- Phõn loại hiện tượng rối loạn quỏ trỡnh sinh sản do nguyờn nhõn bệnh
4. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.3.2. Kết quả ủịnh lượng Progesterone
* động thỏi Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ để cú cơ sở nhận biết ủược sự thay ủổi về mặt sinh lý, sinh hoỏ trong cơ thể con vật, phỏt hiện ủược những bất thường về cỏc chỉ tiờu sinh sản của bũ, trước hết chỳng tụi tiến hành thăm dũ hàm lượng Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục của 5 bũ sữa sinh sản bỡnh thường, những bũ này sau khi ủẻ ủược theo dừi ủộng dục trở lại và lấy mẫu. Kết quả ủịnh lượng hàm lượng Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của 5 bũ này ủược chỳng tụi tổng kết và trỡnh bày ở bảng 4.11.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 63
Bảng 4.11. Hàm lượng Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ sữa (ŋg/ml)
Stt bũ Ngày 0 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 21
1 0,17 1,25 2,25 0,36 2 0,19 1,28 2,08 0,16 3 0,22 1,78 2,41 0,45 4 0,20 1,92 2,15 0,23 5 0,31 1,81 2,42 0,27 TB 0,22 ổ0,05 1,61 ổ0,21 2,26 ổ0,15 0,29 ổ0,11
Sự hỡnh thành và tiết Progesterone là khả năng ủặc trưng của thể vàng. Cỏc tài liệu nghiờn cứu về ủộng thỏi Progesterone ủều chỉ ra rằng: hàm lượng Progesterone trong dịch thể thấp nhất vào ngày ủộng dục, ủiều ủú cho thấy khụng cú sự tồn tại và tiết Progesterone của thể vàng. Sau ủú bắt ủầu tăng vào ngày thứ 3 Ờ 4 của chu kỳ, cao nhất vào khoảng ngày 13 Ờ 14, sau ủú giảm rất chậm, ủến ngày 17 - 19 thỡ giảm ủột ngột và ủạt mức thấp nhất vào ngày 20 - 21 của chu kỳ.
Qua bảng 4.11 chỳng tụi thấy: hàm lượng Progesterone biến ủộng theo ủỳng quy luật. Thấp nhất vào ngày ủộng dục (0,22 ổ 0,05 ŋg/ml), bắt ủầu tăng vào ngày thứ ba, kộo dài cho ủến ngày 14 ủạt cao nhất (2,26 ổ 0,15 ŋg/ml). Sau ủú giảm từ từ, ủến ngày 21 cũn 0,29ổ 0,11 ŋg/ml.
Kết quả của chỳng tụi thu ủược, cú cao hơn một chỳt nhưng vẫn phự hợp với quy luật và theo chỳng tụi sự chờnh lệch là khụng ủỏng kể so với cỏc kết quả nghiờn cứu của một số tỏc giả như: Phan Văn Kiểm và Cs (2003) [18] Hàm lượng Progesterone vào ngày ủộng dục (ngày 0) thấp nhất 0,15 ŋg/ml, bắt ủầu tăng lờn từ ngày thứ ba ủến ngày thứ sỏu ủạt 0,58 Ờ 1,24 ŋg/ml, ủạt cao nhất từ ngày thứ 12 - 15 (2,41 - 2,43 ŋg/ml), giảm nhanh từ ngày 18 (1,12 ŋg/ml) xuống cũn 0,21 ŋg/ml vào ngày 21.
Nghiờn cứu của Isobe (2002) [47] cũng cho thấy: hàm lượng Progesterone vào ngày ủộng dục là 0,17 ŋg/ml; ngày thứ 6 là: 1,10 ŋg/ml ;
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 64
ngày thứ 9 là: 1,70 ŋg/ml; ngày 12 là: 2,30 ŋg/ml; ngày 15 là: 2,55 ŋg/ml; ngày 18: 1,26 ŋg/ml; ngày 21: 0,22 ŋg/ml.
