CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2. Phương pháp bố trí thí nghiệm
2.2.1. Xác định các thông số cho quá trình trích ly Anthocyanin từ gạo đen
Nghiên cứu sử dụng phương pháp thực nghiệm. Quy trình trích ly Anthocyanin bao gồm các bước chủ yếu là trích ly Anthocyanin trong dung môi ở những điều kiện thích hợp sau đó lọc và thu dịch. Các nội dung thí nghiệm chủ yếu được thể hiện trong sơ đồ hình bên dưới.
- Bình tam giác.
- Pipet.
- Giấy lọc.
- Ống ly tâm
Xác định tỷ lệ H2O:EtOH để pha dung môi thích hợp cho quá trình trích ly anthocyanin từ gạo đen
Gạo đen
Xác định tỷ lệ nguyên liệu và dung môi thích hợp cho quá trình trích ly anthocyanin từ gạo đen
Xác định nhiệt độ thích hợp cho quá trình trích ly anthocyanin từ gạo đen
Xác định thời gian thích hợp cho quá trình trích ly anthocyanin từ gạo đen
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình tóm tắt nội dung thí nghiệm khảo sát các thông số trích ly
2.2.1.1. Xác định tỷ lệ dung môi Nước-EtOH trong quá trình trích ly
Hình 2.2. Bố trí thí nghiệm xác định tỷ lệ H2O: Ethanol trong pha chế dung
4000 rpm 15 phút
Cặn
Nhiệt độ :60oC Thời gian 60 p TLNL: 1:10
(w:w)
Trích ly
Dung môi H2O:EtOH
Lọc
Ly tâm Thu dịch
Gạo đen
Nghiền, rây qua lỗ rây kích thước 0,25mm
TL 5:5 TL 4:6 TL 2:8 TL 1:9
TL 3:7
Chọn tỷ lệ H2O:EtOH thích
hợp
Xác định hiệu suất thu hồi anthocyanin
Gạo đen được nghiền nhỏ sau đó rây qua sàng rây kích thước lỗ rây là 0,25mm.
Dung môi H2O:EtOH ở những tỷ lệ 1:9; 2:8; 3:7; 4:6; 5:5 , đã được chuẩn bị ở nhiệt độ 600C. Sau đó cho gạo đã được cân sẵn với tỷ lệ 1:10 (w:w), cho vào trong các bình chắn sáng chứa dung môi. Cứ 10 phút khuấy đảo hỗn hợp. Quá trình trích ly giữ ổn định nhiệt độ ở 600C trong bể ủ nhiệt thời 60 phút, sau đó đem hỗn hợp đi lọc để loại bỏ cặn thu được phần dịch trong, phần dịch này sau đó đem ly tâm trong vòng 15 phút với tốc độ 4000 rpm, để loại bỏ số cặn nhỏ trong dịch. Cuối cùng sử dụng phương pháp vi sai để xác định hàm lượng Anthocyanin. Tính được hiệu suất thu hồi sau đó sẽ chọn tỷ lệ dung môi thích hợp nhất.
2.2.1.2 Xác định tỷ lệ nguyên liệu tấm trong dịch trích ly
Gạo đen được nghiền nhỏ sau đó rây qua sàng rây kích thước lỗ là 0,25mm. Kết quả tỷ lệ dung môi ở thí nghiệm 1 đã được chuẩn bị ở nhiệt độ 600C. Sau đó cho gạo đã được cân sẵn với các tỷ lệ gạo và dung môi 1:6; 1:8; 1:10; 1:12, cho nguyên liệu vào trong các bình chắn sáng chứa dung môi, cứ 10 phút khuấy đảo 3 vòng. Nhiệt độ trích ly luôn giữ ổn định ở 600C trong bể ủ nhiệt trong vòng 60 phút, sau đó đem dịch đi lọc để loại bỏ cặn thu dịch sau đó đem ly tâm trong vòng 15 phút, số vòng là 4000rpm để loại bỏ số cặn nhỏ trong dịch. Cuối cùng sử dụng phương pháp vi sai để xác định hàm lượng Anthocyanin. Tính được hiệu suất thu hồi sau đó sẽ chọn tỷ lệ dung môi thích hợp nhất.
