KSTSR bắt màu thuốc nhuộm giêm sa ở lam giọt dày (giọt đặc) và lam giọt mỏng (giọt đàn) dựa vào 5 yếu tố sau (Tối đa 5 yếu tố, tối thiểu 2 yếu tố ):
- Nhân (bắt màu đỏ) - Nguyên sinh chất (bắt màu xanh) - Hạt sắc tố (bắt màu đen hoặc nâu ánh vàng) - Khoảng không bào
- Đặc điểm của hồng cầu và hạt của hồng cầu bị ký sinh
Các thành phần của KSTSR trong một hồng cầu
2. So sánh sự khác nhau về hình thể của ký sinh trùng sốt rét P. falciparum và P.
vivax ở người trên tiêu bản máu giọt đàn nhuộm Giem sa
P. falciparum P. vivax
Hồng cầu ký
sinh
- Hồng cầu không thay đổi kích thước ở các giai đoạn phát triển của ký sinh trùng sốt rét.
- Có thể có hạt Maure bắt màu đỏ, số lượng ít, kích thưcớ to nhỏ không đều.
- Hồng cầu trương to méo mó.
- Có hạt Schuffner là những chấm nhỏ màu đỏ, nhiều, rải đều khắp hồng cầu bị ký sinh.
Thể tư dưỡng
trẻ
- Nhân tròn nhỏ chắc, bắt màu đỏ, nguyên sinh chất thanh mảnh bắt màu xanh da trời.
- Hình thể KST đa dạng : nhẫn, cánh nhạn, chấm phẩy, chấm than, hình khuyên.
- Đa ký sinh (2 - 5 ký sinh trùng ký sinh trong 1 hồng cầu).
- Thường thấy KST ở rìa hồng cầu.
- Có hình nhẫn 2 nhân
- Nhân to và thô, nguyên sinh chất không liên tục (NSC đứt đoạn), xốp hơn.
- Không đa dạng thường là hình nhẫn và hình dải lụa.
- Ít gặp.
- Ít gặp.
Thể tư dưỡng - Nhân to hơn, nguyên sinh chất ít phát
triển, thường gặp ở dạng cục rất ít - Nhân to hơn, nguyên sinh chất phát
triển mạnh, có nhiều chân giả nên hình
già
chân giả.
- Sắc tố hình que màu nâu đen ánh vàng.
- Rất hiếm gặp ở máu ngoại vi, có thể gặp trong trường hợp sốt rét nặng, sốt rét ác tính hoặc trên lam KSTSR nuôi cấy.
thể rất phong phú, có nhiều không bào lớn.
- Sắc tố hình chấm nhỏ màu nâu đen ánh vàng.
- Thường gặp ở máu ngoại vi
Thể phân liệt
- Nhiều mảnh (12 – 30 mảnh), mỗi mảnh có 1 nhân và 1 nguyên sinh chất.
- Sắc tố hình que màu nâu đen nhá vàng, thường tập trung thành từng tảng.
- Chỉ gặp ở máu ngoại vi trong những trường hợp bệnh nhân bị sốt rét nặng, sốt rét ác tính và KSTSR nuôi cấy.
- Khoảng 12 – 24 mảnh.
- Sắc tố là những chấm nhỏ màu nâu đen ánh vàng nằm rải rác.
- Thường gặp ở máu ngoại vi
Thể giao bào
- Nguyên sinh chất kéo dài hình chuối, liềm hoặc hình tròn, bắt màu xanh da trời.
- Nhân to xốp, màu đỏ nằm giữa nguyên sinh chất.
- Sắc tố hình que, màu nâu đen ánh vàng nằm trải trên nguyên sinh chất hoặc quanh nhân
- Nguyên sinh chất co tròn chiếm 1/2 - 1/3 hồng cầu ký sinh, không còn không bào.
- Nhân to xốp hình tròn hoặc hình bầu dục bắt màu đỏ thường nằm lệch - Sắc tố chấm mịn, màu nâu đen ánh
vàng trải đều trên nguyên sinh chất
3. Ghi kết quả
Nếu dương tính (+) cần phải ghi rõ loài, thể, mật độ KSTSR. Trên phiếu ghi kết quả xét nghiệm sẽ có các ký hiệu sau đây: Ftg+; Vtsg++; hoặc âm tính (-) Thí dụ: Ft++s+g++ ; Vt++g+++
Cách đọc và ý nghĩa của kết quả xét nghiệm
- P: Viết tắt của Plasmodium - F : Viết tắt của KSTSR falciparum - V : Viết tắt của KSTSR vivax - t : Thể tư dưỡng của KSTSR - s : Thể phân liệt của KSTSR - g : Thể giao bào của KSTSR.