Sự biến ủộng của Progesterone phản ỏnh một cỏch trung thực tỡnh trạng hoạt ủộng của buồng trứng: vào ngày ủộng dục (ngày 0), trứng chớn nổi lờn bề mặt của buồng trứng, thể vàng chưa hỡnh thành nờn khụng cú Progesterone tiết ra, hàm lượng Progesterone rất thấp. Từ ngày 3 Ờ 5 thể vàng dần dần ủược hỡnh thành và bắt ủầu tiết Progesterone, hàm lượng Progesterone tăng lờn. Từ ngày 12 Ờ 15, thể vàng phỏt triển hoàn thiện và hoạt ủộng mạnh mẽ nhất, hàm lượng Progesterone tăng lờn cao nhất. Ngày 16 Ờ 17 của chu kỳ do trứng khụng ủược thụ tinh, PGF2α tiết ra từ nội mạc tử cung làm thể vàng dần dần teo ủi và giảm tiết Progesterone. đến ngày 21, thể vàng tiờu biến hoàn toàn và ngừng tiết ra Progesterone. Việc xỏc ủịnh ủộng thỏi Progesteronetrong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường cú ý nghĩa to lớn cả trong nghiờn cứu và trong thực tiễn, kết hợp với phương phỏp khỏm qua trực tràng, ta cú thể biết ủược một cỏch rừ ràng và chớnh xỏc tỡnh trạng hoạt ủộng của buồng trứng.
0.22 1.61 1.61 2.26 0.29 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 7 14 21 Ngày H à m lượng P ro ge s t e ro ne Series1
Hỡnh 4.3. động thỏi Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ sữa
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 65
động thỏi Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục ủược minh họa qua hỡnh 4.3
* Kết quả ủịnh lượng Progesterone trong cỏc trường hợp bũ bị rối loạn sinh sản
Cú nhiều nguyờn nhõn dẫn ủến rối loạn sinh sản ở bũ sữa. Thiểu năng buồng trứng cú thể xảy ra khi buồng trứng bị viờm lõu ngày khụng ủược ủiều trị, do dinh dưỡng kộm làm cho một phần hoặc toàn bộ buồng trứng khụng phỏt triển mà teo lại. Buồng trứng khụng hoạt ủộng, khụng cú trứng chớn và rụng nờn khụng hỡnh thành thể vàng, do vậy trường hợp này hàm lượng Progesterone thấp.
Buồng trứng cú u nang là khi trứng chớn nhưng do tế bào thượng bỡ của noón nang khụng vỡ ra ủược nờn khụng cú hiện tượng rụng trứng từ ủú thể vàng khụng hỡnh thành, do vậy hàm lượng Progesterone trong trường hợp này cũng rất thấp.
Buồng trứng cú u nang thể vàng do nội mạc tử cung khụng tiết ra ủược PGF2α nờn khụng phỏ vỡ ủược thể vàng ở chu kỳ trước ủú, thể vàng vẫn tồn tại và tiết ra Progesterone làm ức chế sự phỏt triển của nang trứng nờn cũng khụng cú hiện tượng ủộng dục và rụng trứng. Trong trường hợp này hàm lượng Progesterone trong sữa cao.
Rối loạn sinh sản mà nguyờn nhõn do buồng trứng là hiện tượng phổ biến trong chăn nuụi bũ sữa, nú làm ảnh hưởng khụng nhỏ ủến hiệu quả kinh tế cho người chăn nuụi. Hiện nay việc chẩn ủoỏn nguyờn nhõn do buồng trứng thường dựa vào phương phỏp khỏm qua trực tràng. Tuy nhiờn, phương phỏp này phụ thuộc rất nhiều vào trỡnh ủộ của người khỏm. đối với kỹ thuật viờn cú tay nghề cao, khụng khú ủể phõn biệt trường hợp thiểu năng buồng trứng với trường hợp buồng trứng cú khối u nhưng ủể phõn biệt trường hợp u noón nang với u thể vàng thỡ lại là một ủiều rất khú. Phương phỏp ELISA cho phộp phõn biệt hai trường hợp này chớnh xỏc ủến 100%.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 66
Dựa vào kết quả ủiều tra trong sổ sỏch của phũng kỹ thuật, cỏc dẫn tinh viờn, ủặc biệt dựa vào phương phỏp khỏm buồng trứng qua trực tràng, chỳng tụi xỏc ủịnh ủược bũ cú buồng trứng bất thường và những bũ này ủược chọn làm thớ nghiệm và tiến hành lấy mẫu.
