Phương pháp phân tích trong phòng thí nghiệm

II. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

II.2. Phương pháp nghiên cứu

II.2.2. Phương pháp phân tích trong phòng thí nghiệm

Nguyên tắc: trong môi trường axit, clo hoạt động trong nước javen có thể tác dụng một cách định lượng với iodua giải phóng ra iot nguyên tố (trong môi trường kiềm phản ứng xảy ra không hoàn toàn). Chuẩn độ lượng iot giải phóng ra bằng dung dịch natri thiosunfat đã biết nồng độ sẽ tính được nồng độ clo hoạt động trong dung dịch.

Cl2 + 2KI 2KCl + I2

I2 + 2Na2S2O3Na2S4O6

Tiến hành: Ủ ấm bình cấy máu trong điều kiện:

16 - Nhiệt độ: 35 - 37C

- Khí trường: Bình thường.

- Thời gian: 1 - 7 ngày.

Quan sát bình cấy máu: Hàng ngày quan sát bình cấy máu. Nếu có sự phát triển của vi sinh vật, chúng sẽ làm thay đổi môi trường canh thang và được quan sát bằng mắt thường. Nhận định sơ bộ vi sinh vật phát triển trong bình canh thang:

- Staphylococcus aureus thường mọc thành hạt nhỏ đều và có màng dù ở bề mặt.

- Streptococci thường mọc lắng cặn ở đáy, thành bình như những cục bông hoặc mẩu bánh vụn. - Các trực khuẩn Gram âm khi mọc làm canh thang đục đều (trừ Salmonella canh thang vẫn có thể trong, vi khuẩn tạo thành một lớp trắng bên trên đáy bình).

- Pseudomonas spp. mọc có váng như váng dưa, canh thang đục, đôi khi có bọt.

Cấy chuyển bình cấy máu dương tính và ủ ấm:

- Lắc đều bình canh thang.

- Dùng bơm tiêm hút khoảng 0,5 mL canh thang.

- Nhỏ 1 giọt máu lên lam kính sạch, để khô, cố định rồi nhuộm Gram. Nhận định sơ bộ hình thái, cách sắp xếp, tính chất bắt màu của vi khuẩn.

- Cấy chuyển máu sang môi trường BA, CA, SAB và chrom agar.

Dùng que cấy vô trùng ria đều khắp bề mặt thạch để tạo khuẩn lạc (khóm) riêng rẽ. - Ủ ấm: + Ủ ấm môi trường BA, CA ở nhiệt độ 35 - 37C trong tủ ấm CO2/ qua đêm. + Ủ ấm môi trường chromagar ở nhiệt độ 35 - 37C trong

17

tủ ấm thường/ qua đêm. + Ủ ấm thạch SAB ở tủ ấm 25-30C/ qua đêm Cấy chuyển “mù” bình cấy máu âm tính sau ủ ấm 4-7 ngày.

- Lắc đều bình canh thang. 89 - Dùng bơm tiêm hút khoảng 0,5 mL canh thang. - Cấy chuyển máu sang môi trường BA, CA. Dùng que cấy vô trùng ria đều khắp bề mặt thạch.

- Ủ ấm thạch BA, CA ở nhiệt độ 35 - 37C trong tủ ấm CO2/ qua đêm.

Đọc đĩa thạch sau ủ ấm:

- Quan sát bằng mắt thường sự phát triển của vi sinh vật sau 24 giờ trên tất cả các đĩa và canh thang.

- Nếu thấy vi sinh vật phát triển:

+ Thông báo ngay cho bác sĩ về kết quả chẩn đoán sơ bộ vi sinh vật dựa vào kết quả nhuộm Gram và hình thái khuẩn lạc (khóm).

+ Tiến hành định danh vi sinh vật.

- Nếu không thấy vi sinh vật phát triển, tiến hành nhuộm Gram lại bình cấy máu để định hướng tìm nguyên nhân và khắc phục. Định danh vi khuẩn và thực hiện kháng sinh đồ:

- Định danh tất cả các vi sinh vật phát triển trên môi trường. Xác định chi và loài của các tác nhân gây bệnh trong vòng 2 giờ sau khi quan sát thấy khuẩn lạc (khóm):

+ Nhuộm Gram khuẩn lạc (khóm).

+ Quan sát hình thái khuẩn lạc (khóm).

18

+ Xác định tính chất sinh vật hóa học của vi sinh vật bằng bộ sinh vật hóa học, máy định danh tự động/Hoặc định danh vi sinh vật bằng máy định danh khối phổ.

+ Thực hiện kháng sinh đồ đối với vi khuẩn/vi nấm gây bệnh.

Đọc kết quả:

Dương tính: Phân lập và định danh được vi khuẩn/vi nấm gây bệnh. Trả kết quả tên vi khuẩn/ vi nấm đến mức độ chi và/hoặc loài.

Âm tính: Không tìm thấy hoặc không phân lập được vi khuẩn/ vi nấm gây bệnh.

Phương pháp dùng thang màu chuẩn xác định clo dư.

Chuẩn bị mẫu

- Pha mẫu giả với nồng độ clo dư 5,1 mg/l.

- Pha dung dịch Fe (II) với nồng độ bằng 10mg/l.

- Bộ thang màu chuẩn gồm hai ống nghiệm dung tích 15 ml.

*Cách so màu: Ống nghiệm1: chứa vào 10 ml nước cất; ống nghiệm thứ 2 chứa dung dịch mẫu cần đo nồng độ clo dư.

Để hai ống nghiệm vào trong máy đo thang màu. Đổ thuốc thử màu vào ống nghiệm thứ 2 chứa mẫu cần xác định nồng độ clo dư. Lắc kỹ tan thuốc thử so màu với ống chuẩn thời gian khoảng 1-2 phút.

Thang màu chuẩn nồng độ clo trong khoảng 0 – 4,3 mg/l.