- Dấu + : Chỉ mức độ KSTSR trong máu nhiều hay ít. Khi có nhiều dấu + là bệnh nhân có nhiều KSTSR trong máu (chỉ mức độ nặng của bệnh).
- Dấu (-) hoặc âm tính: Bệnh nhân không có KSTSR trong máu.
4. Tiêu chuẩn để chẩn đoán loại KSTSR trên tiêu bản
Để chẩn đoán loại KSTSR ta dựa vào đặc điểm hình thể của từng loài KSTSR, dựa vào đặc điểm hồng cầu bị ký sinh:
- Nếu soi một tiêu bản ta chỉ gặp thể tư dưỡng trẻ, yếu tố hồng cầu bị ký sinh không thay đổi kích thước thì ta kết luận là P.Ft ; nếu gặp thêm giao bào hình chuối hoặc hình lưỡi liềm thì kết luận P. Ftg càng trở nên chắc chắn.
- Nếu soi một tiêu bản ta gặp đủ các thể như: Tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già, phân liệt, giao bào. Kết hợp với yếu tố hồng cầu bị ký sinh trương to méo mó thì ta kết luận là P. Vtsg.
- Trên thực tế cũng có thể gặp những bệnh nhân cùng một lúc nhiễm 2 loại KST là: P. F và P. V thì ta kết luận là nhiễm phối hợp (P. Ftg + P. Vtsg)
6. Cách ghi kết quả xét nghiệm
- Dương tính với P. falciparum: P.f ; PF ; F - Dương tính với P. vivax: P.v ; P.V; V - Dương tính với P. malariae: P.m; PM; M - Dương tính với P. ovale: P.o; PO; O
a) P. falciparum:
- Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút trên tiêu bản giọt dày chỉ thấy toàn tư dưỡng trẻ. Kết luận Ft
- Nếu soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy thể tư dưỡng trẻ và giao bào chuối. Kết luận là Ftg.
- Nếu soi 200 vi trường thấy tư dưỡng trẻ, giao bào chuối và thể phân liệt. Kết luận Ftsg
b) P. vivax
Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy thể tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già, phân liệt, giao bào nằm trong hồng cầu trương to méo mó có hạt Schuffner. Kết luận Vtsg .
c) P. malariae
Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy thể tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già, phân liệt, giao bào nằm trong hồng cầu không trương to méo mó có hạt Maure, thể phân liệt hình hoa thị, hồng cầu không trương, dải khăn quàng vắt ngang hồng cầu. Kết luận Mtsg.
d) P. ovale
Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy thể tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già, phân liệt, giao bào. Hồng cầu trương to méo mó hình quả lê hoặc răng cưa, có hạt to thô. Kết luận Otsg .
e) Phối hợp P.falciparum và P.vivax
- Nếu soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy tư dưỡng trẻ của P.falciparum (thể rìa, nhẫn 2 nhân) và tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già và giao bào của P.vivax thì kết luận Ft + Vtg.
- Nếu soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút thấy giao bào chuối và tư dưỡng trẻ, tư dưỡng già, giao bào của P.vivax. Kết luận là Fg + Vtg.
f) Kết luận âm tính:
Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút trên tiêu bản giọt đặc không thấy KSTSR. Kết luận âm tính (-). Nếu bệnh nhân có sốt rét lâm sàng thì nên lấy máu xét nghiệm nhiều lần vào những lúc bệnh nhân đnag lên cơn sốt.
7. Các hình thể dễ nhầm với ký sinh trùng sốt rét
Những hình thể dễ nhầm với KSTSR có thể gặp trên tiêu bản trong khi soi kính hiển vi:
- Tiểu cầu đứng đơn độc có thể dễ nhầm với thể tư dưỡng trẻ của KSTSR.
- Tiểu cầu đứng tập trung có thể nhầm với thể phân liệt.
- Bạch cầu hạt dập nát có thể nhầm với thể tư dưỡng già, hạt đỏ của bạch cầu định tính có thể nhầm với nhân KSTSR.
- Hồng cầu lưới dễ nhầm với thể tư dưỡng già của P.vivax, hồng cầu hạt lưới dễ nhầm với thể phân liệt.
- Cặn Giem sa có thể nhầm với nhân của KSTSR.
- Một số hình giả như: nấm mốc, vi sinh vật đơn bào, nấm bào nang bay trong không khí được gió đưa đi, chúng đậu lại trên giọt máu trong quá trình máu chưa khô, trước khi nhuộm hay sau khi nhuộm và trong khi để khô máu đã nhuộm (có hình tròn hoặc hình bầu dục, hình lưỡi liềm có nhân ở giữa, dễ nhầm với thể giao bào của KSTSR).