Cỏc mẫu ủược lấy vào cỏc ngày 0 (ngày bất kỳ), ngày 7, ngày 14 và ngày 21. Kết quả ủịnh lượng ủược trỡnh bày ở bảng 4.12 và ủược minh hoạ bằng hỡnh 4.4.
Bảng 4.12. Hàm lượng Progesterone trong cỏc trường hợp chậm sinh do bệnh lý buồng trứng ở bũ sữa
Hàm lượng Progesterone (ŋg/ml) Cỏc trường
hợp
n
(con) Ngày 0 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 21
Biến ủộng 1,36 - 3,25 1,25 - 3,45 1,27 - 3,79 1,25 - 3,54 Cao 8 Trung bỡnh 1,82 ổ 0,25 1,80 ổ 0,22 1,79 ổ 0,21 1,77 ổ 0,22 Biến ủộng 0,12 - 0,81 0,12 - 0,78 0,13 - 0,80 0,11 - 0,78 Thấp 17 Trung bỡnh 0,38 ổ 0,04 0,42 ổ 0,06 0,41 ổ 0,05 0,39 ổ 0,04 Tăng dần 2 Trung bỡnh 0,54 ổ 0,25 0,83 ổ 0,27 1,42 ổ 0,51 2,14 ổ 0,56 Biến ủộng 1 1,48 0,6 1,2 1,7 Theo chu kỳ 1 0,21 1,5 2,12 0,38 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 7 14 21 Ngày H à m lượng P ro ge s t e ro ne Cao Thấp Tăng dần Biến ủộng Theo chu kỳ
Hỡnh 4.4. Hàm lượng Progesterone trong cỏc trường hợp chậm sinh do buồng trứng ở bũ
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 67
Qua bảng 4.12 và hỡnh 4.4 chỳng tụi xỏc ủịnh ủược 5 nhúm bũ. Nhúm thứ nhất cú hàm lượng Progesterone cao (> 1ŋg/ml) ở tất cả cỏc ngày lấy mẫu. Nhúm thứ hai cú hàm lượng Progesterone luụn thấp (<1 ŋg/ml). Nhúm thứ ba cú hàm lượng Progesterone tăng dần (từ 0,54 ổ 0,25 - 2,14 ổ 0,56 ŋg/ml). Nhúm thứ tư cú hàm lượng Progesterone giảm dần (từ 2,28 - 0,36 ŋg/ml) và nhúm thứ năm cú hàm lượng Progesterone biến ủộng theo chu kỳ bỡnh thường, tương ứng ở cỏc thời ủiểm lấy mẫu là 0,21 ŋg/ml; 1,50ŋg/ml; 2,12 ŋg/ml; 0,38 ŋg/ml.
