- Theo dõi tần số tim ựập (lần/phút): Chúng tôi dùng ống nghe nghe vùng tim chó.
2.3.6. Xác ựịnh ựộ mẫn cảm của vi khuẩn phân lập ựược từ ựường hô hấp ở chó viêm phổi với một số kháng sinh.
chó viêm phổi với một số kháng sinh.
Chúng tơi tiến hành theo kỹ thuật kháng sinh ựồ phương pháp Kirby Ờ bauer, tiêu chuẩn NCCLS, 1999.
* Nguyên lý:
- Là phương pháp khoanh giấy khuếch tán: sử dụng các khoanh giấy có tẩm các loại kháng sinh khác nhau sau ựó ựặt lên thạch, kháng sinh sẽ khuếch tán ra môi trường xung quanh.
+ Nếu vi khuẩn nhạy cảm với kháng sinh ựó thì nó sẽ khơng mọc xung quanh khoanh giấy.
+ Nếu vi khuẩn kháng với kháng sinh ựó thì nó sẽ mọc xung quanh khoanh giấy.
- Tùy thuộc vào từng loại kháng sinh với nồng ựộ kháng sinh tẩm ở mỗi khoanh giấy mà cách ựọc mức ựộ khác nhau (mẫn cảm cao: H; kháng: R; mẫn cảm trung bình: I) sau khi ựo ựường kắnh vịng vơ khuẩn.
* Cách tiến hành:
1 Pha huyễn dịch vi khuẩn. Nồng ựộ 0,5 mac-farland. 2 Dàn vi khuẩn.
+ Phương pháp 1: ria bằng tăm bông: nhúng tăm bông vào huyễn dịch vi khuẩn rồi nhấc lên và ép bớt huyễn dịch vào thành ống sau ựó kẻ 3 ựường chéo chia thạch thành 6 phần bằng nhau, tiếp tục ria vng góc với các ựường chéo rắc rắc từ trên xuống dưới sao cho kắn hết mặt thạch.
+ Phương pháp 2: láng ựĩa: nhỏ vào ựĩa thạch 0,5 - 1ml huyễn dịch vi khuẩn, láng ựều dịch cho phủ kắn mặt thạch sau ựó nghiêng ựĩa thạch chéo, dùng pipet vô trùng hút hết dịch thừa rồi ựể vào tủ ấm khoảng 15 phút ựể hông khô mặt thạch.
3 đặt khoanh giấy kháng sinh.
Lấy khoanh giấy kháng sinh ra khỏi tủ lạnh hoặc tủ ấm, không ựược mở nắp, ựể ở nhiệt ựộ phòng khoảng 1 giờ ựể ổn ựịnh và làm giảm hơi nước tắch tụ trên khoanh giấy kháng sinh.
Khoanh giấy kháng sinh ựược ựặt càng sớm càng tốt, trong vòng 15 phút sau khi láng vi khuẩn trên ựĩa thạch.
Sử dụng dụng cụ ựể ựặt kháng sinh (Disk-dispensing apparatus) dụng cụ này phải ựược ựóng nắp chặt, cất trở lại vào trong tủ lạnh và làm ấm ở nhiệt ựộ phòng trước khi sử dụng. Có thể sử dụng kẹp ựầu nhọn vơ trùng ựể ựặt từng khoanh giấy kháng sinh lên ựĩa thạch hoặc dùng dụng cụ ựể ựặt khoanh giấy kháng sinh nhẹ nhàng lên ựĩa thạch.
đặt khoanh giấy cách thành ựĩa 1cm và các khoanh giấy cách nhau ắt nhất 2cm.
Chú ý: + Không ựược ựánh rơi khoanh giấy xuống ựĩa thạch hoặc ựể khoanh giấy trên mặt thạch, sau khi ựặt khoanh giấy phải ựảm bảo khoanh giấy ựã ựược tiếp xúc hoàn toàn mặt ựĩa thạch.
+ Không nên ựặt quá 6 khoanh giấy lên ựĩa thạch 90mm.
+ Không di chuyển khoanh giấy khi ựó tiếp xúc với mặt thạch ựể tránh các vịng ức chế chồng chất lẫn nhau và có thể gây sai số khi ựo vòng ức chế.
để các ựĩa thạch ở nhiệt ựộ phòng trong 20 - 30 phút cho kháng sinh từ các khoanh giấy khuếch tán trên mặt thạch.
Lộn ngược các ựĩa thạch và ựể ủ ấm ở 370C trong vòng 18-24 giờ. 4 đọc và phân tắch kết quả.
Sau khi ủ ấm lấy các ựĩa thạch ra khỏi tủ ấm. đo và ghi lại kắch thước vịng vơ khuẩn (dựng thước ựo từ mặt sau của ựĩa và không ựược mở nắp) của chủng chuẩn.
So sánh kết quả của chủng chuẩn với bảng chuẩn. Nếu phù hợp nghĩa là qui trình thực hiện ựúng, tiếp tục ựọc kết quả vịng vơ khuẩn của chủng thử nghiệm. Nếu không phù hợp, qui trình thực hiện chưa ựúng hoặc hóa chất sinh phẩm hỏng, không phù hợp, cần phải tiến hành lại.
So sánh kắch thước vịng vơ khuẩn của chủng thử nghiệm với vịng ức chế chuẩn, sau ựó ghi lại kết quả của từng loại kháng sinh ựược thử nghiệm như là: mẫn cảm cao (H), mẫn cảm trung bình (I) và kháng (R).
Nếu có hiện tượng khuẩn lạc mọc trong vịng ức chế thì ựây có thể xuất hiện sự thay ựổi tắnh kháng của vi khuẩn hoặc do các huyễn dịch vi khuẩn bị trộn lẫn vào với nhau. Các khuẩn lạc này nên ựược nuôi cấy, phân lập và thử nghiệm lại tắnh nhạy cảm với kháng sinh.