- Một số khác được coi như là chất làm nhiễm bẩn giọt máu: do không lau sạch đầu ngón tay của bệnh nhân, bụi bẩn từ ngón tay đã làm nhiễm bẩn giọt máu cũng dễ gây ra các hình giả dễ nhầm với KSTSR.
BÀI 6
ĐẾM MẬT ĐỘ KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT TRÊN TIÊU BẢN MÁU NHUỘM GIEM SA
Có 3 phương pháp:
1. Phương pháp dùng hệ thống dấu cộng: Đến số ký sinh trùng trong 1 vi trường
hoặc 100 vi trường.
- Soi 100 vi trường có 1 - 10 KSTSR : Kết luận + - Soi 100 vi trường có 11 - 100 KSTSR : Kết luận ++
- Soi 1 vi trường có 1 - 10 KSTSR : Kết luận +++
- Soi 1 vi trường có trên 10 KSTSR : Kết luận ++++
Phương pháp này đơn giản, nhan, độ tin cậy tương đối (Với điều kiện 1 vi trường chuẩn: có 15 - 20 bạch cầu)
2. Phương pháp tính mật độ KSTSR trên lam giọt dày (Dựa vào số lượng bạch
cầu chuẩn).
Số lượng bạch cầu chuẩn của người được quy định là 8.000BC/ mm3
Đếm ký sinh trùng sốt rét trên lam giọt dày
a) Nếu đếm được 200 bạch cầu mà số lượng KST > 10 thì dừng và áp dụng công thức:
Số lượng KSTSR đếm được x số lượng bạch cầu chuẩn KSTSR/m3 =
Số bạch cầu đã đếm
b) Nếu đếm 200 bạch cầu mà số lượng KSTSR < 10 phải tiếp tục đếm cho đến 500 hoặc 1000 bạch cầu mới áp dụng công thức trên để tính số KSTSR/mm3.
c) Trường hợp mật độ KSTSR trên lam nhiều: Đếm chưa đủ 200 bạch cầu mà số lượng KSTSR ≥ 500 thì ta không đếm mà áp dụng công thức trên để tính số lượng KSTSR luôn.
Ưu điểm của phương pháp:
- Không cần các trang thiết bị đắt tiền.
- Dễ áp dụng ở mọi vùng (không cần điện).
- Dễ dàng xác định chủng loại và mật độ KSTSR, được ứng dụng nghiên cứu KSTSR kháng thuốc.
Nhược điểm:
- Đòi hỏi kỹ thuật viên có trình độ.
- Thời gian đào tạo lâu (1 tháng-3 tháng).
- Kết quả phụ thuộc vào các trang bị và kỹ thuật nhuộm (độ sáng của kính hiển vi, chất lượng lam nhuộm..).
3. Đếm ký sinh trùng trên lam giọt máu mỏng (dựa vào số lượng hồng cầu)
- Chỉ đếm KST trên lam giọt máu đàn khi không thể thực hiện được trên lam giọt máu đặc. Phương pháp này còn được thực hiện khi ước tính mật độ KST quỏ dày trờn 80.000 KST/àl, tương đương với 100 KST/àl trờn lam giọt mỏu đặc.
- Thực hiện như bước 1 trên giọt máu đặc.
- Cách đếm số lượng thể vô tính KSTSR trên giọt máu đàn:
+ Đếm ký sinh trùng ở 40 vi trường, số lượng hồng cầu ước tính trên mỗi vi trường khoảng 250 hồng cầu 40 x 250 = 10.000 hồng cầu;
+ Dùng 02 máy đếm: 01 máy đếm KST, 01 máy đếm hồng cầu;
+ Đếm toàn bộ số hồng cầu và số KST trong vi trường;
+ Đếm KST từ trái qua phải, từ dưới lên trên, cách 5 vi trường đếm 1 vi trường, để tránh bỏ sót hoặc lặp lại đảm bảo tính ngẫu nhiên trong quá trình đếm
Đếm ký sinh trùng trên lam giọt mỏng
+ Số lượng KST/àl mỏu trờn lam giọt mỏu đàn liờn quan tới số lượng hồng cầu chuẩn (số lượng hồng cầu chuẩn theo WHO khoảng 5.000.000 hồng cầu/àl);
+ Cụng thức tớnh số ký sinh trựng/àl mỏu:
Bắt đầu đếm
Số lượng KSTSR đếm được x 5.000.000 KSTSR/àl =
10.000