Theo Nguyễn Tấn Anh (1995) [2], nồng ủộ Progesterone trong sữa bị ảnh hưởng trực tiếp của sự hỡnh thành và phỏt triển của thể vàng. Theo Isobe N (2002) [47], giới hạn > 1 ŋg/ml về nồng ủộ Progesterone ủỏnh dấu sự tồn tại và tiết Progesterone của thể vàng. Những nghiờn cứu của Phan Văn Kiểm và Cs (2003) [18] về hàm lượng Progesterone ở bũ rối loạn sinh sản tại Trung tõm nghiờn cứu bũ và ủồng cỏ Ba Vỡ, Trung tõm giống bũ sữa Cầu Diễn và xó Phự đổng Ờ Huyện Gia Lõm Ờ Hà Nội cho biết hàm lượng Progesterone ở bũ rối loạn sinh sản chia làm hai nhúm: nhúm cú hàm lượng Progesterone cao (>1 ŋg/ml) tương ứng ở cỏc ngày lấy mẫu 0, 7, 14, 21 là: 1,48 ổ 0,33 ŋg/ml; 1,62 ổ 0,45 ŋg/ml; 1,58 ổ 0,35 ŋg/ml; 1,51 ổ 0433 ŋg/ml. Nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone thấp (<1 ŋg/ml) tương ứng ở cỏc ngày lấy mẫu là: 0,08 ổ 0,05 ŋg/ml; 0,12 ổ 0,06 ŋg/ml; 0,16 ổ 0,05 ŋg/ml; 1,19 ổ 0,01 ŋg/ml. Cũn theo Nguyễn Quý Quỳnh Hoa (2003), khi nghiờn cứu nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản ở bũ tại Trung tõm nghiờn cứu bũ và ủồng cỏ Ba Vỡ và Trung tõm giống bũ Phự đổng cho biết: cỏc bũ bị bệnh buồng trứng kộm phỏt triển, u noón nang cú hàm lượng Progesterone thấp và dao ủộng từ 0,1 Ờ 0,64 ŋg/ml; bũ bị bệnh u thể vàng cú hàm lượng Progesterone cao và dao ủộng từ 1,45 Ờ 4,16 ŋg/ml. Từ ủú, chỳng tụi kết luận ủược rằng nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone cao (n = 12) cú thể vàng hoạt ủộng liờn tục trong tất cả cỏc thời ủiểm lấy mẫu hay núi cỏch khỏc là buồng trứng ở những bũ này cú
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 68
thể vàng tồn lưu. 21 con cú hàm lượng Progesterone thấp nghĩa là khụng cú sự tồn tại của thể vàng, trường hợp này cú thể do thiểu năng buồng trứng hoặc do buồng trứng cú u nang, 4 bũ cú buồng trứng hoạt ủộng bỡnh thường (hàm lượng Progesterone tăng dần, biến ủộng và theo chu kỳ). Nhúm bũ này cú thể do ủộng dục thầm lặng, ủộng dục vào ban ủờm hay do kỹ thuật phỏt hiện ủộng dục chưa chớnh xỏc nờn chưa ủược phối giống. Cũng cú thể những con này cú buồng trứng hoạt ủộng trở lại.
Nếu chỉ với phương phỏp ủịnh lượng ELISA trong cỏc trường hợp chậm sinh thỡ chỳng tụi chỉ phõn biệt ủược hai nhúm bũ: Nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone cao (>1ŋg/ml) và nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone thấp (<1 ŋg/ml). Nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone cao cú thể khẳng ủịnh do thể vàng tồn lưu nhưng nhúm bũ cú hàm lượng Progesterone thấp cú thể là do u nang hoặc do thiểu năng buồng trứng. Sau khi ủó ủịnh lượng Progesterone, việc phõn biệt hai trường hợp này trở nờn dễ dàng dựa vào cỏch khỏm buồng trứng qua trực tràng, do cấu trỳc buồng trứng hoàn toàn trỏi ngược nhau. Trường hợp thiểu năng buồng trứng thỡ sờ thấy buồng trứng nhỏ, nhẵn nhụi, ớt sần sựi và ủộ ủàn hồi kộm. Buồng trứng cú u nang thỡ to, sần sựi, cú u nổi lờn trờn bề mặt.
