Lượng cân mẫu thử (mg)
a: Hàm lượng nước trong mẫu thử (%)
Phép đo được tiến hành 3 lần cho kết quả như trong bảng 20 Bảng 20: Hàm lượng imatinib mesylate trong mẫu thử