Phần 4. Kết quả nghiên cứu và thảo luận
4.2.2. Kết quả giám định một số đặc tính sinh vật, hóa học của các chủng
Tất cả các chủng Salmonella spp phân lập được sau khi đã nhận định sơ bộ những đặc điểm đặc trưng về hình thái, tính chất nuôi cấy trên các môi trường. Để có cơ sở đánh giá và định serotype, chúng tôi tiến hành nghiên cứu những đặc tính sinh vật, hóa học của chúng trên các môi trường giám định.
Kết quả cho thấy 100% chủng Salmonella spp nghiên cứu đều mọc và phát triển tốt trên các môi trường với những đặc điểm như sau:
- Môi trường XLD: Vi khuẩn Salmonella spp hình thành khuẩn lạc kích thước nhỏ, đường kính trung bình 0,5-1,5 mm, màu đen, trên nển môi trường màu sáng đỏ (hình 4.8)
Hình 4.4. Salmonella trên môi trường XLD
- Môi trường HE: Vi khuẩn Salmonella hình thành khuẩn lạc có màu thay đổi từ xanh dương đến xanh lục, có hay không có tâm đen, đôi khi tâm đen quá lớn bao trùm khuẩn lạc (hình 4.9)
- Trên môi trường TSI: Các chủng Salmonella làm mặt thạch nghiêng chuyển màu đỏ, đáy màu vàng hoặc màu đen (sản sinh H2S) (hình 4.10)
Kiểm tra hình thái, khả năng di động, tính chất bắt màu, đặc tính sinh vật, hoá học của 22 chủng Salmonella spp phân lập từ mẫu phân gà thịt trên một số môi trường được trình bày ở bảng 4.4
Hình 4.5. Salmonella trên môi trường HE
Hình 4.6. Salmonella trên môi trường TSI và Lysine
Qua kết quả bảng 4.3 và 4.4 cho thấy, 100% các chủng Salmonella spp phân lập đều là trực khuẩn, bắt màu Gram âm, có khả năng di động. Tất cả các chủng Salmonella spp phân lập đều có đặc tính sinh hoá như: sinh H2S (trên môi trường TSI), không sản sinh indole, phản ứng VP, β-galactosidase và ureaza đều cho kết quả âm tính, phản ứng Lysine decarboxylase dương tính (khử carboxyl của Lysine thành Cadaverin C5H14N2 làm cho môi trường có tính kiềm, chỉ thị Bromocresol từ màu hồng chuyển thành màu tím.
Bảng 4.4. Đặc tính sinh vật, hoá học của các chủng Salmonella spp phân lập từ mẫu phân gà thịt trên một số môi trường
STT Môi trường nuôi cấy
1 Hình thái
2 Nhuộm màu
3 Di động
4 TSI
5 Indole
6 VP
7 Ureaza
8 Lysine decarboxylase
9 β-galactosidase
Bảng 4.5. Biểu hiện đặc trưng của Salmonella trong các phản ứng sinh hóa Thử nghiệm Môi trường Biểu hiện đặc trưng
Phần thạch nghiêng màu đỏ, đáy
2S TSI ống nghiệm màu vàng, nứt thạch và xuất hiện vạch đen
VP VP
Indole Tryptophan
Ureaza Urea
Lysine Lysine decarboxylation decarboxylase medium β-
galactosidase Đĩa giấy O.N.P.G
Không đổi màu khi nhỏ α – napthol 5% và KOH 40%
Không xuất hiện vòng đỏ khi nhỏ thuốc thử Kovac’s Không đổi màu
Môi trường đục và có màu tím Không đổi màu
Hình 4.7. Các phản ứng sinh hóa vi khuẩn Salmonella
(TSI/ β-galactosidase/ Lysine decarboxylase / VP/ Ureaza/ Indole) Song song với quá trình kiểm tra các đặc tính sinh vật, hóa học trên các môi trường đặc hiệu chúng tôi đã tiến hành thử các phản ứng lên men đường của các chủng Salmonella phân lập được. Kết quả trình bày bảng 4.6.