Mặt khỏc nếu chỉ chẩn ủoỏn bằng phương phỏp khỏm qua trực tràng thỡ ủộ chớnh xỏc khụng cao do cấu trỳc bề mặt buồng trứng trong trường hợp u nang và u thể vàng tương ủối giống nhau, hơn nữa khi khỏm qua trực tràng tay người khỏm bị ngăn cỏch với buồng trứng bởi găng tay và thành trực tràng nờn việc nhận biết càng trở nờn khú khăn hơn. Do vậy, cần thiết phải cú sự kết hợp giữa hai phương phỏp trờn ủể xỏc ủịnh ủược nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản một cỏch nhanh chúng và chớnh xỏc.
* Kết quả chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản bằng ủịnh lượng Progesterone kết hợp khỏm buồng trứng qua trực tràng
Việc chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loại sinh sản thụng qua ủịnh lượng Progesterone kết hợp với khỏm buồng trứng qua trực tràng ủó ủược nhiều tỏc
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 69
giả ủề cập ủến. Trong khuụn khổ của ủề tài, tất cả 29 bũ chậm ủộng dục lấy mẫu ủịnh lượng ủều ủược chỳng tụi khỏm buồng trứng qua trực tràng. Kết quả ủược trỡnh bày ở bảng 4.13.
Bảng 4.13. Kết quả chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản ở bũ sữa bằng ủịnh lượng Progesterone kết hợp khỏm buồng trứng qua trực tràng
Phương phỏp (n = 29) Hàm lượng Progesterone n (con) Khỏm qua trực tràng n (con) Kết luận Tỷ lệ (%) Cao 8 Cú u 8 Buồng trứng cú thể vàng 27,59
Cú u 9 đa nang buồng trứng 31,03
Thấp 17
Khụng cú u 8 Thiểu năng buồng trứng 27,59 Tăng dần 2 Biến ủộng 1 Theo chu kỳ 1 Bỡnh thường 4 Buồng trứng hoạt ủộng bỡnh thường 13,79 Tổng 29 100
Qua bảng 4.13 chỳng tụi thấy: cú 8 bũ cú hàm lượng Progesterone luụn cao ở tất cả cỏc thời ủiểm lấy mẫu, kết hợp với khỏm trực tràng cú u, chỳng tụi ủi ủến kết luận 8 con bũ này cú thể vàng tồn lưu chiếm tỷ lệ 27,59%; 9 bũ cú hàm lượng Progesterone thấp, cú u ủược khẳng ủịnh là ủa nang buồng trứng chiếm tỷ lệ 31,03%; 8 bũ cú hàm lượng Progesterone thấp, khụng cú u do buồng trứng kộm hoạt ủộng chiếm tỷ lệ 27,59% và 4 bũ cú buồng trứng hoạt ủộng bỡnh thường chiếm 13,79%, những con này chỳng tụi khụng tiếp tục nghiờn cứu mà khuyến cỏo người chăn nuụi nờn theo dừi chặt chẽ hơn.
Qua ủõy, chỳng tụi cú thể khẳng ủịnh: việc kết hợp giữa phương phỏp ELISA ủịnh lượng Progesterone và khỏm buồng trứng qua trực tràng làm cho việc chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản ở bũ sữa trở nờn dễ dàng, nhanh chúng và chớnh xỏc hơn nhiều so với trước ủõy. Việc chẩn ủoỏn chớnh xỏc giỳp ta cú những biện phỏp can thiệp kịp thời và ủỳng ủắn. đõy là một
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ........... 70
chẩn ủoỏn rất cú ý nghĩa bởi tỡnh trạng rối loạn sinh sản trong chăn nuụi bũ ở nước ta diễn ra với tỷ lệ khỏ cao, theo Tăng Xuõn Lưu và Cs (2003) [22] là 25 Ờ 30% gõy thiệt hại lớn cho người chăn nuụi. Chẩn ủoỏn chớnh xỏc nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản cú thể coi là chỡa khoỏ ủể nõng cao năng suất sinh sản trong chăn nuụi bũ sữa.