Chương IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4 Nghiên cứu ứng dụng catalase điều chỉnh sinh lý bệnh do stress oy hóa gây ra trong
trong bệnh tiểu đường biến chứng tới võng mạc
Đầu tiên, nghiên cứu xác nhận khả dụng sinh học của CAT-SKL trong tế bào võng mạc. Các dòng tế bào Muller và RPE trong điều kiện mơi trường bình thường và glucose cao được xử lý bằng CAT-SKL được đánh dấu sinh học trong 0, 1, 2 và 4 giờ. Q trình truyền được quan sát thấy trong vịng 1 giờ sau khi ủ. Để xác nhận rằng CAT- SKL được chuyển nạp làm tăng catalase tế bào, protein đã được đo trong tế bào Muller và RPE bằng SDS-PAGE và sau đó được đánh dấu miễn dịch. Ngồi ra, hoạt động của catalase được đo bằng enzym cho thấy sự gia tăng đáng kể hoạt động của catalase khi được xử lý với 1 μM CAT-SKL trong 24 giờ. Các dịng tế bào Muller và RPE được ni cấy với nồng độ HG mãn tính cho thấy sự gia tăng mức H2O2 so với những dịng được ni cấy trong điều kiện NG. Quan trọng là, bổ sung catalase tế bào với CAT-SKL được tìm thấy để ngăn chặn sự tích tụ peroxide bất thường trong cả hai dịng tế bào. Hơn nữa, CAT-SKL không hoạt động về mặt enzym không gây ra ảnh hưởng đáng kể đến mức H2O2 của tế bào. Ngoài việc đo catalase và H2O2 gây tăng đường huyết trong tế bào, hoạt động của enzym catalase và q trình peroxy hóa lipid được đánh giá trong mơ sau khi chết. Hình 3.11A cho thấy sự gia tăng q trình peroxy hóa lipid trong gan chuột của những con chuột được điều trị bệnh tiểu đường so với đối chứng. Điều quan trọng là, điều trị chuột mắc bệnh tiểu đường với CAT-SKL (trong 3 tháng) làm giảm mức độ peroxy hóa lipid trong gan. Hoạt động của enzym catalase cũng bị giảm ở gan chuột mắc bệnh tiểu đường và tăng trở lại khi CAT-SKL được sử dụng cho chuột mắc bệnh tiểu đường (Hình 3.11B). Những kết quả này cho thấy rằng bổ sung catalase tế bào là một phương pháp điều trị hiệu quả để giảm mức độ tăng đường huyết do H2O2 trong tế bào võng mạc và trong mô. Điều quan trọng là, điều trị bằng chất ức chế tổng hợp polyamine, DFMO, khơng có tác dụng như vậy, cho thấy loại thuốc này khơng có tác dụng rộng rãi đối với khả năng chống oxy hóa của tế bào.
24
Hình 3.10: CAT-SKL làm giảm nồng độ lipid hydroperoxide và tăng hoạt động của catalase trong mô