3. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Phương pháp ựánh giá chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch
- đối tượng nghiên cứu ựược chia làm 2 nhóm bị (theo giống): + Nhóm 1: 05 bị ựực giống Brahman
+ Nhóm 2: 05 bị ựực giống Droughtmaster - Phương pháp áp dụng cho từng chỉ tiêu:
+ Lượng xuất tinh: Bằng quan sát trên ống ựong có chia vạch ml và ghi chép vào sổ sách.
+ Màu sắc tinh dịch: Dùng mắt quan sát màu sắc tinh dịch ngay sau khi lấy tinh và ghi chép vào sổ sách.
+ Nồng ựộ tinh trùng: Bằng máy so màu Photometer SDM5 của hãng MINITUB bằng cách dùng micropipét hút 0,02 ml tinh dịch pha loãng trong 4 ml nước muối sinh lý 0,9%, hơi lắc nhẹ cho ựều và ựưa vào máy Photometer SDM5. Chỉ số hiện trên máy là nồng ựộ tinh trùng (tỷ/ml).
+ Hoạt lực tinh trùng: đánh giá bằng kắnh hiển vi có kết nối với màn hình theo phương pháp của Nhật Bản: dùng micropipét hút 0,01 ml tinh dịch + 0,09 ml môi trường A rồi nhỏ lên phiến kắnh chuyên dụng, ựậy la men lên sau ựó ựưa lên kắnh hiển vi có gắn camera phóng ựại 100 lần và ựánh giá hoạt lực theo thang ựiểm 10 của Milovanov, cụ thể như sau:
Bảng 3.1: Thang ựiểm ựánh giá hoạt lực tinh trùng
A(ựiểm) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0
A(%) 5-15 15-25 25-35 35-45 45-55 55-65 65-75 75-85 85-95 95-100
+ pH tinh dịch: đo pH tinh dịch bằng giấy ựo pH của hãng Merck - đức.
+ Tỷ lệ tinh trùng sống: Theo phương pháp của Milovanov là nhỏ 1 giọt tinh dịch lên lam kắnh lõm + 2 giọt Eosin 5%, ựảo nhẹ rồi sau ựó nhỏ 4 giọt Nigrosin 10%. đảo nhẹ nhàng, ựể ấm 37oC trong 30 giây. Lấy 1 giọt phết kắnh dàn mỏng ựều ựưa lên kắnh hiển vi với ựộ phóng ựại 400 lần ựếm tổng số 500 tinh trùng rồi tắnh tỷ lệ %, bằng phép số học thông thường. Tinh trùng chết là những tinh trùng bắt màu ựỏ Eosin.
+ Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K): Bằng phương pháp nhuộm xanh methylen 5% khoảng 5 - 7 phút hoặc ựỏ Fucsin 5% khoảng 5 - 7 phút và ựếm tinh trùng kỳ hình và tinh trùng bình thường trên kắnh hiển vi 500 tinh trùng rồi tắnh toán bằng phép tắnh số học thông thường.
Số lượng tinh trùng kỳ hình
K (%) =
Tổng số tinh trùng ựếm ựược
x 100
+ Tổng số tinh trùng tiến thẳng trong tinh dịch/lần khai thác (VAC): Bằng cách nhân tắch số của V, A và C.