CHƢƠNG II THỰC NGHIỆM
2.1. Đối tƣợng và phƣơng pháp nghiên cứu
2.1.1. Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu
Nguyên liệu để nghiên cứu gồm tồn bộ phần trên mặt đất của cây chó đẻ răng cưa, thu hái vào tháng 11 năm 2007 tại vùng giáp ranh giữa Huyện Đồng Hỷ và Thành Phố Thái Nguyên.
Cây chó đẻ răng cưa còn gọi là cây diệp hạ châu, dân địa phương gọi là diệp hòe thái, các nhà khoa học ở khoa Sinh trường ĐHSP Thái Nguyên xác định tên khoa học là “Phyllanthus urinaria L.”. Họ thầu dầu (Euphorbiaceae).
Mẫu cây tươi sau khi thu hái gồm cả thân, lá và quả được đem sấy ở 800C trong 10 phút để diệt men, sau đó sấy khô ở nhiệt độ 600C cho tới khi khơ hồn tồn. Mẫu khô được nghiền nhỏ và ngâm chiết trong etanol 90o
ở nhiệt độ phòng nhiều lần, liên tục trong 10 ngày.
Sau khi cất loại dung môi, cặn cô đến dưới dạng xirô được chiết lần lượt bằng các loại dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, etylaxetat, n- butanol, metanol. Các dịch chiết được đuổi kiệt dung môi bằng thiết bị cất quay ở nhiệt độ 500
C dưới áp suất thấp. Các cặn thô được phân chia bằng sắc kí cột với các hệ dung mơi rửa giải có độ phân cực tăng dần để phân lập các chất có độ phân cực gần giống nhau, kết tinh phân đoạn và kết tinh lại trong hệ dung mơi thích hợp để thu được các chất sạch .
2.1.2. Phương pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết
Để phát hiện, phân lập được những hợp chất sạch từ các dịch thơ khác nhau của cây chó đẻ răng cưa chúng tôi đã phối hợp sử dụng các phương pháp sắc kí và kết tinh lại trong dung mơi thích hợp các phương pháp gồm:
24
- Sắc kí lớp mỏng (SKLM).
- Sắc kí cột silicagen, thường dùng silicagen Merck 63- 200nm. - Kết tinh phân đoạn và kết tinh lại.
2.1.3. Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc hoá học các hợp chất
Các chất kết tinh phân lập ra được xác định những hằng số vật lý đặc trưng: màu sắc, mùi vị, hệ số Rf, điểm nóng chảy, ghi các loại phổ như: phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1
H- NMR, phổ 13C- NMR, phổ khối lượng (MS) và các phổ phân giải cao. Các số liệu phổ thực nghiệm của các chất sạch được dùng để nhận dạng cấu trúc hoá học của chúng.