CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Đánh giá đặc tính cao dịch chiết ban đầu
3.2.1. Sắc ký lớp mỏng của các dịch chiết ban đầu
Chuẩn bị mẫu: Lấy 1ml dịch chiết cao của một mẫu cao dược liệu pha loãng với 5ml MeOH rồi trộn đều mẫu đó.Khai triển 19 mẫu trên cùng một bản mỏng với điều kiêṇ sắc kýnhư sau :
Pha tĩnh:Silicagel kích thước 10 x 20 cm.
Pha động: Etyl axetat : Nước : Acid formic : Acid acetic (100 : 26 : 11 : 11).
Thuốc thử: Dung dịch H2SO4 10% trong EtOH 96%: Cho từ từ 6ml H2SO4 (TT) vào 50ml EtOH 96%, lắc liên tục. Làm nguội, thêm EtOH 96% vừa đủ 100ml.
Tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng mỗi dung dịch Kết quả thu được như hình 3.1 và 3.2.
Hình 3.5. Kết quả phân tích TLC từ dịch chiết 19mẫu cao dược liệu gồm ANP02 (làn 01), ANP03 (Làn 02), ANP04 (Làn 03), ANP13 (Làn 04), ANP14 (Làn 05), ANP01 (Làn 06), ANP07 (Làn 07), ANP08 (Làn 08), ANP10 (Làn 09), ANP12 (Làn 10), ANL01 (Làn 11), ANL03(Làn 12), ANL05 (Làn 13), ANL07 (Làn 14), ANL08 (Làn 15), ANL09 (Làn 16), ANB10 (Làn 17), ANB18 (Làn 18), ANB19 (Làn 19) ở bước sóng 254nm
Hình 3.6. Kết quả phân tích TLC từ dịch chiết 19 mẫu cao dược liệu gồm ANP02 (làn 01), ANP03 (Làn 02), ANP04 (Làn 03), ANP13 (Làn 04), ANP14 (Làn 05), ANP01 (Làn 06), ANP07 (Làn 07), ANP08 (Làn 08), ANP10 (Làn 09), ANP12 (Làn 10), ANL01 (Làn 11), ANL03(Làn 12), ANL05 (Làn 13), ANL07 (Làn 14), ANL08 (Làn 15), ANL09 (Làn 16), ANB10 (Làn 17), ANB18 (Làn 18), ANB19 (Làn 19) ở bước sóng 366nm
Nhận xét và bàn luận: Với thuốc thử sử dụng, sắc ký lớp mỏng có thể đánh giá sự xuất hiện của các nhóm ví dụ như flavonoid, lignan hay phenol.
Những dịch chiết ANP13 và ANP14 có khả năng tạo nano bạc nhưng không có xuất hiện nhiều vết sáng màu khi quan sát tại bước sóng 366nm. Ngược lại, có những mẫu xuất hiện nhiều vết sáng màu nhưng lại không có khả năng tổng hợp hạt nano bạc.
ANP13, ANP14 cùng một họ Primulaceae, xuất hiện những vết giống nhau. Trong khi đó, ANP02, ANP03, ANP04 có sự xuất hiện nhiều vết hơn khi quan sát tại bước sóng 366nm. Từ các quan sát trên cho thấy các nhóm flavonoid, lignan hay phenol có thể ít ảnh hưởng tới khả năng tạo nano bạc khi so sánh giữa nhóm tạo được nano (làn 1-5) và không tạo nano (làn 6-19).
Tuy nhiên, cần nghiên cứu sâu hơn để khẳng định thêm kết luận này.
3.2.2. Kết quả định lƣợng flavonoid theo quercetin trong các mẫu dƣợc liệu tạo nano bạc
a)Xây dựng đường chuẩn Quercetin Kết quả:
Kết quả quan hệ tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ của quercetin tạibước sóng 415 nm trình bày ở bảng 3.2. Đồ thị đường chuẩn quercetin được thể hiện ở hình 3.3.
Bảng 3.2. Quan hệ tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ của quercetin tại bước sóng 415nm
STT Nồng độ quercetin (mg/ml)
1 0,5
2 0,25
3 0,125
4 0,0625
5 0,03125
Phương trình hồi quy tuyến tính: y = 5,2424x + 0,0813 ( R2 = 0,9952 )
.
Hình 3.7. Đồ thị đường chuẩn quercetin b) Tổng flavonoid trong mẫu
Kết quả định lượng flavonoid trong các mẫu dược liệu có khả năng tạo nano bạc được thể hiện trong bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả định lượng flavonoid trong các mẫu dược liệu có khả năng tạo nano bạc
Mẫu ANP02 ANP03 ANP04 ANP13 ANP14
Nhận xét và bàn luận:
Như thí nghiệm ở trên, nhóm flavonoid, lignan và phenol có thể không ảnh hưởng tới khả năng tạo nano bạc. Trong kết quả thí nghiệm này lại khẳng định thêm rằng tổng flavonoid theo quercetin cũng không ảnh hưởng tới kích thước tiểu phân nano bạc do hàm lượng tổng flavonoid trong cao gần như không có nhiều khác biệt.
3.2.3.Kết quả chống oxy hóa theo DPPH của cao chiết ban đầu
Cao ban đầu của các mẫu có khả năng tạo nano bạc được sử dụng để đánh giá khả năng chống oxy hoá theo mô hình DPPH. Bước đầu tiên, cao được đỏnh giỏ với nồng độ 100 àg (nồng độ cuối trong giếng). Mẫu nào cú thấp hơn 50 sẽ được sử dụng để thực hiện bước tiếp theo tìm giá trị IC50. Kết quả chỉ có 02 mẫu có khả năng chống oxy hoá mạnh để xác định giá trị IC50. Kết quả hàm biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và khả năng chống oxy hoá DPPH như sau:
Mẫu ANP02:
y = 0,0514x + 0,2629 R2 = 0,9756
Mẫu ANP04:
y = 0,0716x – 1,5941 R2 = 0,99
Từ các hàm trên, giá trị IC50 của 2 cao được biểu diễn trong bảng dưới đây.
Bảng 3.4. Khả năng chống oxy hóa của các cao chiết
Nhận xột và bàn luận: Giỏ trị IC50 của ANP02 là 4.61àg/ml, trong khi đú giỏ trị này của ANP04 là 29.25àg/ml. Như vậy, mẫu ANP02 vừa cú tiềm
năng tạo nano bạc vừa có khả năng chống oxy hoá mạnh. Từ đó, đề nghị nghiên cứu sâu hơn về mẫu ANP02 để phát triển sản phẩm.