Bảng 4.6. Kết quả thử phản ứng lên men đường của các chủng Salmonella phân lập
Loại đường
Glucose Maltose Mannitol Dextrose Sorbitol Lactose Sucrose Salicin
Từ kết quả trên chúng tôi thấy rằng 22/22 (100%) các chủng Salmonella phân lập được từ mẫu phân gà thịt có khả năng lên men các loại đường: glucose, dextrose, maltose, mannitol, sorbitol. Vi khuẩn không có khả năng lên men các loại đường sau: lactose, sucrose và salicin.
Kết quả của chúng tôi phù hợp với thang mẫu các loại đường sử dụng trong phân lập chẩn đoán Salmonella do Quinn và cộng sự (1994) đề xuất. Kết quả thử phản ứng lên men đường cũng thể hiện những đặc tính chung nhất của giống Salmonella như Nguyễn Thị Ngọc Liên (1997), Đặng Thị Oanh (2013) đã công bố.
Tất cả các chủng Salmonella spp phân lập được đều có những đặc tính sinh vật, hóa học điển hình phù hợp với tiêu chuẩn để nhận định vi khuẩn Salmonella của Carter và Cole (1990), Nguyễn Như Thanh và cộng sự (2001). Từ kết quả ban đầu này cho phép tiếp tục các nghiên cứu tiếp theo về vi khuẩn Salmonella.
Hình 4.8. Hình ảnh vi khuẩn Salmonella trên kính hiển vi
4.3. KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH SEROTYPE CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN SALMONELLA SPP PHÂN LẬP
22 chủng Salmonella spp thể hiện các đặc tính sinh vật, hoá học điển hình để xác định serotype của các chủng vi khuẩn này bằng phương pháp huyết thanh học. Trên cơ sở phân loại của White-Kauffman (WHO, 1983), tiến hành xác định nhóm vi khuẩn Salmonella spp phân lập theo hướng dẫn của hãng Remel.
Kết quả được trình bày ở bảng 4.7.
Kết quả định type kháng nguyên O theo nhóm cho thấy, các chủng Salmonella spp phân lập được từ mẫu phân gà thịt nuôi ở các trang trại tại khu vực Hà Nội thuộc nhóm E1 là cao nhất, chiếm tỷ lệ 12/22 (54,55%), sau đó là nhóm D1, chiếm tỷ lệ 8/22 (36,36%) và 2/22 (9,09%) không xác định được nhóm. Như vậy, các chủng Salmonella phân lập được từ mẫu phân gà thịt tại khu vực Hà Nội chủ yếu thuộc 2 nhóm E1 và D1.
Bảng 4.7. Kết quả xác định nhóm kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn Salmonella spp phân lập (n=22)
Nhóm huyết thanh O đa giá O đơn giá
E1 D1 Ghi chú: (-) = Không xác định được cấu trúc kháng nguyên
Biểu đồ 4.3 Kết quả xác định nhóm huyết thanh Salmonella spp
Âm tính Dương tính
Hình 4.14. Phản ứng ngưng kết giữa Salmonella với kháng huyết thanh O đa giá
Sau khi xác định nhóm huyết thanh của các chủng Salmonella bằng kháng huyết thanh O đơn giá, chúng tôi tiến hành tiếp bằng kháng huyết thanh H pha 1
và pha 2 để xác định serotype vi khuẩn Salmonella phân lập. Kết quả được trình bày ở bảng 4.8.
Bảng 4.8. Kết quả xác định serotype của các chủng vi khuẩn Salmonella spp phân lập (n=22) Kháng nguyên H
Thành phần pha 1 g, m
e, h g, m g, m, s -
Kết quả ở bảng 4.8 cho thấy, trong 22 chủng Salmonella spp nghiên cứu, có 8 chủng thuộc nhóm D1 là Salmonella enteritidis chiếm tỷ lệ 36,36%; có 5 chủng thuộc nhóm E1 là S. meleagridis chiếm tỉ lệ 22,73%, có 4 chủng (18,18%) là S.
suberu và 3 chủng (13,64%) là S. amsterdam.
