CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Phương pháp nghiên cứu
2.4.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm gan, xơ gan của quả Dứa dại
* Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan:
Chuột nhắt trắng 25,0 2,0g được chia ngẫu nhiên thành 7 lô, mỗi lô 10 con:
Lô 1(chứng trắng) Uống dầu olive 0,1 ml/10g Lô 2 (mô hình viêm gan) Uống dầu olive + uống PAR
Lô 3 (chứng dương) Uống silymarin (70 mg/kg/ngày) + uống PAR
Lô 4 (CTP liều 1) Uống CTP liều tương đương với 7,2 g dược liệu/kg/ngày + uống PAR
Lô 5 (CTP liều 2) Uống CTP liều tương đương với 14,4 g dược liệu/kg/ngày + uống PAR
Lô 6 (PĐE liều 1) Uống PĐE liều tương đương với 7,2 g dược liệu/kg/ngày + uống PAR
Lô 7 (PĐE liều 2) Uống PĐE liều tương đương với 14,4 g dược liệu/kg/ngày + uống PAR
Chuột được uống dầu olive, silymarin hoặc mẫu thử liên tục trong 8 ngày.
Ngày thứ 8, sau uống thuốc 1 giờ (chuột được nhịn đói 16 - 18 giờ trước đó) gây tổn thương gan chuột ở các lô từ lô 2 đến lô 7 bằng uống paracetamol (PAR) liều 400 mg/kg, với thể tích 0,2 ml/10g. 48 giờ sau gây độc bằng PAR, lấy máu động mạch cảnh của chuột để xác định hoạt độ enzym AST, ALT và đồng thời lấy gan để quan sát mô bệnh học (đại thể, vi thể).
Sơ đồ thời gian làm thực nghiệm
* Nghiên cứu tác dụng làm tăng phục hồi tổn thương gan của quả Dứa dại Chuột nhắt trắng 25,0 2,0g, được chia thành 9 lô, mỗi lô 10 con.
Gây tổn thương gan chuột bằng uống PAR liều 400 mg/kg, với thể tích 0,2 ml/10g. Sau khi uống PAR 1 giờ, cho chuột uống dầu olive hoặc thuốc thử tương ứng với từng lô theo sơ đồ dưới đây:
Lô 1 (chứng trắng) Uống dầu olive 0,1 ml/10g Lô 2 (mô hình viêm gan) Uống PAR + uống dầu olive
Lô 3 (chứng dương) Uống PAR + uống silymarin (70 mg/kg/ngày) Lô 4 (CTP) Uống PAR + CTP liều tương đương với 7,2 g
dược liệu/kg/ngày
Lô 5 (PĐE) Uống PAR + PĐE liều tương đương với 7,2 g dược liệu/kg/ngày
Lô 6 (mô hình viêm gan) Uống PAR + uống dầu olive
Lô 7 (chứng dương) Uống PAR + uống silymarin (70 mg/kg/ngày) Lô 8 (CTP) Uống PAR + CTP liều tương đương với 7,2 g
dược liệu/kg/ ngày
ngày
lấy máu và gan uống PAR
Uống thuốc hoặc uống dầu olive
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Lô 9 (PĐE) Uống PAR + PĐE liều tương đương với 7,2 g dược liệu/kg/ ngày
Chuột ở các lô 1 (5 con), 2, 3, 4 và 5 được uống dầu olive hoặc thuốc thử trong 2 ngày. Chuột ở các lô 1 (5 con), 6, 7, 8 và 9 được uống dầu olive hoặc thuốc thử trong 4 ngày.
Sau 2 hoặc 4 ngày uống thuốc thử, lấy máu động mạch cảnh để xác định hoạt độ các enzym AST, ALT; lấy gan để quan sát mô bệnh học (đại thể, vi thể).
2.4.2.2. Nghiên cứu tác dụng chống xơ gan của quả Dứa dại
Chuột nhắt trắng chủng Swiss trọng lượng 25,0 ± 2,0 g được gây mô hình viêm gan mạn dẫn tới xơ gan bằng tiêm màng bụng carbon tetraclorid (CCl4) pha trong dầu olive liều 1,0 ml/kg, 2 lần/tuần trong 18 tuần. Thuốc thử hoặc thuốc chứng được uống hàng ngày trong 18 tuần (cùng thời gian tiêm CCl4).
Chuột nhắt trắng được chia thành 5 lô, mỗi lô 10 con.
Lô 1 (chứng trắng) Uống dầu olive thể tích 0,1 ml/10g
Lô 2 (mô hình) Tiêm màng bụng CCl4 1,0 ml/kg, 2 lần/tuần.
Uống dầu olive 0,1 ml/10g/ ngày
Lô 3 (chứng dương) Tiêm màng bụng CCl4 1,0 ml/kg, 2 lần/tuần.
Uống silymarin liều 70 mg/kg /ngày
Lô 4 (CTP) Tiêm màng bụng CCl4 1,0 ml/kg, 2 lần/tuần.
Uống CTP liều tương đương 7,2 g dược liệu/kg/ngày Lô 5 (PĐE) Tiêm màng bụng CCl4 1,0 ml/kg, 2 lần/tuần.
Uống PĐE liều tương đương 7,2 g dược liệu/kg/ngày Chuột được tiêm CCl4 và uống thuốc thử trong 18 tuần, tuần thứ 19 tiến hành mổ chuột, lấy máu và gan làm các xét nghiệm.
Các chỉ tiêu đánh giá:
- Trọng lượng chuột, trọng lượng tương đối của gan chuột (trọng lượng gan quy về 100 g thể trọng chuột).
- Đánh giá mức độ tổn thương gan và chức năng gan thông qua các hội chứng:
+ Hội chứng hủy hoại tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzym trong máu: ALT, AST
+ Hội chứng ứ mật thông qua định lượng bilirubin toàn phần.
+ Hội chứng suy tế bào gan thông qua định lượng albumin và cholesterol toàn phần trong máu.
- Huyết học: Số lượng bạch cầu, số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố.
- Định lượng collagen typ IV theo phương pháp bán định lượng - và định lượng hàm lượng hydroxyprolin trong gan chuột (thực hiện tại Viện 69 – Bộ Tư lệnh bảo vệ Lăng Chủ tịch Hồ Chí Minh).
- Mô bệnh học: Hình ảnh vi thể gan 5 chuột/lô, thực hiện tại Trung tâm Nghiên cứu và phát hiện sớm ung thư (do PGS.TS. Lê Đình Roanh đọc kết quả vi thể).