1. Cơ cấu tổ chức, trang thiết bị Khoa xét nghiệm viện Da liễu Trung ương
3.2.4 Nuôi cấy định danh là làm kháng sinh đồ
Mục đích : xác định căn nguyên gây bệnh và tìm ra kháng sinh phù hợp để định hướng điều trị cho bệnh nhân.
Quy trình:
o Bệnh phẩm : lấy tương tự như cách lấy bệnh phẩm trong nhuộm soi.
Thường thì xét nghiệm nuôi cấy sẽ đi kèm với chỉ định nhuộm soi.
o Sau khi lấy bệnh phẩm cấy lên 2 môi trường đó là thạch máu(tủ ấm thường) và thạch socola ( thạch socola để tủ ấm 37ºC, 5 – 7 % CO2).
Đọc kết quả sau 18 – 24h.
o Sau khi khuẩn lạc đã mọc tiến hành đọc các tính chất của khuẩn lạc như màu sắc, hình dáng, kích thước, mùi. Trên thạch máu có thể đọc tính chất tan máu...
o Thường thì ở viện Da Liễu chủ yếu gặp lậu cầu là nhiều nên làm các test định danh cũng hướng đến lậu cầu, đó là test oxidase và test phân hủy đường nhanh.
Ghi tên tuổi bệnh nhân, đánh mã số vào phiếu xét nghiệm, test thử bệnh phẩm.
Lấy các test hoá học ra để ở nhiệt độ phòng từ 10 - 15 phút
Test oxidase: lấy một đầu ăng khuẩn lạc đã được làm thuần khiết sau 18 - 24h cho lên miếng giấy thấm, và nhỏ 1 giọt oxidase lên bề mặt khuẩn lạc. Nếu khẩn lạc chuyển sang màu đen là dương tính.
Test phân huỷ đường nhanh: để test thử ở nhiệt độ phòng khoảng 15phút trước khi thử nghiệm.
- Lấy một đầu ăng khuẩn lạc đã được làm thuần khiết sau 18 - 24h hoà vào lọ Suspension medium (có sẵn trong hộp test)
- Dùng ống hút nhựa hút canh khuẩn đó nhỏ vào các giếng trên test thử: CONT NEG - GLU - MAL - FRU - SAC mỗi giếng 100àl
- Phủ các giếng bằng phiến nhựa (có sẵn trong bộ test) - Đặt test thử vào tủ ấm 35 - 36oC
- Sau 4h đọc kết quả.
Test oxidase
Test phân huỷ đường nhanh (Neisseria - 4H)
o Các căn nguyên vi khuẩn khác sau khi nuôi cấy trên thạch máu ( vì bắt được hầu hết vi khuẩn) sẽ chọn khuẩn lạc nghi ngờ và cấy lên môi trường Uriselect. Đây là một môi trường có các chất chỉ thị màu và khi vi khuẩn mọc lên thì sẽ có màu đặc trung cho từng loại từ đó có thể dễ dàng định danh vi khuẩn.
Thạch Uriselect
Khuẩn lạc màu hồng đỏ là của E.coli, màu xanh da trời là của Enterococus faecalis, màu xanh nước biển là của Klebsiella.
Kháng sinh đồ: sau khi đã định danh được vi khuẩn, tiến hành kamf kháng sinh đồ để đánh giá độ nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh
o Với vi khuẩn lậu: cấy trên môi trường thạch Thayer Martin
Hút 2ml nước muối sinh lý 0,9% vào tube thuỷ tinh vô khuẩn
Lấy khuẩn lạc đã được làm thuần khiết 18 - 24h hoà đều với nước muối sinh lý, so với độ đục tiêu chuẩn Mc Farland.
Dùng pipette Pasteur hút canh khuẩn láng đều lên bề mặt đĩa thạch, hút bỏ canh khuẩn thừa trên bề mặt đĩa thạch.
Để khô mặt thạch KSĐ ở nhiệt độ phòng.
Đặt các khoanh giấy kháng sinh lên mặt đĩa thạch, đặt 6 khoanh giấy trên 1 đĩa, khoanh giấy cách thành đĩa thạch 2cm.
Để khoảng 10 phút ở nhiệt độ phòng cho kháng sinh khuyếch tán đều.
Đặt đĩa thạch đã đặt khoanh giấy KSĐ vào chuông, sau 18 - 24h đọc kết quả.
o Vi khuẩn khác: làm tương tự như lậu nhưng sẽ lựa chọn môi trường là thạch Muller Hilton và chỉ cần đặt vào tủ ấm thường.
o Nhận định kết quả và báo cáo
Đo đường kính vùng ức chế, kết quả tính bằng mm và so với bảng chuẩn,phân loại độ nhạy cảm của chủng vi khuẩn lậu thành 3 mức trên cơ sở so sánh với bảng chuẩn:
S (Susceptible) : nhạy cảm I (Intermediate) : trung gian R (Resistant) : đề kháng
Ghi kết quả đó vào sổ lưu kết quả và giấy trả kết quả cho bệnh nhân.
Kháng sinh đồ thạch Muller Hilton Kháng sinh đồ vi khuẩn lậu
3.2.5 Các xét nghiệm khác
Tại đây còn làm một số xét nghiệm như ngưng kết Latex tìm kháng thể kháng Liên cầu, xét nghiệm rạch da tìm vi khuẩn phong, nuôi cấy Mycoplasma trên bộ kit thử.
Nuôi cấy Mycoplasma
Trong suốt thời gian đi thực tập tại phòng vi sinh, em đã có cơ hội trực tiếp tham gia vào quá trình nhuộm soi bệnh phẩm, soi và nhận định tiêu bản, làm test Chlamydia. Ngoài ra, e còn được kiến tập cách lấy bệnh phẩm đường sinh dục, bệnh phẩm rạch da, cách anh chị nuôi cấy,định danh và làm kháng sinh đồ.