Cặn
Thời gian 60p
Nhiệt độ: 600 Trích ly
Dung môi H2O:EtOH 4:6
(v:v) Lọc
Ly tâm Thu dịch Gạo đen
Nghiền, rây qua lỗ rây kích thước 0,25mm
TLNL:1:12w/w TLNL:1:8w/w TLNL1:6 w/w
TLNL:1:10 w/w
4000rpm 15 phút
Hình 2.3. Bố trí thí nghiệm xác định tỷ lệ nguyên liệu và dung môi thích hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen.
Xác dịnh hiệu suất thu hồi anthocyanin
Chọn tỷ lệ nguyên liệu
2.2.1.3. Xác định nhiệt độ thích hợp để trích ly Anthocyanin từ gạo đen
Gạo đen được nghiền nhỏ, rây qua sàng rây kích thước lỗ là 0,25 mm. Kết quả tỷ lệ dung môi ở thí nghiệm 1 đã được chuẩn bị ở những nhiệt độ khảo sát 400C, 500C, 550C, 600C, 650C, 700C. Sau đó cho gạo đã được cân sẵn với kết quả ở thí nghiệm 2 vào trong các bình chắn sáng chứa dung môi, cứ 10 phút khuấy đảo 3 vòng. Thời gian trích ly trong vòng 60 phút, sau đó đem dịch đi lọc để loại bỏ cặn thu dịch sau đó đem ly tâm trong vòng 15 phút, 4000 rpm để loại bỏ số cặn nhỏ trong dịch. Cuối cùng sử dụng phương pháp vi sai để xác định hàm lượng Anthocyanin, tính hiệu xuất trích ly Anthocyanin và chọn ra được nhiệt thích hợp nhất để trích ly.
Cặn
Thời gian 60 p TLNL:1:8 (w:w)
Trích ly
Dung môi H2O:EtOH 4:6
(v:v) Lọc
Ly tâm Thu dịch Gạo đen
Nghiền, rây qua lỗ rây kích thước 0,25mm
600 500 400
550
4000rpm 15 phút
Tính hiệu suất thu hồi anthocyanin 650
700
Chọn nhiệt độ trích ly
2.1.2.4. Xác định thời gian thích hợp trích ly Anthocyanin từ gạo đen.
Cặn
Nhiệt độ 600C TLNL:1:8 (w:w)
Trích ly
Lọc
Ly tâm Thu dịch
Gạo đen
Nghiền, rây qua lỗ rây kích thước 0,25mm
150 phút 90 phút 60 phút
120 phút
4000rpm 15 phút
Hình 2.5. Bố trí thí nghiệm xác định thời gian thích hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen
Xác định hiệu suất thu hồi anthocyanin
Dung môi H2O:EtOH 4:6
(v:v)
Chọn thời gian trích ly
Gạo đen được nghiền nhỏ, sau đó rây qua sàng rây có kích thước lỗ là 0,25mm.
Kết quả tỷ lệ dung môi ở thí nghiệm 1 đã được chuẩn bị ở nhiệt độ khảo sát thí nghiệm 3. Sau đó cho gạo đã được cân sẵn với kết quả ở thí nghiệm 2 vào trong các bình chắn sáng chứa dung môi. Nhiệt độ trích ly luôn giữ ổn định ở kết quả thí nghiệm 3, trong các khoảng thời gian khoảng sát từ 1h đến 3h, cứ 10 phút khuấy đảo 3 vòng. Sau đó đem dịch đi lọc để loại bỏ cặn thu dịch sau đó đem ly tâm trong vòng 15 phút với 4000rpm để loại bỏ số cặn nhỏ trong dịch. Cuối cùng sử dụng phương pháp vi sai để xác định hàm lượng Anthocyanin, tính hiệu xuất trích ly Anthocyanin. Từ đó chọn được nhiệt độ thích hợp để trích ly.