Biểu đồ 4.4 Kết quả định chủng Salmonella từ mẫu phân gà thịt tại khu vực Hà Nội
Qua kết quả nghiên cứu cho thấy, hiện nay chủng S. enteritidis đang là chủng Salmonella có tỉ lệ lưu hành cao nhất tại các trang trại gà thịt tại khu vực Hà Nội, sau đó là chủng S. meleagridis chiếm tỷ lệ 22,73%.
Theo Nguyễn Thị Ngọc Liên (1997), khi nghiên cứu các đặc điểm dịch tễ của bệnh phó thương hàn vịt ở tỉnh Hà Tây cho biết có sự xuất hiện nhóm E1 12.5% (trong đó có S. amsterdam), nhóm D1 18.75% đại diện chính là S.
enteritidis. Khi nghiên cứu tỷ lệ nhiễm Salmonella ở gà thịt giết mổ theo 2 hình thức công nghiệp và thủ công, Trần Thị Hanh và cộng sự (2009) thông báo vi khuẩn S. enteritidis xuất hiện ở cả 2 hình thức giết mổ. Trần Ngọc Bích (2012), phát hiện S. enteritidis trên mẫu thân thịt và mẫu phân khi nghiên cứu trên thủy cầm tại tỉnh Hậu Giang. Nguyễn Viết Không và cộng sự (2012) phát hiện S.
enteritidis tại các điểm giết mổ gia cầm quy mô nhỏ tại các huyện ngoại thành Hà Nội. Sự phát hiện Salmonella ở 5 khâu của chuỗi sản xuất (Phạm Thị Ngọc và cộng sự, 2015) là kết quả đáng báo động về vấn đề nhiễm Salmonella. Kết quả nghiên cứu có sự tương đồng với các tác giả về các serotye Salmonella chính gây bệnh trên gà. Hai chủng Salmonella quan trọng gây ngộ độc thực phẩm ở người là S. enteritidis và S. typhimurium. Như vậy, việc phát hiện S. enteritidis trong các mẫu nghiên cứu là cơ sở khoa học để đề ra các biện pháp phòng ngừa, đưa ra các giải pháp làm giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm Salmonella. Thịt gà, trứng gà bị nhiễm Salmonella sẽ làm ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm (thịt, trứng), cũng như ảnh hưởng không nhỏ đến sức khỏe của người tiêu dùng.
Tỷ lệ nhiễm Salmonella trong nghiên cứu này là 18,33%, điều này cho thấy quá trình chăn nuôi gà thịt chưa thực sự kiểm soát tốt vấn đề Salmonella. Tỷ lệ nhiễm Salmonella theo chuỗi sản xuất từ cơ sở gà giống bố mẹ, cơ sở ấp trứng, trang trại gà, cơ sở giết mổ và điểm tiêu thụ lần lượt là 32,8%, 11%, 32,08%, 43,3%, 36,9% (Phạm Thị Ngọc và cộng sự., 2015). Các đàn gà thịt được nuôi tại các trang trại có quy mô lớn sẽ là nguồn cung cấp cho các điểm giết mổ hoặc các nhà máy chế biến thực phẩm. Như vậy, nếu quá trình chế biến giết mổ không được kiểm soát chặt chẽ sẽ là nguy cơ gây nhiễm Salmonella vào thịt gà.
Theo tiêu chuẩn Việt Nam số 7046/2002 QĐ-Bộ Y tế, không được phép có vi khuẩn Salmonella trong 25 gram mẫu thịt sản phẩm. Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella qua khảo sát là khá cao và đặc biệt còn có sự hiện diện của chủng S.
enteritidis (chiếm 36, 36% trong các chủng phân lập), điều này cho thấy nếu không được kiểm soát tốt ở khâu vận chuyển, giết mổ và tiêu thụ có thể sẽ là nguồn quan trọng truyền lây vi khuẩn Salmonella cho người tiêu dùng. Vì thế, cần có một quy trình giết mổ hợp lý và bố trí việc bày bán thịt gia cầm nơi sạch sẽ, khô ráo, góp phần đáng kể trong việc phòng ngừa vấy nhiễm vi khuẩn
Salmonella vào thân thịt gà, từ đó giúp hạn chế ngộ độc thực phẩm do vi khuẩn Salmonella gây ra cho con người.