II. Sơ đồ tiến hành thí nghiệm:
PHẦN 2: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMI NC I Nguyên tắc:
I. Nguyên tắc:
- Acid ascorbic (Vitamin C) là một hợp chất chưa no có chứa nhóm endiol, acid ascorbic bị phá hủy rất nhanh dưới tác dụng của các chất oxy hóa và bền trong mơi trường acid.
- Phương pháp dựa trên nguyên tắc là acid ascorbic có khả năng oxy hóa khử thuận nghịch nhờ trong phân tử của nó chứa nhóm endiol.
- Phương pháp acid ascorbic được xác định bằng phương pháp chuẩn độ với KIO3/KI theo các phản ứng sau:
KIO3 + 5KI + 6HCl → 3I2 + 6KCl + 3H2O
II. Sơ đồ tiến hành thí nghiệm:
Vitamin C (mẫu ổi: cân 5g) Thêm 1 ít dd HCl 3% và nghiền Định mức 100ml bằng dd HCl 3% Hút 10 ml + 20 giọt chỉ thị hồ tinh bột 1%
Chuẩn độ vói dd KIO3/KI 0.001N Xuất hiện màu xanh đen
Lặp lại 3 lần
Chuẩn độ tương tự với mẫu đối chứng (thay 10ml dd mẫu bằng 10ml dd HCl 5%)
Số ml KIO3/KI 0.001N dùng định phân dịch chiết vitamin C (mẫu ổi 5g): V1 = 1.7 ml
V2 = 1.5 ml V3 = 1.6 ml
Số ml KIO3/KI 0.001N dùng định phân mẫu kiểm chứng: V1 =0.2 ml
V2 = 0.1 ml V3 = 0.2 ml
Vtb ≈ 0.167 ml
Tính hàm lượng vitamin C trong mẫu thí nghiệm:
X = (a−b )× 0.088 ×V đm ×100 =( 1.6− 0.167) ×0.088 ×100 ×100 =25.2208 mg/100 g 10 ×m10 × 5 Trong đó: X: Hàm lượng vitamin C (mg/100g)
a: Số ml KIO3/KI 0.001N dùng định phân dịch chiết vitamin C b:Số ml KIO3/KI 0.001N dùng định phân mẫu kiểm chứng
Vđm: Thể tích bình định mức (ml) m: Lượng mẫu thí nghiệm (g)
0.088: Số mg acid ascorbic ứng với 1 ml dung dịch KIO3/KI 0.001N
Nhận xét:
- Phản ứng oxy hóa khử tốt hơn so với chuẩn độ axit bazo vì có thêm axit trong trái cây, nhưng một số ít trong số chúng cản trở q trình oxy hóa axit ascorbic bởi iot
- tương đối khơng hịa tan, nhưng điều này có thể được cải thiện bằng cách Iốt tạo phức iốt với iốt để tạo thành triiodide
- Triiodide oxy hóa vitamin C để tạo thành axit dehydroascorbic
-Vitamin C có mặt trong dung dịch, triiodide được chuyển đổi thành ion iodide rất nhanh. Tuy nhiên, khi tất cả vitamin C bị oxy hóa, iốt và triiodide sẽ có mặt, các chất này phản ứng với tinh bột tạo thành phức màu xanh đen. Màu xanh đen là điểm cuối của quá trình chuẩn độ.
Một số phương pháp khác:
- Xác định vitamin C bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC):
+Nguyên tắc: Vitamin C được chiết ra khỏi mẫu phân tích bằng dung dịch axit metaphosphoric. Dùng dung dịch khử để chuyển axit ascorbic L(+) đã khử hydro thành axit ascorbic L(+). Hàm lượng axit ascorbic L(+) tổng số được xác định bằng HPLC có detector UV ở bước sóng 265 nm [1], [2].
- Xác định vitamin C bằng phương pháp Quality Assurance in Tropical Fruit Processing
+Nguyên tắc: Để xác định lượng vitamin C dựa theo phương pháp từ “Quality Assurance in Tropical Fruit Processing”. Phương pháp này dùng thuốc thử 2,6- dichloro-indophenol để chuẩn độ.